阿司匹林肠溶片

➢ n由色谱柱（固定相）性能决定 ➢ α主要受溶剂种类的影响，α=K2/K1=k2/k1 ➢ k受溶剂配比的影响。
3.洗脱方式 ♪ 等度洗脱（等浓度洗脱）
流动相所用的溶剂种类与配比恒定。 ♪ 梯度洗脱
在一定分析周期内，按一定程序，不断改变流 动相的浓度配比。提高分离效果。
4.流动相的强度和选择性 ♪ 流动性的极性与洗脱能力
余硅醇基的作用
MWD1 B, Sig=254,16 Ref =360,100 (YXD\EMO00084.D) mAU
12. 554
600
500Байду номын сангаас
400
300
200
2. 19 49 6 2 2.. 7 42 87 6 3. 689 6. 216 16. 010 18. 549
100
0
0
5
10
15
20
实训四 阿司匹林肠溶片的含量测定
高效液相色谱法基本理论知识 高效液相色谱仪的组成 高效液相色谱仪的操作 实训操作：高效液相色谱法测定阿司匹林肠溶 片的含量
液相色谱：经典液相色谱法

高效液相色谱法
高效液相色谱法的特点
高效液相色谱法
高压输送流动相 固定相粒度小、分布均匀
经典柱色谱法
无外加压力 固定相粒度大、分布不均
3.化学键合相的特点
➢使用过程中不流失 ➢化学稳定性好 ➢适于梯度洗脱 ➢载样量大
注意：
流动相的pH一般应在2-8，否则会引起硅胶溶解。
二、流动相：洗脱剂 1.要求
♪ 与固定相不发生化学反应 ♪ 对试样有适宜的溶解度 ♪ 纯度高，粘度小。 ♪ 与检测器相适应。
2.流动相对分离的影响
R n α -1 k2 4 α 1 k2
（1）非极性键合相
➢ 非极性烃基，如C18﹑C8﹑C1与苯基等键合在硅 胶表面。
➢ 用于反相色谱。
R1
Si OH + Cl Si C18H37
H Cl
R2
ODS键合相
R1
Si O Si C18H 37 R2
（2）弱极性键合相 ➢ 醚基和二羟基等键合相 ➢ 用于反相或正相色谱
（3）极性键合相： 常用氨基﹑氰基键合相（氰乙硅烷基 ≡Si(CH2)2CN)键合硅胶 一般用于正相色谱
色谱柱长度固定，内径小 色谱柱长度差别大，内径大
安装了在线检测器
未安装在线检测器
分离效能高，分析速度快 分离效能低，分析速度慢
高效液相色谱的基本原理
一、固定相：填充剂 1.特点：
♪ 颗粒细且均匀 ♪ 传质快 ♪ 机械强度高，能耐高压 ♪ 化学稳定性好，不与流动相发生化学反应
2.化学键合相：用化学反应的方法将固定液的官能 团键合在载体表面，多用硅胶作为载体。
25
min
仪器的重要组件
脱气 泵 进样阀
色谱柱
检测器 收集器
储液罐
自动 进样
控制系统
数据处理系统
高压输液泵
输送流动相
柱塞往复泵
多元梯度洗脱装置
六通进样阀 自动进样器
进样器
色谱柱
高效液相色谱系统中最重要的组件 包括柱管和固定相 主要柱参数：柱长、柱内径、粒径
检测器
正相色谱：溶剂极性越强，洗脱能力越强 反相色谱：极性弱的溶剂洗脱能力强 反相色谱首选纯溶剂：甲醇、乙腈和水的组合。
三、反相键合相色谱的分离条件 ♪ 固定相 非极性键合相，如ODS ♪ 流动相 以水为基础溶剂，加入甲醇、乙腈等
极性调节剂 ➢ 弱酸、弱碱或缓冲盐作为离子抑制剂 ➢ 加入0.1%－1%的醋酸盐、磷酸盐可减少残
（nm） （ml/min） （μl）
276
1
10
保留时间 峰面积 （min）
对照品
？
？
供试品
？
？
停止时间 流动相组成 （min）
15
已知数据
c=0.0100g/mL, W=1.4634g, m=0.0103g， S=mg/片
已知数据
c=0.1003mg/mL, W=1.4670g, m=0.0098g， S=25mg/片
溶剂过滤装置
Power
Drain(Open)
Purge
Pump
Power
实训操作
肠溶片：查阅药典（色谱条件；方法） 乙腈冲柱0.5h，流动相冲柱0.5h，进样 供试品，对照品的配制 记录峰面积 乙腈：水（10：90）冲柱1h，乙腈冲柱0.5h
实验数据
测定波长 流速
进样量
紫外检测器（UV）：应用最为普遍
固定波长、可变波长、二极管阵列（DAD）
蒸发光散射检测器：ELSD
仪器的操作
过滤溶剂、流动相并超声脱气 排气（开关、溶剂冲洗、Drain旋钮、Purge） 溶剂、流动相冲柱（更换溶剂时要重新排气） 打开检测器和色谱工作站（设置参数） 进样（过滤、反复润洗进样针、旋转手柄） 记录数据（保留时间、峰面积） 平衡系统 关闭仪器