实验六：叶绿体的分离与荧光观察

布；
Differential centrifugation
Байду номын сангаас
High speed
Low speed
三、实验用品
1. 器材 离心机、研钵或组织捣碎机、显微镜、天
平、离心管、纱布、烧杯、量筒、滴管、 载玻片、盖玻片。 2. 材料
– 新鲜菠菜叶。
3. 试剂
– 0.35mol/L氯化钠溶液 。
四、实验方法
【实验报告】
1．绘图：菠菜叶肉细胞的形态，示叶绿 体。
2．观察经过加热和未加热这两种叶绿体 在形态上的区别，并绘出草图。
3简述：叶绿体的分离原理和方法；
在表皮细胞和保卫细胞中的分布；荧光显微镜下演示。
【实验结果】
差速离心获得并纯化的叶绿体镜检为绿色橄榄 形，在高倍镜下可看到叶绿体内部含有较深的 绿色小颗粒，即基粒。菠菜叶片徒手切片可以 观察到三种细胞分别是边缘呈锯齿形的鳞片状 的表皮细胞，构成气孔的成对的肾形保卫细胞， 排列成珊栏状的长形和椭圆形叶肉细胞。
实验五：叶绿体的分离与荧光观察
【课前预习】 1．分离细胞器的一般原理和方法？ 2．叶绿体的荧光为什么不能用普通光学显微镜
观察到？
一、实验目的
１ 通过植物细胞叶绿体的分离，了解细胞器 分离的一般原理与方法；了解差速离心 Differential centrifugation特点与用途
2．通过光镜鉴定叶绿体的纯度及了解叶绿体 形状
（一）叶绿体的分离与观察 1。取新嫩菠菜叶，洗净檫干、去梗，称30g，分批放入研钵。 2。加入0.35mol/L氯化钠溶液， 共150ml，研磨，制成匀浆； 3。将匀浆用6层纱布过滤于烧杯中； 4。取滤液4ml在1000r/min下离心2min，取上清； 5。上清液3000r/min，离心5min．去上清，沉淀即为叶绿体； 6。加0.35mol/L氯化钠溶液悬浮沉淀； 7。取叶绿体悬液1滴于载玻片上，加盖片； 8。普通光镜下观察；荧光显微镜下演示。 （二）菠菜叶徒手切片观察 新嫩菠菜叶斜切面1片，0.35mol/L氯化钠溶液1滴；加盖片轻压：光镜下观察叶绿体
3．观察叶绿体的自发荧光和次生荧光，了解 荧光显微镜的原理和使用方法
4 ．了解菠菜叶绿体的形态、分布与数量。
二 实验原理
采用差速离心分离细胞器；
– 沉降顺序：核——线粒体——溶酶体与过氧化物酶体——内 质网与高基体——核蛋白体；
叶绿体具有荧光现象，可利用荧光显微镜观察。 菠菜叶富含叶绿体，可采用徒手切片观察 其形态和分