土壤酶活性的测定
方法及部分样品配制详细请参考《土壤微生物分析方法手册》，《土壤酶及其研究法》
土壤样品采集与制备
土壤样品取样后混匀，用于土壤酶活性测定的土壤磨细过2mm筛后，置于4℃冰箱内保存备测。
1.土壤酶活性的测定方法
1.1.脲酶采用靛酚蓝比色法
方法原理：本法基于以尿素为基质，酶促水解生成的氨与酚类化合物起反应生成蓝色的靛酚，颜色深度与氨含量相关，用于尿酶活性的测定。
操作步骤：取10g风干土，置于100ml三角瓶中，加2ml甲苯，15min后加10ml 10%尿素液和20ml pH6.7柠檬酸盐缓冲液。摇匀后在37℃恒温箱中培养3h。按此操作，进行以水代替基质，及无土壤的基质对照测定，过滤后取0.5ml滤液于50ml比色管中，然后按绘制标准曲线显色方法进行比色测定。
氮的标液：精确称取0.4717g硫酸按溶于水并稀释至1000ml，则得1ml含0.1mg氮的标准液。绘制标准曲线时，可将此液稀释10倍供用。
pH6.7柠檬酸盐缓冲液：用368g柠檬酸溶于600ml水，另取295g氢氧化钾溶于水，再将二种溶液混合，然后用1M的氢氧化钠调节pH到6.7，定容到2L。
苯酚溶液：称取苯酚（C6H5OH）10g和硝基铁氰化钠[Na2Fe(CN)5NO2H2O]100mg稀释至1L。此试剂不稳定，须贮于棕色瓶中，在4℃冰箱中保存。
次氯酸钠碱性溶液：称取氢氧化钠（化学纯）10g、磷酸氢二钠（Na2HPO4·7H2O, 化学纯）7.06g、磷酸钠（Na3PO4·12H2O, 化学纯）31.8g 和52.5g·L-1次氯酸钠(NaOCl，化学纯，即含5%有效氯的漂白粉溶液)10mL 溶于水中，稀释至1L，贮于棕色瓶中，在4℃冰箱中保存。
标线绘制：取稀释的标准液0、l、2、4、6、8、10ml，移于50rnl容量瓶中，然后加入蒸馏水至20mL。再加4mL苯酸钠溶液和4mL次氯酸钠溶液，随加随摇匀。30min后显色，定容。在分光光度计上于578nm处比色。根据光密度值与溶液浓度绘制标线。
1.2.蔗糖酶采用磷钼酸比色法
方法原理：本法基于蔗糖酶酶解所得还原糖具有的还原性，能使磷钼酸络合物生成蓝色化合物，颜色强度与还原糖量相关，因而用比色测定还原糖量用于表示酶的活性。
操作步骤：称5g土，置于100ml三角瓶中，加入10ml 水，1ml甲苯。摇匀使土壤均有分散后，放置15分钟，加入15毫升5％蔗糖-磷酸缓冲液，摇匀混合物后，放入恒温箱，在37℃下培养24h。按此操作，用不加土壤的基质和150摄氏度干热灭菌1小时的土壤进行对照试验，吸取0.5ml滤液于50ml比色管中，按标准曲线步骤显色测定，
pH5.5磷酸缓冲液：1/15M磷酸氢二钠（11.867g Na2PO4•2H2O溶于1L蒸馏水中）0.5ml加1/15M 磷酸二氢钾（9.078KH2PO4溶于1L蒸馏水中）9.5ml即成。
钼酸铵溶液：a）5%钼酸铵溶液；b）200ml浓硫酸加入800ml水，使用前按1:1将a与b混合
5％蔗糖溶液（pH5.5磷酸缓冲液配制）
铜试剂：a）50gCuSO4·5H2O溶于500ml水；b）25gNa2CO3。25g酒石酸钾钠，20g NaHCO3和200gNa2SO4溶于水并稀释到1L，加几滴甲苯防腐，使用前按1:25将a与b混合。
标准糖溶液：将100毫克葡萄糖和100毫克果糖溶于水，稀释到200ml（1毫克还原糖/1毫升）
标准曲线的绘制：取不同体积，由0.5至50ml标准糖溶液于100ml容量瓶中，加入10ml醋酸缓冲液，用水稀释到刻度，从每瓶中取2.5ml溶于50ml容量瓶中，加入4ml铜试剂，摇匀，在烘箱内与105摄氏度左右放置25分钟，取出冷却至室温，依次加入2ml 0.25M磷酸氢二钠和5ml钼酸铵试剂，随加随摇匀，待二氧化碳逸出后，放置1小时，摇匀，于578nm处比色测定。
1.3.酸性磷酸酶采用磷酸苯二钠比色法
方法原理本法基于以磷酸苯二钠为基质，酶解释放出的酚，使其与氯代溴苯醌亚胺试剂反应生色，用比色法测定出游离酚量，用其表示酶的活性操作步骤：称2.5g风干土置于100mL三角瓶中，加1.25mL甲苯，轻摇15min 加入10mL 0.5%磷酸苯二钠（酸性磷酸酶用醋酸盐缓冲液，中性磷酸酶用柠檬酸盐缓冲液，碱性磷酸酶用硼酸盐缓冲液），仔细摇匀后放入恒温箱，在37℃下培养2h。后于培养液中加50mL 0.3%硫酸铝溶液并过滤，按此操作，进行以水代替基质，及无土壤的基质对照测定，吸取0.5mL滤液于50mL容量瓶中，然后按绘制标准曲线方法显色。于660nm处比色.
酚的标准溶液：
（1）酚原液：取1g重蒸酚溶于蒸馏水中，稀释至1L于棕色瓶中。
（2）酚工作液一取10ml酚原液稀释至1L，(每毫升含0.01mg酚)
标准曲线绘制：取0，l，2，4，6，8，10mL酚工作液，置于50mL容量瓶中，每瓶加入5ml缓冲液和4滴氯代二溴对苯醌亚胺试剂，显色后稀释至刻度，30min后，在比色计上波长660nm处比色测定。以光密度值为纵坐标，浓度为横坐标绘成标准曲线.
蔗糖酶所有的都要加基质，只是一份土是正常的，一份是在150摄氏度灭菌后的土
