培养基适用性验证

造就基验证文件制Array药有限公司制药有限公司验证立项申请表验证计划的审批验证方案目录1.概述2.验证目标3.验证规模4.验证项目小构成员及职责5.验证及格尺度6.实验材料7.菌液制备8.实用性检讨9.验证记载10.验证结论及分解评价计数造就基实用性检讨的验证计划1. 验证目标：需氧菌.霉菌及酵母菌计数用的造就基应进行造就基的实用性检讨.本次验证的目标是确认胰酪大豆胨琼脂造就基和沙氏葡萄糖琼脂造就基是否合适需氧菌.霉菌及酵母菌总数测定.2. 参照尺度：《中国药典》2015年版四部1105非无菌产品微生物限度检讨法.3. 验证项目：胰酪大豆胨琼脂造就基和沙氏葡萄糖琼脂造就基的实用性检讨.4.验证小组人员及职责：～2规模内,且菌落形态大小与对比造就基上的菌落一致.6. 实验材料：6.1. 被验证产品：胰酪大豆胨琼脂造就基.沙氏葡萄糖琼脂造就基.6.2. 仪器装备：6.2.1. YXQ-LS-100G型立式压力蒸汽灭菌器6.2.2. GHT-00双人净化工作台6.2.3. BSC-110011A2-X 生物安然柜6.2.4.MJ-250I型霉菌造就箱 (20～25℃)6.2.5.LRH-250生化造就箱 (30～35℃)6.3. 验证用造就基6.4. 验证用菌株：(第代)7. 菌液制备按6.4划定程序造就各实验菌株.取金黄色葡萄球菌.铜绿假单胞菌.枯草芽孢杆菌.白色念珠菌的新颖造就物,用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液制成约为50~100cfu∕ml的菌悬液;取黑曲霉的新颖造就物参加3约为50~100cfu∕ml的黑曲霉孢子悬液.8. 实用性检讨：8.1. 取金黄色葡萄球菌.铜绿假单胞菌.枯草芽孢杆菌的菌液（50～100cfu/ml）各1ml,每株实验菌平行制备2个平皿,分离注入2个无菌平皿中,立刻倾泻胰酪大豆胨琼脂造就基,并作阴性对比,混匀,凝固,置30～35℃造就24小时,计数;取白色念珠菌的菌液（50～100cfu/ml）各1ml,分离注入2个无菌平皿中,立刻倾泻沙氏葡萄糖琼脂造就基,并作阴性对比,混匀,凝固,置20～25℃造就72小时,计数;取黑曲霉菌的菌液（50～100cfu/ml）1ml,注入无菌平皿中,立刻倾泻沙氏葡萄糖琼脂造就基,每株实验菌平行制备2个平皿,并作阴性对比,混匀,凝固,置20～25℃造就168小时,计数.8.2. 取金黄色葡萄球菌.铜绿假单胞菌.枯草芽孢杆菌的菌液（50～100cfu/ml）各1ml,分离注入无菌平皿中,立刻倾泻胰酪大豆胨琼脂对比造就基,每株实验菌平行制备2个平皿,并作阴性对比,混匀,凝固,置30～35℃造就24小时,计数;取白色念珠菌的菌液（50～100cfu/ml）各1ml,分离注入无菌平皿中,立刻倾泻沙氏葡萄糖琼脂对比造就基,每株实验菌平行制备2个平皿,并作阴性对比,混匀,凝固,置20～25℃造就72小时,计数;取黑曲霉菌的菌液（50～100cfu/ml）各1ml,分离注入无菌平皿中,立刻倾泻沙氏葡萄糖琼脂对比造就基,每株实验菌平行制备2个平皿,并作阴性对比,混匀,凝固,置20～25℃造就168小时,计数.9. 验证记载10. 验证结论及分解评价评价人：日期：附表1：计数造就基实用性检磨练证记载实验时光年代日完成时光年代日复核人实验人复核人实验人验证陈述的审批验证报告1. 验证目标：需氧菌.霉菌及酵母菌计数用的造就基应进行造就基的实用性检讨.本次验证的目标是确认胰酪大豆胨琼脂造就基和沙氏葡萄糖琼脂造就基是否合适需氧菌.霉菌及酵母菌总数测定.2. 参照尺度：《中国药典》2015年版四部1105非无菌产品微生物限度检讨法.3. 验证项目：胰酪大豆胨琼脂造就基和沙氏葡萄糖琼脂造就基的实用性检讨.4.验证小组人员及职责：～2规模内,且菌落形态大小与对比造就基上的菌落一致. 6. 实验材料：6.1. 被验证产品：胰酪大豆胨琼脂造就基.沙氏葡萄糖琼脂造就基. 6.2. 仪器装备：6.2.1. YXQ-LS-100G 型立式压力蒸汽灭菌器 6.2.2. GHT-00双人净化工作台 6.2.3. BSC-110011A2-X 生物安然柜 6.2.4.MJ-250I 型霉菌造就箱 (20～25℃) 6.2.5.LRH-250生化造就箱 (30～35℃)6.4. 验证用菌株：(第 代)7. 菌液制备按6.4划定程序造就各实验菌株.取金黄色葡萄球菌.铜绿假单胞菌.枯草芽孢杆菌.白色念珠菌的新颖造就物,用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液制成约为50~100cfu∕ml 的菌悬液;取黑曲霉的新颖造就物参加3约为50~100cfu∕ml的黑曲霉孢子悬液.8. 实用性检讨：8.1. 取金黄色葡萄球菌.铜绿假单胞菌.枯草芽孢杆菌的菌液（50～100cfu/ml）各1ml,每株实验菌平行制备2个平皿,分离注入2个无菌平皿中,立刻倾泻胰酪大豆胨琼脂造就基,并作阴性对比,混匀,凝固,置30～35℃造就24小时,计数;取白色念珠菌的菌液（50～100cfu/ml）各1ml,分离注入2个无菌平皿中,立刻倾泻沙氏葡萄糖琼脂造就基,并作阴性对比,混匀,凝固,置20～25℃造就72小时,计数;取黑曲霉菌的菌液（50～100cfu/ml）1ml,注入无菌平皿中,立刻倾泻沙氏葡萄糖琼脂造就基,每株实验菌平行制备2个平皿,并作阴性对比,混匀,凝固,置20～25℃造就168小时,计数.8.2. 取金黄色葡萄球菌.铜绿假单胞菌.枯草芽孢杆菌的菌液（50～100cfu/ml）各1ml,分离注入无菌平皿中,立刻倾泻胰酪大豆胨琼脂对比造就基,每株实验菌平行制备2个平皿,并作阴性对比,混匀,凝固,置30～35℃造就24小时,计数;取白色念珠菌的菌液（50～100cfu/ml）各1ml,分离注入无菌平皿中,立刻倾泻沙氏葡萄糖琼脂对比造就基,每株实验菌平行制备2个平皿,并作阴性对比,混匀,凝固,置20～25℃造就72小时,计数;取黑曲霉菌的菌液（50～100cfu/ml）各1ml,分离注入无菌平皿中,立刻倾泻沙氏葡萄糖琼脂对比造就基,每株实验菌平行制备2个平皿,并作阴性对比,混匀,凝固,置20～25℃造就168小时,计数.9. 验证记载10.验证结论及分解评价附表1：计数造就基实用性检磨练证记载实验时光年代日完成时光年代日复核人实验人复核人实验人制药有限公司验证证书。

控制菌检查用培养基适用性检查操作规程一、引言本操作规程旨在规范采用适用性检查方法验证控制菌检查用培养基的适用性的操作过程，确保检查结果准确可靠，提高微生物控制的有效性。

二、范围本操作规程适用于生物药品、食品、化妆品等行业的微生物控制实验室。

三、设备和试剂准备1.培养皿和管子：采用符合国家标准的试剂器皿。

2.培养基：根据实际需要选择合适的培养基，确保培养基的质量符合相关标准。

3.培养基密度标准液：用于调整培养基的密度。

4.液体融化装置：用于融化固体培养基。

5.无菌纸片和无菌棒：用于为菌液接种提供无菌工具。

6.灭菌器：用于灭菌培养器皿和试剂。

7.放射源：用于灭菌工作区域。

8.荧光显微镜：用于观察菌落生长。

9.消毒液和洗涤剂：用于清洗工作台和培养器皿。

四、操作步骤1.准备工作台和操作区域，进行必要的消毒和清洁。

2.准备所需的培养基和试剂。

3.确保培养基质量合格，根据需要使用培养基密度标准液调整培养基的密度。

4.打开培养基瓶盖，将培养基倒入清洁的培养皿或管子中，尽量避免有气泡产生。

5.放入灭菌器中进行灭菌，确保培养器皿和试剂的无菌状态。

6.露肩接种法将待测菌液接种于培养皿表面，接种菌液的体积应适量，避免过多或过少。

7.使用灭菌的无菌棒均匀涂抹接种菌液，确保菌液均匀分布在培养基表面。

8.均匀涂抹后，用无菌纸将菌液多余部分吸干。

9.将接种好的培养皿密封，放入恒温培养箱中进行培养，温度和时间根据具体培养基要求确定。

10.培养箱内的培养皿应避免震动和突然变化的温度。

11.培养一定时间后，取出培养皿进行观察。

12.使用荧光显微镜观察菌落生长情况，记录菌落数量和形态特征。

13.根据培养基的功能和使用要求，进行结论判断。

14.清洗灭菌培养器皿和试剂，彻底清洗工作区域，确保无菌状态。

五、质量控制1.确保培养基和试剂的质量符合相关标准。

2.使用灭菌的无菌器皿和试剂，避免污染。

3.严格控制接种菌液的体积，避免过多或过少的接种量。

培养基适用性检查方法的验证文件编号制订日期审核日期批准日期云南云科药业有限公司A：验证方案方案制订制订日期方案编号方案审核审核日期方案批准批准日期云南云科药业有限公司目录1．验证项目名称2．验证组织3．概述4．验证目的5．参照标准6．验证程序7．验证报告、评价及批准1．验证项目名称：培养基适用性检查方法的验证2．验证组织：姓名部门职务分工3．概述：通过验证以确认所采用的方法适合于培养基适用性检查。

根据培养基及菌的特性制订检验方法和检验条件，按制定的方法进行试验，根据验证结果判断是否符合验证标准。

若符合，按验证的方法和条件进行培养基适应性检查；若不符合，重新建立制订检验方法和检验条件，再进行验证，直至验证结果符合设立的验证标准。

4．验证目的：细菌、霉菌及酵母菌计数用培养基应进行培养基的适用性检查。

验证的目的是确认营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基适合细菌、霉菌及酵母菌数测定。

（确认所采用的方法适合于培养基适应性检查，为了保证检验结果的准确性，对现有的检验方法进行验证。

）5．参照标准：2010年版《中国药典》二部附录ⅪJ 计数培养基的适用性检查。

6.验证程序：6.1适用范围：适用于培养基适用性检查。

6.2被验证产品：营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基。

6.3试验材料：6.4试验菌株：6.5合格标准：被检培养基上的菌落平均数不小于对照培养基上的菌落平均数的70%，且菌落形态大小与对照培养基上的菌落一致。

6.6验证方法：培养基在使用前应进行适用性的检查，通过对被检培养基上的菌落与对照培养基上的菌落比较，以确认所采用方法的可行性。

6.6.1菌液的制备：6.6.1.1 接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，于30～35℃培养18～24小时。

取上述营养肉汤新鲜培养物1ml加入9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，10倍稀释至10-5～10-7约为50～100cfu/ml的菌悬液备用。

培养基灵敏度及适⽤性检查操作规程1. ⽬的：通过培养基适⽤性检查，确保购买的培养基符合实验要求。

2. 范围：本规程适⽤于技术质量部实验员对培养基适⽤性的检查。

3. 职责：质量部实验员负责执⾏此规程。

4. 内容：4.1 检验依据：《中华⼈民共和国药典》2015版4.2 试验⽤具：烧杯、三⾓瓶、酒精灯、接种环、平⽫、试管、吸管、移液枪、滴管、电⼦天平、电热恒温培养箱、⽣化培养箱或恒温恒湿培养箱、单⼈净化⼯作台、⾼压蒸汽灭菌器、微⽣物限度仪、漩涡混合器、试验菌种、检查⽤培养基等。

4.3 ⽆菌培养基适⽤性检查：本检查可在供试品的⽆菌检查前或与供试品的⽆菌检查同时进⾏。

4.3.1 培养基：硫⼄醇酸盐流体培养基、胰酪⼤⾖胨液体培养基或胰酪⼤⾖胨琼脂培养基（培养基的配制按《培养基配制操作规程》配制）。

4.3.2 稀释液、冲洗液及其制备⽅法稀释液、冲洗液配制后应采⽤验证合格的灭菌程序灭菌。

a) 0.1%⽆菌蛋⽩胨⽔溶液取蛋⽩胨1.0g，加⽔1000ml，微温溶解，滤清，调节pH值⾄7.1±0.2，分装，灭菌。

b) pH7.0⽆菌氯化钠-蛋⽩胨缓冲液取磷酸⼆氢钾3.56g，⽆⽔磷酸氢⼆钠5.77g，氯化钠4.30g，蛋⽩胨1.00g，加⽔1000ml，微温溶解，滤清，分装，灭菌。

c) 根据供试品的特性，可选⽤其他经验证过的适宜的溶液作为稀释液、冲洗液（如0.9%⽆菌氯化钠溶液）。

如需要，可在上述稀释液或冲洗液的灭菌前或灭菌后加⼊表⾯活性剂或中和剂等。

4.3.3 ⽆菌性检查：每批培养基随机取不少于5⽀（瓶），置各培养基规定的温度培养14天，应⽆菌⽣长。

4.3.4 灵敏度检查4.3.4.1 菌种培养基灵敏度检查所⽤的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中⼼获得的⼲燥菌种为第0 代），并采⽤适宜的菌种保藏技术进⾏保存，以保证试验菌株的⽣物学特性。

⾦黄⾊葡萄球菌（Staphylococcus aureus ）〔CMCC（B）26 003〕铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa ）〔CMCC（B）10 104〕枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）〔CMCC（B）63 501〕⽣孢梭菌（Clostridium sporogenes）〔CMCC（B）64 941〕⽩⾊念珠菌（Candida albicans）〔CMCC（F）98 001〕⿊曲霉（Aspergillus niger）〔CMCC（F）98 003〕4.3.4.2 菌液制备a) 接种⾦黄⾊葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物⾄胰酪⼤⾖胨液体培养基中或胰酪⼤⾖胨琼脂培养基上，接种⽣孢梭菌的新鲜培养物⾄硫⼄醇酸盐流体培养基中，30～35℃培养18～24⼩时；b) 接种⽩⾊念珠菌的新鲜培养物⾄沙⽒葡萄糖液体培养基中或沙⽒葡萄糖琼脂培养基上，20～25℃培养24～48⼩时，上述培养物⽤pH7.0⽆菌氯化钠-蛋⽩胨缓冲液或0.9%⽆菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数⼩于100cfu（菌落形成单位）的菌悬液。

编号: AB/06-31-B培养基适用性验证方案计数培养基****药厂有限公司标题培养基适用性验证方案编号AB/06-31-B页码共5页、第1页执行200 年月日颁发部门GMP综合办公室分发部门行政管理办公室分发数起草人起草日期审核人审核日期批准人批准日期目录1. 概述 (2)2. 验证目的 (2)3. 验证的范围 (2)4. 验证人员及职责 (2)5. 验证程序和方法 (2)6. 验证可接受的标准 (3)7. 验证步骤 (3)8. 结果分析及评价： (4)9. 验证报告 (5)10. 建议 (5)11. 最准批准 (5)12. 所使用的记录 (6)1. 验证目的：细菌、霉菌及酵母菌计数用的培养基应进行培养基的适用性检查。

本次验证的目的是确认营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基适合细菌、霉菌及酵母菌数测定。

2. 参照标准：2010版中国药典二部附录XI J微生物限度检查法。

3. 验证项目：营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基的适用性检查。

4.验证小组人员及职责：4.1验证小组人员:4.2验证人员职责及要求4.2.1按验证方案及相关文件实施验证。

4.2.2认真观察并做好验证原始记录。

4.2.3对实施验证的结果负责。

4.3验证中各部门的职责4.3.1验证领导组职责4.3.1.1制订验证总计划，负责全公司验证工作的管理。

4.3.1.2确定验证项目及验证项目负责人。

4.3.1.3负责验证方案的批准工作。

4.3.1.4负责验证资料及结果的审核工作。

4.3.1.5负责验证报告的批准工作。

4.3.2验证工作小组职责4.3.2.1负责验证方案的起草工作。

4.3.2.2参与验证方案的讨论、确认工作。

4.3.2.3负责验证方案的实施。

4.3.2.4负责验证结果的分析、统计、报告工作。

4.3.2.5参与验证结果的评价工作。

4.3.3质量部职责4.3.3.1负责公司验证日常管理工作。

4.3.3.2负责验证方案的审核工作。

4.3.3.3负责验证过程中仪器、仪表、计量器具的校验工作。

培养基适用性验证方案培养基适用性验证是指在培养基的研发过程中，通过实验验证培养基的适用性和质量。

这一过程对于生物学、医学等领域研究以及工业生产来说非常重要。

本文将介绍一个基本的培养基适用性验证方案，以确保培养基的质量和有效性。

一、实验目的1.验证培养基中各种成分的适用性和稳定性；2.测试培养基对细胞或微生物的生长和增殖的支持程度；3.评估培养基对细胞或微生物的表型和基因表达的影响；4.了解培养基的理化指标，如pH值、渗透压等。

二、实验步骤1.准备培养基和试样：根据所研究的生物体或微生物的需要，准备相应的培养基，包括成分和浓度。

同时，准备不同的试样，如细胞或微生物的悬浮液或分离物等，用于验证培养基的适用性。

2.测定培养基理化指标：测定培养基的理化指标，如pH值、渗透压、离子浓度等，确保其在范围内。

3.测定培养基对细胞或微生物的生长和增殖的支持程度：将细胞或微生物接种于培养基中，通过监测生物体的生长曲线、增殖速率等参数来评估培养基对其的支持程度。

可以使用细胞计数仪、显微镜等工具进行观察和计数。

4.评估培养基对细胞或微生物的表型和基因表达的影响：通过观察生物体的形态、结构、活力等方面，了解培养基对其表型的影响。

同时，可以通过转录组分析、蛋白质组分析等手段，评估培养基对基因表达的影响。

5.验证培养基的稳定性：将培养基保存一段时间后，再次进行生物体的培养和生长实验，以验证培养基的稳定性和持久性。

6.数据分析和结果呈现：对实验结果进行统计分析，包括均值、标准差等指标，通过图表、表格等形式呈现实验结果。

三、实验注意事项1.实验室条件要符合要求，包括洁净无菌、合适的温度和湿度等；2.培养基的配制要精确，注意称量和混合时间；3.使用无菌技术和条件进行细胞或微生物的接种和培养；4.实验过程中要使用适当的控制组和重复实验，以确保实验结果的可靠性和准确性；5.实验过程中要严格按照操作规程和实验流程进行，避免误操作和实验结果的偏差。

培养基适用性验证方案编制:审核:批准:1.验证目的：本次验证的目的是确认无菌检查、微生物限度检查、控制菌检查用培养基应进行培养基的适用性检查，符合灵敏度要求。

2.参照标准2010版中国药典二部附录：XII A无菌检查法和XI G微生物限度检查法。

3.验证项目无菌检查、微生物限度检查、控制菌检查用培养基的适用性检查。

45.前提条件确认5.1所有本次验证实施过程中用到的仪器都已经过计量并且在计量有效期内。

5. 2所有参与本次验证的公司人员均进行相关培训6.接受标准6.1.液体培养基促生长能力检査：被检培养基与对照培养基管比较，被检培养基管试验菌应生长良好。

6.2.液体培养基指示能力桧查：与对照培养基管比较，被检培养基管试验菌生长情况、指示剂反应等应与对照培养基一致。

6.3.固体培养基促生长能力检査：被检培养基与对照培养基上生长的菌落大小、形态特征应一致。

6.4.固体培养基指示能力检査：被检培养基上试验菌生长的菌落大小、形态特征、指示剂反应情况等应与对照培养基一致。

6.5.培养基抑制能力检査：试验菌应不得生长。

6.6.无菌性检查：应不得有菌生长。

6・7・被检培养基上的菌落数不小于对照培养基上的菌落平均数的 生长的菌落大小、形态特征应一致。

7. 验证实施7.1 •试验用仪器和物料所用培养皿、移液管、工器具均应严格按照相关的灭菌程序灭菌；生物安全柜、灭菌器、霉菌培 养箱、生化培养箱、水浴锅、电热鼓风干燥箱等。

72验证用培养基及试剂适用性检查:70%,且74测试菌悬液菌液制备接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽抱杆菌、铜绿假单胞菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，于30〜35 ° C培养18〜24小时。

分别取上述新鲜培养物用0. 9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数50^100cful的菌悬液。

接种生抱梭菌至硫乙醇酸盐流体培养基中，30〜35 C培养18〜24小时。

上述新鲜培养物用0. 9%无菌氯化钠溶液制成每lml含菌数lO^lOOcfu的菌悬液。

.培养基适用性验证方案起草人：方案审核人：方案批准人：XXXXX药业股份有限公司目录1. 验证目的 (2)2. 参照标准 (2)3. 验证项目 (2)4. 验证小组人员及职责 (3)5. 验证可接受的标准 (3)6. 验证步骤 (3)7. 菌液制备 (6)8. 适用性检查 (6)9. 控制菌检查 (7)10. 操作方法 (8)11.结论 (11)1. 验证目的：需氧菌、霉菌及酵母菌计数用的培养基及控制菌培养基应进行培养基的适用性检查。

本次验证的目的是确认胰酪大豆胨琼脂培养基和沙氏葡萄糖琼脂培养基适合需氧菌、霉菌及酵母菌总数及测定和控制菌适用性检查。

2. 参照标准：2015版中国药典微生物限度检查法。

3. 验证项目：营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基的适用性检查和控制菌适用性检查。

4.验证小组人员及职责：4.14.2验证人员职责及要求4.2.1按验证方案及相关文件实施验证。

4.2.2认真观察并做好验证原始记录。

4.2.3对实施验证的结果负责。

4.3验证中各部门的职责4.3.1验证领导组职责4.3.1.1制订验证总计划，负责全公司验证工作的管理。

4.3.1.2确定验证项目及验证项目负责人。

4.3.1.3负责验证方案的批准工作。

4.3.1.4负责验证资料及结果的审核工作。

4.3.1.5负责验证报告的批准工作。

4.3.2验证工作小组职责4.3.2.1负责验证方案的起草工作。

4.3.2.2参与验证方案的讨论、确认工作。

4.3.2.3负责验证方案的实施。

4.3.2.4负责验证结果的分析、统计、报告工作。

4.3.2.5参与验证结果的评价工作。

4.3.3质量部职责4.3.3.1负责验证方案的审核工作。

4.3.3.2负责验证过程中仪器、仪表、计量器具的校验工作。

4.3.3.3负责验证中各项检测工作，提供验证的检验记录、检验报告，对验证过程中的各项检验工作负责。

4.3.3.4负责验证资料和报告的审核工作。

4.3.3.5负责验证文件回收、归档管理工作。

纯化水需氧菌总数计数用培养基适用性检查验证方案纯化水需要氧菌总数计数，是用来检查水中的氧需求微生物的数量。

这项检测可以确认水样品的纯度和卫生质量，以确保水可以安全使用。

本文将介绍一种用于验证纯化水需氧菌总数计数用培养基的适用性的方法，包括准备培养基、验证培养基的选择以及验证培养基性能的实验方案。

1.准备培养基首先，需要选择适用于需氧菌的培养基。

通常使用含有可溶性碳源和其他适当营养物质的培养基。

常用的培养基有碳水化合物培养基、富含氨基酸的培养基等。

可以根据具体需求来选择合适的培养基。

2.培养基选择验证为了验证培养基的选择是否适用于需氧菌的计数，可以进行以下实验验证。

2.1.培养基对需氧菌的支持能力验证：将需氧菌接种在待验证的培养基上，并进行恒温（通常在30-37°C 之间）和恒氧（使用压力式培养器或其他适当方法）条件下的培养。

培养一段时间（通常为24-48小时），观察生长情况。

如果培养基能够支持需氧菌的生长并产生可见的生长，说明培养基是适合用于需氧菌计数的。

2.2.培养基对其他微生物的选择性验证：将其他非需氧菌或其他微生物接种在待验证的培养基上，并进行相同的培养条件下的培养。

观察生长情况，如果其他微生物能够在该培养基上生长，说明培养基存在选择性差异性，可能不适用于需氧菌计数。

3.验证培养基性能实验方案在验证培养基适用性之后，可以进行以下实验方案来验证培养基性能。

3.1.验证培养基的灵敏度：根据纯化水需氧菌总数预期浓度的范围，使用不同的稀释比例将水样接种在培养基上。

根据菌落形成情况和数量，可以确定培养基的灵敏度。

通常，预期浓度越高，菌落数量越多。

3.2.验证培养基的线性范围：在一定的时间内，使用不同浓度的需氧菌接种培养基，观察菌落数量和接种浓度的关系。

如果菌落数量和接种浓度呈线性关系，则说明培养基的线性范围较好。

3.3.验证培养基的重复性：使用相同浓度的需氧菌接种培养基的多个平行样品，进行培养。

培养基适用性验证方案编制人：________________ 日期：_________________ 审核人：________________ 日期：_________________批准人：________________ 日期：_________________目录1. 概述2. 验证目的3. 验证依据4. 验证项目5. 验证小组成员及职责6. 验证时间7. 验证材料8. 验证内容8.1.无菌检查用培养基适用性验证8.2.计数用培养基适用性验证9. 验证方案的评定与建议10. 验证方案的最终审核意见培养基适用性验证报告1.概述培养基是无菌检查和微生物限度检查的关键物品之一，培养基的是否符合检验要求，影响着检验结果的准确性、有效性。

2.验证目的验证培养基是否符合检验要求3.验证依据《中国药典》2015版通则1101生物检查法4.验证项目无菌检查用培养基：硫乙醇酸盐流体培养基、胰酪大豆胨液体培养基、营养肉汤；计数用培养基：胰酪大豆胨琼脂培养基、沙式葡萄糖琼脂培养基、R2A琼脂培养基、大豆酪蛋白琼脂培养基5.验证小组成员6.验证时间本次验证于2016年1月18日开始进行，将于2016年1月22日完成7.验证材料7.1.仪器设备手提式压力蒸汽灭菌器、生物安全柜、生化培养箱、霉菌培养箱、电热鼓风干燥箱、净化工作台7.2.对照培养基胰酪大豆胨琼脂对照培养基、沙式葡萄糖琼脂对照培养基、R2A琼脂对照培养基、大豆酪蛋白琼脂对照培养基7.3.其他器具酒精灯、试管、75%乙醇、灭菌刻度吸量管(1ml)、灭菌硼硅酸玻璃培养皿(© 90mr K 15mm)、锥形瓶，移液器，无菌吸头等。

7.4. 菌种金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、生孢梭菌、黑曲霉、白色念珠菌；8. 验证内容8.1.无菌检查用培养基适用性验证8.1.1. 无菌性验证随机选取灭菌后硫乙醇酸盐流体培养基及改良马丁培养基各5 瓶，并对培养基分别编号。

培养基适用性检查记录一、实验目的本实验旨在检查培养基的适用性，包括其成分是否合适、无污染、无毒性，并能够提供对所需生物体的适宜环境。

二、实验材料和仪器1.培养基样品：包括液体培养基和固体培养基。

2.培养基成分：包括蛋白胨、琼脂、糖类、无机盐等。

3.实验生物体：包括细菌、酵母菌等。

4.培养基制备器具：包括培养皿、试管、移液器、烧杯等。

5.实验室基本设备：包括电子天平、离心机、恒温培养箱等。

三、实验步骤1.培养基成分检查首先，检查培养基成分的符合度。

查阅培养基配方，并逐一准备并称量所需成分。

使用电子天平进行称量，确保称量准确。

检查成分是否存在误差，是否符合配方要求。

2.培养基配制检查根据培养基配方，准备液体培养基和固体培养基。

对液体培养基，按照配方将成分溶解在适量的蒸馏水中，并进行调pH处理。

对固体培养基，将成分溶解在蒸馏水中，并加入适量的琼脂糖或琼脂进行制成。

3.培养基无菌检查将配制好的培养基分别装入培养皿或试管中，并在恒温箱中进行高温高压灭菌处理。

灭菌结束后，在无菌操作台上进行无菌条件下的检查。

观察培养基是否有异常物质存在，如颜色变化、气泡、异味等。

4.培养基毒性检查将培养基分别接种相应的生物体，观察生物体的生长情况及有无异常现象。

观察时间可根据生物体的生长周期安排。

5.培养基成分调整及检查根据对培养基适用性的判断，如发现培养基的补充成分不足，或适用生物体的无法正常生长，可以对培养基的配方进行调整。

通过增加或减少特定成分的用量，或替换一些成分，再进行上述实验步骤进行再次检查。

四、实验结果和分析经过以上实验步骤，我们对培养基的适用性进行检查，并对实验结果进行记录和分析。

1.培养基成分符合度：通过称量成分的准确性和配方的符合度，可以判断培养基成分是否合适。

2.培养基配制检查：根据液体培养基和固体培养基的制备步骤，以及配方的准确性，可以判断培养基的配制是否正确。

3.培养基无菌检查：通过观察培养基灭菌后是否有异常现象，如颜色变化、气泡、异味等，可以判断培养基是否无菌。

培养基适用性检查验证报告文件编号：VMP-VV-501REP-00起草人：审核人：批准人：批准日期：年月日1.概述通过验证以确认所采用的培养基适合于细菌、霉菌及酵母菌的测定及控制菌的检查，根据特性制订检验方法和检验条件，按制定的方法进行试验，根据验证结果判断是否符合验证标准。

若符合，按验证的方法和条件进行微生物限度检查；若不符合，重新建立制订检验方法和检验条件，再进行验证，直至验证结果符合设立的验证标准。

2.验证目的及范围为了确认所采用细菌、霉菌及酵母菌计数和控制菌检查的培养基是否符合微生物限度检查法的规定要求，以保证检验结果的准确、可靠及检验方法的完整性。

3.验证风险评估对于本次验证的执行进行了如下的风险分析：4.验证前准备4.1验证人员培训：验证报告起草人有责任在方案批准后（且在验证实施前）对本次验证相关人员进行培训。

培训人员记录见附件1。

4.2将所有的平皿和稀释剂都应该严格按照相关的灭菌程序消毒，以确保其对试验的结果没有影响。

无菌移液管。

5.验证内容5.1测试环境条件要求所有检查在环境洁净度C级下的局部A级洁净度的单向流空气区域内隔离系统内进行，其全过程严格遵守无菌操作，能防止微生物污染。

5.2计数培养基5.2.1验证用菌种及培养基：5.2.1.1来源：食品药品检验所5.2.1.2菌落计数用菌种注：编号由菌种首字母-传代代数-配制日期组成。

5.2.2培养基及其制备方法：取市售的脱水培养基，分别按照规定方法进行配制后灌装于洁净的三角烧瓶中，然后加塞灭菌，在实验前加温熔化备用。

5.2.3菌液制备5.2.3.1接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至10ml营养肉汤培养基中，30～35℃培养18～24小时，取此培养液1ml，加0.9％无菌氯化钠溶液至10ml，采用10倍递增稀释法，稀释至10-6～10-7，使菌数约为50～100cfu/ml，做活菌计数备用。

5.2.3.2接种白色念珠菌的新鲜培养物至10ml改良马丁培养基中，23～28℃培养24～48小时，取此培养液1ml，加0.9％无菌氯化钠溶液至10ml，采用10倍递增稀释法，稀释至10-6～10-7，使菌数约为50～100cfu/ml，做活菌计数备用。

新版GMP培养基适用性检查验证方案导言：为了确保药品的安全性和有效性，广泛应用的GMP（Good Manufacturing Practice）准则规定了药品生产过程中的各个环节的要求。

其中，培养基是药品生产过程中重要的组成部分，为菌种的培养提供了必要的营养物质。

因此，对于新版的GMP培养基的适用性进行检查和验证是至关重要的。

本文将针对新版GMP培养基适用性检查验证方案进行详细介绍。

一、目的本方案的目的是确保新版GMP培养基在菌种的培养中具有适用性，并满足GMP准则中对培养基的要求，以确保药品生产过程的安全性、有效性和一致性。

二、检查和验证内容1.培养基的配方和成分检查通过检查新版GMP培养基的配方和成分，确认其是否与GMP准则中的要求相符。

包括但不限于：（1）培养基主要成分是否符合GMP准则的规定；（2）培养基配方中的添加剂的使用是否符合GMP准则的规定；（3）培养基中可能存在的致病菌、毒素或其他有害物质是否符合GMP准则的规定。

2.培养基的物理和化学指标检查通过检查新版GMP培养基的物理和化学指标，确认其是否符合GMP准则中的要求。

包括但不限于：（1）培养基的pH值和渗透压是否符合GMP准则的规定；（2）培养基的可溶性是否符合GMP准则的规定；（3）培养基的凝胶化能力、均匀性和稳定性是否符合GMP准则的规定；（4）培养基的透明度和色泽是否符合GMP准则的规定。

3.培养基的无菌性检查通过对新版GMP培养基进行无菌性检查，确认其是否符合GMP准则中的要求。

包括但不限于：（1）对培养基进行菌检，确认是否存在任何细菌、真菌或其他微生物的污染；（2）对培养基进行代菌试验，确认培养基对于不同种类的菌株是否具有适用性。

4.培养基的性能验证通过对新版GMP培养基进行性能验证，确认其在菌种的培养中的表现是否符合预期。

包括但不限于：（1）通过验证试验确认培养基的培养时间、生长速度和最终菌落数量是否符合预期；（2）通过对不同种类的菌株进行培养，并对培养基的表现进行评估，确认其在不同菌株的培养中的适用性。

培养基适用性检查标准操作规程1. 目的1.目的建立培养基配制适用性检查的标准操作规程，规范实验人员的操作。

2. 范围适用于微生物检验人员对培养基的规范管理。

3. 依据药品生产质量管理规范（2010年版修订）、《中华人民共和国药典》第四部4. 职责4.1 微生物检验员：负责实验室所需求的培养基管理工作，使日常检验正常进行。

4.2 微生物检验主管：负责对日常配制培养基的规范操作进行监督。

5. 程序5.1 培养基的贮藏5.1.1 未开封的胶水培养基贮存于阴谅室，使用培养基处于低温、干燥、和避光条件下。

开封的胶水培养基应盖紧，贮存于阴谅库。

5.1.2 灭菌好的培养基应进行预培养72h检查无菌后，置4～8℃冷藏保存，培养基储存期为7天。

5.2 培养基的配制应填写培养基配制及使用记录。

供试品微生物计数中所使用的培养基应进行适用性检查。

5.3 培养基的质量控制5.3.1 计数培养基适用性检查菌种及菌液制备菌种试验用菌株的传代次数不得超过5代( 从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0代)，并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。

计数培养基适用性检查和计数方法适用性试验用菌株见表1。

菌液制备按表 1规定程序培养各试验菌株。

取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌的新鲜培养物，用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的菌悬液;取黑曲霉的新鲜培养物加入适量含0.05% ( ml/mI)聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或含0.05% ( mI/mI )聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。

然后，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%( mI/ml )聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或含0.05% ( mI/ml )聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的黑曲霉孢子悬液。

菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用;若保存在2～ 8C,可在24小时内使用。