Water 2695 高效液相色谱仪操作规程
1目的
用于规范检验人员正确操作使用Waters 2695 高效液相色谱仪。
2 适用范围
适用于使用Waters 2695高效液相色谱仪检测分析的操作管理。
3 职责
使用Waters 2695高效液相色谱仪进行检验的检验员应对本规程负责，相关项目经理负责监督该操作规程的正确执行。
4仪器组成及原理
4.1仪器组成本仪器由Waters 2695 高效液相色谱仪、检测器(2996型二极管阵列检测器、2487紫外检测器、2489紫外检测器、474型荧光检测器)、Empower色谱作站组成。2695 分离单元包括四元梯度洗脱的溶剂输送系统，四通道在线真空脱气机，可容纳120 个样品瓶的自动进样系统，柱温箱，内置的柱塞杆密封垫清洗系统，溶剂瓶托盘，液晶显示器，键盘用户界面等组成。
4.2高效液相色谱法是将具一定极性的单一溶剂或不同比例的混合溶液，经色谱柱进行分离，检测器检测分离后的不同组分，数据处理装置记录色谱图或进行数据处理。
5.仪器的操作
5.1仪器的准备
5.1.1 检查流动相（使用前应首先脱气）、在线清洗溶液（10%甲醇-水溶液seal wash）、进样针清洗溶液（90%甲醇-水溶液injector wash）是否足够。
5.1.2 检查色谱柱的使用是否正确（方向是泵出来进检测器的方向，正常的话是色谱柱上所标示的箭头向上；一般情况下不能将色谱柱反过来用，除非柱子确实无法使用可考虑反方向使用）、连接是否有误，有无漏液，废液瓶的容量是否足够。
5.2开机、自检与仪器预备
5.2.1依次开启不间断稳压电源、开启2695 分离单元电源和计算机电源；仪器开始自检（约5～6min），待仪器操作面板上出现“Idle”字样表示自检成功，仪器进入待命状态。
5.2.2按动仪器面板右下方“Menu/Status”键进入操作状态，按动“Direct Function” 功能键，若仪器是首次使用或溶剂的管路充满空气时，先选择Dry Prime，按动OK，对管路进行排空；此时开启仪器下方purge阀，用专用注射器手工抽出管路内部的空气。（此操作一般情况下不会使用）
5.2.3若非5.2.2 状态时，直接以▼键切换到wet Prime，按动OK，对事先设置好流动相溶剂比例的管路进行相应的流动相灌注。
5.2.4 按动“Direct Function” 功能键，以▼键将仪器切换到purge injector状态，按动OK，对针头进行purge。（此操作是为了避免进样针中有气泡导致进样不平行）
5.2.5 在面板上设置流动相流速（flow），各通道溶剂流动比例以及柱温（col Htr）等参数，然后按动Enter。
5.2.6 按动“Direct Function” 功能键，以▼键将仪器切换到Equilibrate状态，按动OK，仪器开始平衡柱子。
注：上述5.2.5、5.2.6可不操作，在建立好方法后按监视键，即可。
5.3检测项目与检测方法的设置
5.3.1双击电脑桌面的Empwer图标，开启仪器工作站，输入用户名（system）及密码(manager)后进入仪器工作站。单击配置系统，进入配置管理器；选中左栏中的“系统”，单击系统→新建→色谱系统→新建色谱系统向导-输入类型的界面→下一步→选择所用的液相和检测器→下一步→下一步→系统名（hplc）→完成。
5.3.2单击文件→新建→项目（或直接点击黄色火柴头形状的“新项目”图标），进入新项目向导，单击下一步，设置表空间参数300～500Mb，取消“支持全面审计追踪”，下一步，跟着向导逐级设置参数（一般情况下只要出来界面后直接点下一步），直至命名项目名称，单击“完成”，回到Empower Pro界面。
5.3.3单击“运行样品”进入运行样品界面，单击向导键，进入新样品组方法向导，选择“利用本向导创建样品组方法”，下一步，选LC；选择标准品的开始位置，下一步；选“每个标准品代表不同的浓度”，下一步；输入标准品的瓶数、每瓶的进样次数、进样体积及运行时间等参数；
单击“新建”进入选择仪器方法界面，进入仪器方法编辑器，默认“通用”项下的参数；“脱气”项下的“脱气模式”选择“开”；“事件”项下的参数可以默认；“流量”项下：压力上限设4000psi，下限设100psi；等度时，设置流动相流速（flow），各通道溶剂流动比例以及柱温（col Htr）等参数；梯度时，设置流动相随时间变化的梯度表格；再设置柱温。
5.3.4单击检测器图标，当使用PDA时：若使用多波长检测，则选择3D通道，输入检测波长的范围，期于参数默认；若使用单波长检测，则选择2D通道，选中通道1，输入检测波长；“模拟输出”与“事件”项下可默认。单击保存键，输入仪器方法名称并保存。
创建方法组：选择仪器方法：“处理方法”项下：无处理；“报告方法”项下：无报告；“导出方法”项下：无导出，下一步，命名方法组，完成。（这一步很关键，若不创建方法组所建的仪器方法就无法运行）
5.3.5编辑样品参数：输入待测样品数量、每瓶的进样次数、进样体积及运行时间等参数；下一步；选择只测试，出错时继续，下一步；直至命名样品组名称（根据所做试验命名样品组），单击完成。
5.3.6调整完善样品组，开启仪器样品室仓门，调出所需要的样品盘，放置样品并将养拼盘放回，关闭样品室仓门。
5.4.色谱条件探索：单击“单进样”，进入单针进样界面，输入有关参数后（首次摸索条件最好将运行时间设置的略长一些，中途单击工具栏的红色图标可以随时终止运行），单击单进样图标，开始色谱条件摸索；需要改变流量时，单击工具栏的“操作”，选“改变流量”，设置相关参数即可。
5.5.运行样品组：经过几次“单进样”探索后，确定色谱条件；然后单击“样品”，调整样品批表中的运行时间与延迟进样时间等，完善批表后，单击工具栏的绿色运行图标可以启动批表的检测运行。
5.6.在运行样品组过程中，若需要更改或增加批表内容时，单击工具栏的“编辑”，选择“改变正在测试样品”，可以更改尚未运行的批表参数或增加批表内容（此操作只可以在样品运行中途进行，在一针结束，另外一针即将开始的切换时刻，切勿进行此项操作），更改完成后，单击工具栏的绿色运行图标可以继续运行检测。
5.7.流路中流动相的存放
