三聚氰胺的检测方法

• 检测方法：①气相色谱质谱法（GC-MS） ②液相色谱串联质谱法（LC-MS-MS） ③高效液相色谱法(HPLC) 准确；成本高、操作复杂 ④ELISA——试剂盒检测，快速、简便、准确、灵敏度
高
二、原 理
• 采用间接竞争ELISA方法，在酶标板微孔条上预包被三聚 氰胺抗原，样本残留的三聚氰胺和微孔条上预包被的抗原 竞争三聚氰胺抗体，加入酶标二抗后，用TMB底物显色， 样本吸光值与其残留物三聚氰胺成负相关，与标准曲线比 较，再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样本中三聚氰胺 的含量。
牛奶中三聚氰胺 (Melamine)ELISA检测 以勤邦CA301试剂盒为例
农业部农产品质量安全监督检验测试中心（呼和浩特） 狄彩霞（13734715675） 047Baidu Nhomakorabea--5904559
内容
一、概要 二、原理 三、检测步骤 四、注意事项
一、概要
• 三聚氰胺（Melamine）简称三胺，是一种三嗪类含氮杂环有机化 合物，被用作化工原料。它是白色单斜晶体，几乎无味，微溶于 水、对身体有害，不可用于食品加工或食品添加物。长期或反复 大量摄入对肾与膀胱产生影响，导致产生结石。
三、检测步骤
1. 准备：试剂盒20℃回至室温，摇匀；配洗涤工作液—20倍浓缩 （1份浓缩洗涤液+19份去离子水），4℃下保存1个月。
2. 编号：取需要数量微孔板，将样本和标准品对应微孔编号； 3. 加液：加标准品、样本20µl；加酶标二抗50µl；再加抗体工作
液80µl；振荡混匀，盖板避光反应20min;
• 1ppm=1000ppb • 1ppb=1000ppt • ppm即：mg/L（毫克/升） • ppb即：ug/L（微克/升） • ppt即：ng/L（纳克/升）
4. 洗板：孔内液体甩干，每孔加洗涤液250µl，洗涤4-5次， 最后用吸水纸拍干；
5. 显色：加显色液A、B各50µl，混匀，盖板避光反应10min; 6. 测定：加终止液50µl，混匀，在酶标仪450nm读OD值。 7. 结果判定：标准品、样品输入软件计算
四、注意事项
1. 试剂盒选用不同，操作过程不同，请 按购买试剂盒说明操作；
2. 室温低于20℃或试剂及样本未回到室 温20-25℃，会导致OD偏低；
3. 每加一种试剂前要将其摇匀； 4. 不同批号试剂盒不要混用；
5. 试剂盒2-8℃保存； 6. 0标准的吸光度值小于0.5时，表示试
剂可能变质；
7. 加入底物液A、B后，一般显色10min， 若颜色较浅可延长反应时间到15min， 但不可超过20min，反之则减短反应时 间；