不同激活剂和抑制剂对1398蛋白酶活力的影响
摘要：【目的】探究不同激活剂、抑制剂对1398蛋白酶活力的影响。【方法】通过分别将不同的试剂加入到各个含有1398蛋白酶液的试管中，然后在进行催化效应。实验结果用与调零组进行对照，以O.D值表示。通过分析不同的O.D值来总结这些试剂对1398蛋白酶活力的影响。【结果】在本次实验中，加入钙离子、镁离子和十二烷基硫酸钠的实验组均没有对1398蛋白酶表现出预期的影响；加入Vc的实验组不能通过O.D值判断Vc对1398蛋白酶是否有抑制作用。【结论】本次实验没有得到预期的实验结果。通过分析发现，钙离子、镁离子和十二烷基硫酸钠均因工作浓度过小导致对酶活力影响不明显；Vc由于是较强的还原剂，使得，在加Folin-酚试剂后，Vc与Folin-酚试剂反应，从而，影响到了酪氨酸与Folin 的反应，进而表现出，O.D大大增高的现象。
关键词：1398酶、激活剂、抑制剂、酶活力
Activting agent and inhibitor affect activity of 1398 enzyme
Abstract :The paper is aimed at explorer the vitality of the 1398 enzyme which is be influenced by different activting agent and inhibitor. Add different reagents into the enzyme solution ,as a result ,there is a difference among these activting agent and inhibitor by analysis the O.D of erey group. In this experiment, there is a little diffence when compared the enzyme solution added calcium or magnesium with the norml group. In addition, when added the Vc into enzyme solution, it reflected a strange phenomenon. But the
result is due to the Vc act on Folin.
Keywords:1398 enzyme ,activting agent ,inhibitor ,enzyme activity 1398蛋白酶是由枯草芽孢杆菌经发酵提炼而成的固体酶制剂，能将大分子蛋白质水解成游离的氨基酸等产物。1398酶的最适温度是35~45摄氏度，最适pH 是6.5~7.5。
1398蛋白酶催化酪蛋白水解，产物中有酪氨酸。蛋白酶的活力越大，则生成的氨基酸越多。福林酚试剂与水解出来的酪氨酸作用生成蓝色物质，从蓝色深浅程度通过比色可以判断酪氨酸的多少，从而推断酶活力的大小。
能引起酶活力降低或丧失的物质被称为酶的抑制剂。能提高酶活性，加速酶促反应的物质称为酶的激活剂。无论抑制剂还是激活剂对酶都有选择性。
材料与方法
仪器与试剂
试管10支，试管架1支，微量移液器1支；50ml、100ml容量瓶各一只；恒温水浴锅；分光光度计；秒表
1398蛋白酶，2%酪蛋白溶液，0.4mol/LNa2Co3溶液，0.4mol/LTCA溶液，0.02mol/L 磷酸缓冲液（pH=7.5），福林酚试剂，0.005mol/LCuCl2溶液，0.005mol/LMnCl2溶液，0.005mol/L十二烷基硫酸钠溶液（SDS），Vc及其衍生物（浓度为0.005mol/L）方法与测定
1，酶液准备：称取1398蛋白酶试剂1g，加少许0.02mol/LpH7.5磷酸缓冲液，置于研钵中研磨。然后移入100ml容量瓶中，用缓冲溶液定容至刻度。在40℃恒温水浴中保温15分钟。将此酶浸出液过滤，娶滤液1ml用上述缓冲液定容至50ml,此溶液即为稀释5000倍的酶液。
2，酶反应条件：
反应温度40℃，作用pH7.5，反应时间10分钟。3，操作步骤严格按表1进行
表1
结果
利用分光光度计测量在650nm处的O.D值，如表2。
表2
讨论
从实验结果分析，我们并没有得到预期的实验效果。
按实验原理，1~4号添加了激活剂，酶的活性应有所增加，相同反应条件下，酶分解底物所得酪氨酸应比对照组9号多，即1~4号的O.D值应比9号高；而加了抑制剂的5~8号的OD值应比对照组9号低。
从我们所得到的实验结果分析图上看，1~6号与9号的O.D值近似相等，7号和8号的OD值异常高。经实验后分析讨论，1~6实验结果不明显，是因为离子浓度
过小，对酶作用不明显。而加入Vc的7、8组并不是因为对酶有激活作用而使O.D值异常增高。事实上，一定浓度的Vc对酶有抑制作用。但是，Vc是一个强的还原剂，比酪氨酸的还原性更强，因此，当加入folin-酚试剂时，Vc直接与folin 试剂进行反应，生成物比酪氨酸与folin反应的的产物颜色更深，因此在进行分光光度测量时，其O.D值就出现了一种“错误”的现象。由于是Vc与folin反应得出的O.D值，因此，此组数据无效。
结论：这次实验虽然没有得到预期结果，但是我们从中也学习到了很多。在实验前，需掌握实验原理，多查阅文献资料，了解试剂的性质及在实验中所起的作用，以避免出现无效的实验数据。
参考文献：
[1]吴京平，金属离子对蛋白酶活力和热稳定性的影响，中国皮革，Vol.33 No.11 Jun,2004
[2]曹小敏,王志勇，刘欲文，汪存信，吴同华，田耘，等转化率法分析溶菌酶在变性剂影响下的变性过程，华中农业大学学报，Vol.29 No.1 Feb,2010
钙离子处理对肌细胞组织特异性钙激活中性蛋白酶 calpain3的影响 朱燕1，2 童敏1 罗欣1，2徐幸莲1 周光宏1? （1南京农业大学农业部农产品加工重点开放实验室210095， 2山东农业大学食品科学与工程学院271018） 摘 要：本研究利用RT-PCR和Western blot方法研究钙离子处理对成肌细胞L6形态、分化的影响以及calpain3基因mRNA水平表达和蛋白水平降解的调控。结果表明，成肌细胞L6的细胞分化程度随着钙离子浓度的增加而增大，且死亡细胞明显增多。RT-PCR和Western blot结果表明钙离子处理后calpain3mRNA个样品之间的表达无明显差别，但是免疫印迹图谱却发现，钙离子处理组与对照组相比，94kDa处的条带颜色稍有降低，55kDa处的条带颜色加深，说明有更多的小片段生成，且钙离子浓度大于200μM时94kDa处的条带消失。 关键词：RT-PCR L6成肌细胞 Western blot 骨骼肌特异性钙激活中性蛋白酶，P94是calpain超家族的一员，虽然其在活体中的功能不详，但可能对骨骼肌功能的发挥起到必不可少的作用[1]（Sorimachi 2000）。Calpain3蛋白分子由四个结构域组成，这与Calpain1 和Calpain2的大亚基有较高的同源性[2]。除此以外，Calpain3还具有3个特异性的结构，分别是N-端延伸亚基（NS）和两个插入序列：结构域Ⅱ内的插入序列IS1和结构域Ⅲ和Ⅳ之间的插入序列IS2，而IS2与核转导信号具有相似序列。 由于研究发现Calpain3的mRNA表达水平大约是Calpain1 和Calpain2的十倍之多，因而calpain3对于肌肉功能的作用引起人们的极大兴趣。Richard[3]（1995）发现calpain3基因突变可以导致2A型肌营养不良症（LGMD2A）的产生，从基因水平证实了起初科学家对于calpain3功能的猜想。自动降解性是Calpain3最主要的性质[45][46],在低或无钙离子存在的情况下Calpain3的半寿期（half live）小于10min。迅速的自动降解性，使得人们几乎无法在离体条件下研究calpain3的用，进而人们把研究方向转向对calpain3表达调控的研究。有的学者利用反义RNA技术对calpain3的mRNA干扰，导致细胞中缺乏含有弥漫α-actitin 的成熟Z盘[4]（Poussard et al， 1996）。此外，研究表明大多数情况下缺乏calpain3的活性会导致肌肉的病理反应[5]（Kihbara 1998）。 Calpain3作为钙激活中性蛋白酶超家族一员，结构中也含有EF手型这种钙调控结构，表明钙离子也可能是这种蛋白酶的一个重要的调控因子。且在钙离子对calpain3降解的影响上还存在较大争议。本研究利用L6为研究对象，探讨钙离子处理对活体肌细胞中calpain3表达的影响。 1材料与方法 1.1 成肌细胞培养、分化和Ca2+处理 大鼠L6成肌细胞系（购于中国科学院上海细胞库，源自ATCC）按照1.5×105的密度 基金项目：教育部博士点基金（20020307006），国家自然科学基金资助项目（30371016） 作者简介：朱燕（1974-），博士研究生，讲师，主要研究方向：肉品质量控制。*通讯作者Corresponding author：周光宏(1960-)，Email:ghzhou@https://www.doczj.com/doc/3813779451.html,
产品名: Sivelestat sodium salt 修订日期: 6/30/2016产品说明书 化学性质 产品名: Sivelestat sodium salt Cas No.: 150374-95-1 分子量: 456.44 分子式: C20H21N2NaO7S 化学名: sodium;2-[[2-[[4-(2,2-dimethylpropanoyloxy)phenyl]sulfonylamino]b enzoyl]amino]acetate SMILES: CC(C)(C)C(=O)OC1=CC=C(C=C1)S(=O)(=O)NC2=CC=CC=C2C(=O)NCC(=O)[O-].[Na+] 溶解性: Soluble in DMSO > 10 mM 储存条件: Desiccate at RT 一般建议: For obtaining a higher solubility , please warm the tube at 37°C and shake it in the ultrasonic bath for a while.Stock solution can be stored below -20°C for several months. 运输条件: Evaluation sample solution : ship with blue ice All other available size: ship with RT , or blue ice upon request 生物活性 靶点 : Proteases 信号通路: Elastase 产品描述: Selective leukocyte elastase inhibitor (IC50 = 44 nM) that displays no activity at a range of other proteases. Inhibits NF-κB activation and LTB4-induced neutrophil transmigration in vitro. Significantly attenuates ischemia-induced spinal cord injury, decreases serum cytokine levels and reduces acute inflammatory lung injury in vivo.
当前位置：生物帮 > 实验技巧 > 生物化学技术 > 正文 蛋白酶及蛋白酶抑制剂大全 日期：2012-06-13 来源：互联网 标签： 相关专题：解析蛋白酶活性测定聚焦蛋白酶研究新进展 摘要: 破碎细胞提取蛋白质的同时可释放出蛋白酶，这些蛋白酶需要迅速的被抑制以保持蛋白质不被降解。在蛋白质提取过程中，需要加入蛋白酶抑制剂以防止蛋白水解。以下列举了5种常用的蛋白酶抑制剂和他们各自的作用特点，因为各种蛋白酶对不同蛋白质的敏感性各不相同，因此需要调整各种蛋白酶的浓度 恩必美生物新一轮2-5折生物试剂大促销！ Ibidi细胞灌流培养系统-模拟血管血液流动状态下的细胞培养系统 广州赛诚生物基因表达调控专题 蛋白酶抑制剂 破碎细胞提取蛋白质的同时可释放出蛋白酶，这些蛋白酶需要迅速的被抑制以保持蛋白质不被降解。在蛋白质提取过程中，需要加入蛋白酶抑制剂以防止蛋白水解。以下列举了5种常用的蛋白酶抑制剂和他们各自的作用特点，因为各种蛋白酶对不同蛋白质的敏感性各不相同，因此需要调整各种蛋白酶的浓度。由于蛋白酶抑制剂在液体中的溶解度极低，尤其应注意在缓冲液中加人蛋白酶抑制剂时应充分混匀以减少蛋白酶抑制剂的沉淀。在宝灵曼公司的目录上可查到更完整的蛋白酶和蛋白酶抑制剂表。 常用抑制剂 PMSF 1)抑制丝氨酸蛋白酶(如胰凝乳蛋白酶，胰蛋白酶，凝血酶)和巯基蛋白酶(如木瓜蛋白酶); 2)10mg/ml溶于异丙醇中; 3)在室温下可保存一年; 4)工作浓度:17~174ug/ml(0.1~1.0mmol/L); 5)在水液体溶液中不稳定，必须在每一分离和纯化步骤中加入新鲜的PMSF。 EDTA 1)抑制金属蛋白水解酶; 2)0.5mol/L水溶液，pH8~9;
蛋白酶抑制剂的研究进展 郭川 微生物专业，200326031 摘要：自然界共发现四大类蛋白酶抑制剂:丝氨酸蛋白酶抑制剂、巯基蛋白酶抑制剂、金属蛋白酶抑制剂和酸性蛋白酶抑制剂，本文就各大类蛋白酶抑制剂的结构特点，活性部位的研究概况及其在各领域应用的原理及进展。 关键词：蛋白酶抑制剂；结构；应用 天然的蛋白酶抑制剂(ＰＩ)是对蛋白水解酶有抑制活性的一种小分子蛋白质,由于其分子量较小,所以在生物中普遍存在。它能与蛋白酶的活性部位和变构部位结合,抑制酶的催化活性或阻止酶原转化有活性的酶。在一系列重要的生理、病理过程中:如凝血、纤溶、补体活化、感染、细胞迁移等，PI发挥着关键性的调控作用,是生物体内免疫系统的重要组成部分。从Ｋｕｎｉｔｚ等最早分离纯化出一种ＰＩ至今,已有多种ＰＩ被发现,根据其作用的蛋白酶主要分以下几类:抑制胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶等的丝氨酸蛋白酶抑制剂,抑制木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶等的巯基蛋白酶抑制剂,抑制胃蛋白酶、组织蛋白酶Ｄ等的羧基蛋白酶抑制剂、抑制胶原酶、氨肽酶等的金属蛋白酶抑制剂等。而根据作用于酶的活性基团不同及其氨基酸序列的同源性,可将自然界发现的PI分为四大类:丝氨酸蛋白酶抑制剂、巯基蛋白酶抑制剂(半胱氨酸蛋白酶抑制剂)、金属蛋白酶抑制剂和酸性蛋白酶抑制剂[1]。 1 结构与功能 1.1丝氨酸蛋白酶抑制剂（Serine Protease Inhibitor,Serpin） 丝氨酸蛋白酶抑制剂是一族由古代抑制剂趋异进化5亿年演变而来的结构序列同源的蛋白酶抑制剂。Sepin为单一肽链蛋白质。各种serpin大约有30％的同源序列，疏水区同源性高达70％。血浆中的serpin多被糖基化，糖链经天东酰胺的酰胺基与主链相连。位于抑制性serpin表面、距C端30～40个氨基酸处的环状结构区RSL（reactive site loop）中，存在能被靶酶的底物识别位点识别的氨基酸P1[2]；近C端与P1相邻的氨基酸为P1’，依此类推，即肽链结构表示为N端-P15～P9～P1-P1’～P9’～P15’-C端。在对靶酶的抑制中。Serpin 以RSL中的类底物反应活性位点与靶酶形成紧密的不易解离的酶-抑制剂复合物，同时P1-P1’间的反应活性位点断裂。几种perpin氨基酸序列比较发现，serpins各成员的抑制专一性是由P1决定的，且被抑制的酶特异性切点一致。如抗凝血酶，抑制以Arg羧基端为敏感部位的丝氨酸蛋白酶，其中P1为Arg[2]。 1.2巯基蛋白酶抑制剂（Cytsteine Proteinase Inhiitor，CPI） 对于丝氨酸蛋白酶抑制剂(SPI)已有大量研究,巯基蛋白酶抑制剂(CPI)的研究则相对要晚一些。而动物和微生物来源的CPI已有一些研究,发现它们在结构上具有同源性,Barrett等将CPI统称为胱蛋白超家族,并按分子内二硫键的有无与数量,分子量大小等将此家族分为3个成员(F1、F2、F3)。在3个家族中,大多数F1和F3的CPI中都有Glu53-Val54-Val55-Ala56-Gly57保守序列,其同源序列在其它CPI中也被发现,如Ｆ2中的Gln-Ｘ-Val-Ｙ-Gly和CHα-ras基因产物中的Gln-Val-Val肽段。人工合成的Glu-Val-Val-Ala-Gly 短肽也显示对木瓜蛋白酶有抑制活性,因此可以认为这一保守区段在抑制活性中起着全部或部分的关键作用[3]。对植物来源的ＣＰＩ研究的不多,已有报道的有水稻、鳄梨和大豆。水稻巯基蛋白酶抑制剂(Oryzacystatin,OC) 具有102个氨基酸残基,有典型的Glu-Val-Val-Ala-Gly保守序列,应与动物CPI同源进化而来。从OCI没有二硫键来看,它应归为F1成员,但从序列比较看,则更接近F3。对OCIGlu---Gly保守序列进行点突变试验表明,突变使其抑制活性大幅度下降,其中当Glu被Pro替代时则活性全无,由此说明,这一段保守序列在OCI的抑制活性中,同动物CPI一样必不可少。除Glu---Gly保守区域外,OCI序列中其
蛋白酶抑制剂选择指南 1 蛋白酶抑制剂选择指南 抑制剂 工作浓度 分子量 抑制蛋白酶种类 稳定性 AEBSF终浓度1mM MW:239.5不可逆的丝氨酸蛋白酶抑制剂,抑制胰蛋白酶,糜 蛋白酶,纤溶酶,凝血酶及激肽释放酶. 可溶于水,其pH7的水溶液在4o C可保持稳定1-2个月,在pH>8的情况下会发生缓慢水解 Aprotinins 抑肽酶终浓度2ug/ ml MW:6512 可逆的丝氨酸蛋白酶抑制剂,可抑制纤溶酶,激肽 释放酶,胰蛋白酶,糜蛋白酶,但不抑制凝血酶和 Factor Xa。 非常稳定,当pH>12.8时失去活性,可溶于 水(10mg/ml),-20o C下可长期保存 Bestatin终浓度10uM MW:308.4 可逆的丙氨酰-氨基肽酶抑制剂, 工作液可保存一天,1mM的甲醇贮存液在 -20o C可保存至少一个月 E-64 Protease Inhibitor终浓度10uM MW:357.4 不可逆的半胱氨酸酸蛋白酶抑制剂,抑制半胱氨酸 酸蛋白酶而不会影响其他酶的半胱氨酸残基,与小 分子量的巯基醇如beta-巯基乙醇不会产生反应, 具有高度特异性。工作液在正常pH值下可保持稳定数天,1mM的水溶液在-20o C可保存几个月 EDTA, 4Na终浓度10mM MW:380.2 金属蛋白酶的可逆性螯合物,可能同时影响其他金 属依赖性生物过程。其水溶液很稳定,其贮存液(pH8.5的0.5M 水溶液)在4o C可保存数月 Leupeptin, 半硫酸盐 亮抑酶肽（亮肽素） 终浓度100uM MW:493.6 可逆的丝氨酸及半胱氨酸蛋白酶制剂,可抑制胰蛋 白酶样蛋白酶及一些半胱氨酸蛋白酶如:Lys-C内 切蛋白酶,激肽释放酶,木瓜蛋白酶,凝血 酶,Cathepsin B及胰蛋白酶。 工作液的稳定期为数小时,贮存液(10mM 水溶液)在4o C时稳定期为一周,-20o C时 稳定期为一个月 Pepstatin A 终浓度1uM MW:685.9 可逆的天冬氨酸蛋白酶,可抑制胃蛋白 酶,Cathepain B&L,血管紧张肽原酶(renin)及以1mg/ml溶于甲醇,搅拌过夜可以 1mg/ml溶于乙醇,333mg/ml溶于6N的
蛋白酶及蛋白酶抑制剂大全 标签： 相关专题：解析蛋白酶活性测定聚焦蛋白酶研究新进展 摘要: 破碎细胞提取蛋白质的同时可释放出蛋白酶，这些蛋白酶需要迅速的被抑制以保持蛋白质不被降解。在蛋白质提取过程中，需要加入蛋白酶抑制剂以防止蛋白水解。以下列举了5种常用的蛋白酶抑制剂和他们各自的作用特点，因为各种蛋白酶对不同蛋白质的敏感性各不相同，因此需要调整各种蛋白酶的浓度 恩必美生物新一轮2-5折生物试剂大促销！ Ibidi细胞灌流培养系统-模拟血管血液流动状态下的细胞培养系统 广州赛诚生物基因表达调控专题 蛋白酶抑制剂 破碎细胞提取蛋白质的同时可释放出蛋白酶，这些蛋白酶需要迅速的被抑制以保持蛋白质不被降解。在蛋白质提取过程中，需要加入蛋白酶抑制剂以防止蛋白水解。以下列举了5种常用的蛋白酶抑制剂和他们各自的作用特点，因为各种蛋白酶对不同蛋白质的敏感性各不相同，因此需要调整各种蛋白酶的浓度。由于蛋白酶抑制剂在液体中的溶解度极低，尤其应注意在缓冲液中加人蛋白酶抑制剂时应充分混匀以减少蛋白酶抑制剂的沉淀。在宝灵曼公司的目录上可查到更完整的蛋白酶和蛋白酶抑制剂表。 常用抑制剂 PMSF 1)抑制丝氨酸蛋白酶(如胰凝乳蛋白酶，胰蛋白酶，凝血酶)和巯基蛋白酶(如木瓜蛋白酶); 2)10mg/ml溶于异丙醇中; 3)在室温下可保存一年; 4)工作浓度:17~174ug/ml(0.1~1.0mmol/L); 5)在水液体溶液中不稳定，必须在每一分离和纯化步骤中加入新鲜的PMSF。 EDTA 1)抑制金属蛋白水解酶; 2)0.5mol/L水溶液，pH8~9; 3)溶液在4℃稳定六个月以上;
4)工作浓度:0.5~1.5mmol/L. (0.2~0.5mg/ml); 5)加入NaOH调节溶液的pH值，否则EDTA不溶解。 胃蛋白酶抑制剂(pepst anti n) l)抑制酸性蛋白酶如胃蛋白酶，血管紧张肽原酶，组织蛋白酶D和凝乳酶; 2)1mg/ml溶于甲醇中; 3}储存液在4℃一周内稳定，-20℃稳定6个月; 4)1作浓度:0.7ug/ml(1umol/L) 5)在水中不溶解。 亮抑蛋白酶肽(leupeptin) 1)抑制丝氨酸和巯基蛋白酶，如木瓜蛋白酶，血浆酶和组织蛋白酶B; 2)lOmg/ml溶于水; 3)储存液4℃稳定一周，-20℃稳定6个月; 4)工作浓度0.5mg/ml。 胰蛋白酶抑制剂(aprotinin) 1)抑制丝氨酸蛋白酶，如血浆酶，血管舒缓素，胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶; 2)lOmg/ml溶于水，pH7~8 3}储存液4℃稳定一周，-20℃稳定6个月; 4)工作浓度:0.06~2.0ug/ml(0.01~0.3umol/L); 5)避免反复冻融: 6)在pH>12.8时失活。 蛋白酶抑制剂混合使用 35ug/ml PMSF…………………………………丝氨酸蛋白酶抑制剂 0.3mg/ml EDTA…………………………………金属蛋白酶抑制剂 0.7ug/ml胃蛋白酶抑制剂(Pepstatin)…………酸性蛋白酶抑制剂 0.5ug/ml亮抑蛋白肽酶(Leupeptin)……………广谱蛋白酶抑制剂
粗粮含蛋白酶抑制剂。荞麦、燕麦、莜麦、高粱面、红薯等粗粮中，含有抗营养素蛋白酶抑制剂。其中，荞麦、莜麦含量最高。粗粮发酵以后，酵母菌大大降低蛋白酶抑制剂的活性，所以粗粮发酵后蒸窝头、贴饼子等食用为好。 各种粗 粮 甘蓝含有硫苷。卷心菜、紫甘蓝、荠菜、萝卜、洋葱、花菜等十字花科蔬菜中，含有抗营养素——硫苷。硫苷降解的某些产物能抑制甲状腺素的合成和对碘的吸收。硫苷具有两面性，虽然它有副作用，但对子宫癌、乳腺癌等多种癌有显著的抑制作用。硫苷对热敏感，将蔬菜炒熟后，可去除其中的大部分硫苷。理想的做法是，将其一半生吃一半熟吃，这样既可保留防癌成分，又有利于其他营养成分的吸收。 黄瓜等含有抗坏血酸氧化酶。黄瓜、西葫芦、莴笋、水芹、花菜、南瓜等食物中，含有抗营养素——抗坏血酸氧化酶。抗坏血酸氧化酶会破坏蔬菜和水果中维生素C的含量。所以食用黄瓜时不必切开，生吃即可。西葫芦、莴笋、水芹、花菜等蔬菜宜大火快炒，最好不要加醋。 蛋白质抑制剂:这是大豆和其它豆类中存在的一种特殊蛋白质，可以抑制体内胰蛋白酶等十几种消化酶的流活性，其代表为胰蛋白酶抑制剂，它能抑制蛋
白酶对蛋白质的消化吸收。它需经蒸发气加热30分钟或高压蒸气加热15~2 0分钟才能被破坏。 皂角素：大豆中含有的皂角素，对消化道粘膜有强烈的刺激性，人吃了没有煮熟的大豆或豆浆，常会产生恶心、呕吐、腹痛、腹泻等症状，就是由于皂角素没有完全破坏所引起。皂角素需加热至100度才破坏，因此食用豆类或豆浆必须煮开10~20分钟后才能食用。 凝血素：也是一种特殊蛋白质，称为植物血球凝集素，可使人体细胞凝集，但加热即可被破坏，或在体内经蛋白酶作用也可使其失去活性，不致被肠道吸收后引起凝血。 棉子糖合成酶:众所周知，多吃大豆后肚子容易胀气。其原因是大豆中含有一种棉子糖合成酶，它进入人体后，可以合成大量低聚糖，如棉子糖、水苏糖等。这些糖不能被子人体吸收，大部分在肠中被细菌分解利用，同时产生大量二氧化碳、氢和甲烷。但大豆充分加熟后，此酶即被破坏，产气也随之减少；加工成豆制品或发酵制品也可去除这种酶，故吃豆腐、腐乳等豆制品就不会胀气。 植酸:这是一种含磷化合物，一般植物性食品中都含有。但大豆中含量很高，大豆中占60%~80%的磷都是以植酸形式存在，植酸可与蛋白质、无机盐及矿物元素钙、磷、铁、锌等结合而影响其消化吸收。大豆中的锌很难吸收，就是受了植酸的影响，可利用发芽米分解植酸，提高大豆中铁、锌、钙、镁等矿物元素的生物利用率。
001963 J.S hanxi Agric .Un i v . 学报 收稿日期: 2004-04-20 修回日期:2004-05-17 作者简介:常 泓(1968-),女(汉),山西榆次人,副教授,博士,主要从事分子生物学及生物技术的研究。 基金项目:国家自然科学基金资助课题(30271003);山西省科技攻关项目(011030);山西省青年基金项目(20021038) 文章编号:1671-8151(2005)01-0064-04 PCR 法扩增钙激活酶激活蛋白c DNA 常 泓1 ,南庆贤2 ,岳文斌 3 (1.山西农业大学生命科学学院,山西太谷030801; 2.中国农业大学食品学院,北京100094;3.山西农业大学动物科技学院,山西太谷030801) 摘 要:钙激活酶激活蛋白是钙激活酶的激活蛋白,可以促进钙激活酶活性的发挥,从而促进肉的嫩化。采用PCR 技术,以山羊肝脏cDNA 为模板经扩增得到钙激活酶激活蛋白(ca l pa i n activator)基因,并进行了序列测定。该片段长1017bp ,5 端非翻译区长39bp ,3 端非翻译区长567bp 。编码区长411bp ,编码一个长137个氨基酸残基的蛋白质,其理论分子量为14298D a 。与Edon M e llon i 等(1998)报道的从牛脑中提取纯化的钙激活酶激活蛋白的氨基酸序列相比发现,二者仅有五个位点不同。关键词:钙激活酶激活蛋白; cDNA 文库;聚合酶链式反应 中图分类号:S81 文献标识码:A Am plificati o n of C al p ain A ctivat or c DNA usi n g PCR CHANG Hong et a.l (C olle ge of L i f e S cience ,Shanx i Agr icultural Universit y,T ai gu Shanx i 030801,China )Abstract :T he c DNA o f ca l pa i n activator , a prote i n that can ac tivate calpa i n ,w as a m plified by po l ym erase chain reacti on (PCR )w it h te m plate of cDNA of goat li ve r .T he a mp lified frag m ent w as c l oned and sequenced .The c DNA,cons i sti ng o f 1017bp ,had a 5 un translated reg ion of 39bp and 3 untranslated reg i on o f 567bp .The cod i ng reg i on w as 411bp i n s i ze and encoded a pepti de o f 137a m i no ac i d resi dues w ith a theoretical m olecu lar m ass o f 14298D a .Compar i ng w ith t he resu lt o f Edon M ell on i e t .al (1998),there w ere fi ve d ifferen t site o f a m i no acid .K ey word s :Ca l pa i n acti va t o r ; c DNA library ;PCR 最新的研究表明,钙激活酶激活蛋白(cal pa i n activator )[1] 是钙激活酶(calpa i n EC 3 4 22 17)活性的主要调节者,对活体组织中钙激活酶活性的发挥起着主要的激活作用。钙激活酶激活蛋白是钙激活酶系统中除钙激活酶抑制蛋 白(cal p astati n )[2] 外的另一个调节者,钙激活酶激活蛋白是钙激活酶系统的一个新成员。 钙激活酶系统是高度可调的、依赖于C a 2+ 的蛋白质水解酶系统,参与细胞内一系列变化。[2~5] 在活体肌肉组织中,钙激活酶是导致肌纤维蛋白降解的主要因素[2,4] 。试验研究还表明,钙激活酶同样是宰后肌肉成熟过程中肌原纤维降解的主要因素,直接关系到肉的嫩化程度,而嫩度是影 响肉品质的关键因素[6] 。促进肉嫩化,提高肉的 嫩度是畜牧业和食品工业面临的一个很重要的问 题。但是,活体组织中钙激活酶是如何被激活的一直是个迷,如何激活钙激活酶而促进肉嫩化更 无法实现。近年来,许多科学家分析[7] ,在钙激活酶系统中存在一个钙激活酶活性的直接调节者, 它可以增强钙激活酶在生理条件下对Ca 2+ 的亲和 性,促进C a 2+与钙激活酶在C a 2+ 结合位点结合,从而促进钙激活酶活性的发挥。 首次发现钙激活酶激活蛋白的是美国Texas 健康科学中心大学生理和药理系D e M arti n o 等人[1] 。1998年以来[8~10] ,意大利热那瓦大学生化研究所的Pontre m o li 和M ellon i 等人对钙激活酶激活蛋白的研究较多。目前已知其氨基酸序列和c DNA 序列。钙激活酶激活蛋白是一个分子量为
人中性粒细胞弹性蛋白酶及其抑制剂研究 人中性粒细胞弹性蛋白酶(human neutrophi l elastase，HNE)在机体各种炎症反应、组织损伤重构（如肺炎）、成人呼吸窘迫综合征、肺纤维化、急（慢）性肺损伤、肺水肿、动脉粥样硬化、硬皮病等病理过程中起重要作用，并且具有促进病毒、细菌的侵人及癌细胞转移的功能。炎症机制研究显示，体内该酶及其内源性抑制剂的平衡失调可导致组织基质降解和炎症的恶化。目前，国外用HNE抑制剂来治疗这一类炎症疾病的研究非常广泛，并已成功开发出第一个以抑制HNE为治疗途径的上市药物西维来司钠（sivelestat sodium hydrate），从而促进了HNE抑制剂的研究与开发。 1 BM的生理、病理作用及结构特征 HNE，又称人白细胞弹性蛋白酶（human leukocyte elastase，IRE），属于基质金属蛋白酶类（matrix metalloproteinases,MMPs），即MMP-12,是一种金属离子依赖性基质降解酶，需要微量Zn2+和Ca2+离子的存在才具有酶活性，其底物类型非常广泛，几乎可降解细胞外基质中的所有蛋白。白细胞、巨嗜细胞、肥大细胞内都存在着这种酶，中性粒细胞中其含量很高，大约每106个细胞中含有HNE的总量为 3μg。生理条件下，HNE可以协助清除异源性物质，促进吞噬细胞消除有害病菌，并帮助消化受损组织，有助于伤口的愈合与组织再生。而HNE过量表达则会对机体组织、基质造成危害，表现为破坏血管壁组分，使中性粒细胞更容易渗出血管并向炎症部位趋化集中及释放IL-8、TNF-α等炎症因子；它还能降解细胞基质，催化caspase 3诱导的细胞凋亡。据报道，HNE还能增强病毒、细菌及癌细胞对正常细胞的黏附能力，促进微生物的入侵及癌细胞的增殖和转移。 HNE存在于中性粒细胞嗜苯胺蓝颗粒中，是由 218个氨基酸组成的单一肽链，分子质量大约25.9 kD，含4个二硫键，是丝氨酸蛋白酶家族一员，因此与其他丝氨酸家族蛋白酶具有30%～40％的同源性，最适pH值接近中性。HNE的基因位于19号染色体的短臂末端，是50kb的DNA片段，成熟的中性粒细胞中并无HNE的mRNA表达，说明此种酶只在未成熟的骨
当前位置:生物帮〉实验技巧 > 生物化学技术＞正文 蛋白酶及蛋白酶抑制剂大全 日期:2012—0６－13 来源:互联网 标签: 相关专题:解析蛋白酶活性测定聚焦蛋白酶研究新进展 摘要: 破碎细胞提取蛋白质得同时可释放出蛋白酶,这些蛋白酶需要迅速得被抑制以保持蛋白质不被降解。在蛋白质提取过程中,需要加入蛋白酶抑制剂以防止蛋白水解、以下列举了5种常用得蛋白酶抑制剂与她们各自得作用特点,因为各种蛋白酶对不同蛋白质得敏感性各不相同,因此需要调整各种蛋白酶得浓度 恩必美生物新一轮2－5折生物试剂大促销！?Iｂiｄi细胞灌流培养系统－模拟血管血液流动状态下得细胞培养系统 广州赛诚生物基因表达调控专题 蛋白酶抑制剂 破碎细胞提取蛋白质得同时可释放出蛋白酶,这些蛋白酶需要迅速得被抑制以保持蛋白质不被降解、在蛋白质提取过程中,需要加入蛋白酶抑制剂以防止蛋白水解、以下列举了5种常用得蛋白酶抑制剂与她们各自得作用特点,因为各种蛋白酶对不同蛋白质得敏感性各不相同,因此需要调整各种蛋白酶得浓度。由于蛋白酶抑制剂在液体中得溶解度极低,尤其应注意在缓冲液中加人蛋白酶抑制剂时应充分混匀以减少蛋白酶抑制剂得沉淀。在宝灵曼公司得目录上可查到更完整得蛋白酶与蛋白酶抑制剂表。 常用抑制剂 PＭSＦ 1)抑制丝氨酸蛋白酶(如胰凝乳蛋白酶,胰蛋白酶,凝血酶)与巯基蛋白酶(如木瓜蛋白酶); ２)1０ｍg/ｍｌ溶于异丙醇中; 3)在室温下可保存一年; ４)工作浓度:17~17４ug／ml(0。1～1.0mｍoｌ／L); ５)在水液体溶液中不稳定,必须在每一分离与纯化步骤中加入新鲜得PMSF。 EDTA １)抑制金属蛋白水解酶; 2)0.5ｍol/L水溶液,pH8～９; 3)溶液在4℃稳定六个月以上;
钙蛋白酶系统研究进展 梅承君1,庞辉2,康相涛1*,孙桂荣1(1.河南农业大学,河南郑州450000;2.河南省公安厅,河南郑州450000)摘要阐述了钙蛋白酶系统的分类、结构,并且综述钙蛋白酶系统的一般生物学功能及影响因素。 关键词钙蛋白酶;钙蛋白酶抑制蛋白;钙蛋白酶激活蛋白;嫩度 中图分类号Q55文献标识码A文章编号0517-6611(2006)22-5774-03 Research Adva nce in C alpain System MEI C heng-jun et al(Hen an Agricul tu ral University,Zhen gzh ou,Henan450000) Abstract This paper revie wed th e classi ficati on and structu re of cal pain sys tem,the general biological function and its affecting factors. Key w ords C alp ain;Cal pas tatin;Calpain activator;Tenderness 钙蛋白酶是1964年由Guroff首次发现,1972年Bush等首先在骨骼肌中确认,1976年Da yton等对其进行纯化。钙蛋白酶被鉴定、纯化后,其名称有钙活化中性蛋白酶(Calcium a ctiva te d ne utra l prote ase,Calcium ac tiva ted ne utral SH prote ase, c alpain)简写为CANP(EC,3,4,22,17)、钙激活酶(Ca2+-a ctiva t-ed enzy me)、钙激活中性蛋白酶(Calcium a ctiv ate d ne utral pro-te ase)等。1983年Go ll等提出钙蛋白酶在骨骼肌肌丝蛋白降解过程中起关键作用[1]。目前,已证明它广泛地分布于绝大多数动物的细胞中。在一定浓度的钙离子作用下,钙蛋白酶主要作用于细胞骨架蛋白、蛋白激酶和磷酸酶,还参与细胞内的信号传递[2]。 1钙蛋白酶系统 1.1钙蛋白酶的分类Calpain中的Cal代表钙调蛋白(Ca-l moclulin),pain代表木瓜蛋白酶(Pa pain)。Calpain由钙调蛋白和木瓜蛋白酶两者以非共价键结合而成。钙蛋白酶系由多种同工酶构成。根据分布特点可将其分为组织特异性和非组织特异性蛋白酶两大类[3]。目前研究比较深入的是非组织特异性蛋白酶,已知的2种非组织特异性同工酶是Ca-l pain1和Ca lpain2。Ca lpain1可被L mol水平的钙离子激活,又称L-Calpain;Ca lpain2可被mmol水平的钙离子激活,又称m-Calpain。除活化时需要的钙离子浓度不同和结构略有差别以外,这2种同工酶生化和催化的性质几乎完全相同。红细胞内仅含有Calpain1,其余的哺乳动物细胞中均含有2种形式的钙蛋白酶。由于细胞内钙离子的波动在微摩尔(L mol)浓度水平以下,所以Ca lpain1很可能在正常生理条件下发挥功能,而Calpain2则可能在病理情况(细胞内钙超载条件)下才能激活[4]。 1.2钙蛋白酶系统的结构[5] 1.2.1钙蛋白酶的结构。钙蛋白酶系中L-Calpain和m-Ca-l pain由不均一的二聚体蛋白构成,其大、小亚基的分子量分别为80和30kD。Calpain3、8a、9、11、12和13也都分别由大、小2个亚基构成。大亚基具有催化活性,L-Ca lpain和m-Ca-l pain的大亚基分别由CANP1和CAN P2基因编码;小亚基具有调节功能。尽管L-Calpain和m-Calpain大亚基氨基酸 基金项目国家/8630计划资助项目(2002AA242021);河南省重大科技攻关项目(022*******,0322010600);河南省高校杰出科研人才 创新工程项目(2000KY CX005)。 作者简介梅承君(1979-),女,河南焦作人,硕士研究生,研究方向:家禽育种。*通讯作者。 收稿日期2006-08-09序列有明显差异,但是其高级结构基本相同,都由4个结构域组成,从N端起分别命名为?、ò、ó、?结构域。在大亚基中,结构域?由1~80位氨基酸残基组成,约占全部分子的10%,在蛋白酶激活的情况下很容易发生自溶,由此推测其可能起钙蛋白酶的活性调节作用,L-Calpain和m-Ca lpain仅在结构域?中不同;结构域ò含有81~330位氨基酸残基,约占全部分子的35%,是表现钙蛋白酶水解活性的关键部位,在未被激活的条件下含有2个次级区域[6];结构域ó由331~560位氨基酸残基组成,约占全部分子的35%,其功能为结合钙离子和磷脂,与蛋白酶调控亚基或其他调控蛋白有关;结构域?由561~705位氨基酸残基组成,占全部分子的20%,是结合钙离子的部位,含有4个钙结合蛋白所特有的EF-手型结构(1个EF-手型结构包含2个与钙离子结合环相连的氨基酸螺旋)[7]。L-Ca lpain、m-Calpain、Ca lpain9的小亚基含有2个结构域,这2个结构域由一段富含脯氨酸的序列相连,其中结构域ò与大亚基的结构域?相同,含有4个可以结合钙的EF-手型结构,故也具有结合钙的活性[8]。在其他钙蛋白酶中,如Calpain3、8a、11、12、13,尽管其大亚基也有结构域?,但其大、小亚基之间并没有相互联系。Ca lpain5、6、7、8b、10、15为非典型的钙蛋白酶,其部分结构域缺失或被取代,没有结构域?,因此推测其大、小亚基间也不存在联系。 1.2.2钙蛋白酶抑制蛋白的结构。钙蛋白酶抑制蛋白(Ca-l pastatin)是细胞内专一抑制钙蛋白酶活性的蛋白质。通过抑制钙蛋白酶活性,可抑制肌肉内蛋白质降解,参与肌肉生长过程中蛋白质的更新。在屠宰后的动物体内,它可抑制钙蛋白酶的活性,从而明显影响肉的嫩度。它可以识别钙蛋白酶与钙结合引起的构象变化,并与之特异性结合。钙蛋白酶抑制蛋白通过抑制钙蛋白酶的自溶作用而发挥作用,且该抑制作用不受pH值的影响。钙蛋白酶抑制蛋白共由5个部分(?、ò、ó、?、?)组成,其中4个是钙蛋白酶抑制蛋白的活性中心。当钙蛋白酶被钙离子激活后,如果附近有钙蛋白酶抑制蛋白存在,则将迅速与之结合而抑制蛋白酶活性,从而保证钙蛋白酶对底物只进行局部的特定位点的水解。 目前对钙蛋白酶抑制蛋白的生化性质了解的还不十分清楚。根据钙蛋白酶抑制蛋白在SDS电泳中的行为,可将其分为70和110kD两种类型。70kD类型主要存在于红细胞中,110kD类型存在于肝、心脏和其他组织中。虽然这2种钙蛋白酶抑制蛋白分子大小不同,但它们的功能性质相似。 安徽农业科学,Jou rnal of Anh ui Agri.S ci.2006,34(22):5774-5776责任编辑刘月娟责任校对孙能森
血浆蛋白的测定及临床意义 一、血浆蛋白质测定方法的进展： （一）、比色法：例如总蛋白的测定方法：双缩脲反应法；白蛋白的测定方法：溴甲酚绿法。 （二）、电泳法：是进一步分离蛋白质的方法。 （三）、免疫测定法：是利用抗原抗体反应检测标本中微量物质的分析方法。 特点：（1）特异性好：即某一抗原只与其相应的抗体起反应。 （2）敏感性高，可检测出纳克（ng）水平的的量。 免疫测定法包括： 1、免疫扩散法：敏感度在ug/ml，因此只能用于检测含量较高的蛋白质。且操作 繁琐、时间长，需18-48小时。 2、免疫电泳法：是区带电泳与免疫扩散相结合的方法。一般不能定量，仅用于检 测异常蛋白成分。 3、免疫浊度法：基本原理是：当可溶性抗原与相应抗体特异结合，在二者比例合 适，并有一定浓度的电解质存在时，可以形成不溶性的免疫复合物，即沉淀反 应。 二、免疫浊度法的原理： 免疫浊度法可分为透射免疫比浊法和散射免疫比浊法。 1、透射免疫比浊法：当一定波长的光线通过抗原抗体反应混合液时，被形成的免 疫复合物反射、遮挡或吸收而减弱。在一定范围内，吸光度（A）与IC量呈正 相关。因此当抗体量固定时，根据吸光度可计算出抗原量。要求形成的IC达到 一定的数量，而且分子颗粒较大，否则难以精确测定，因此检测灵敏度相对较 低。 2、散射免疫比浊法：光线通过检测溶液时，被反应形成的抗原抗体复合物折射而 部分偏转，产生散射光，散射光强度（I）与样本的IC量、散射夹角（θ）成 正比，而与入射光波长成反比。 散射免疫比浊法又可分为终点散射比浊法和速率散射免疫比浊法 （1）终点散射免疫比浊法：当反应达到平衡时进行检测，通常需10-30min，且灵敏度较低。 （2）速率散射免疫比浊法：由于抗原与抗体结合形成免疫复合物的速度在单
Src（sarcoma gene）受体激酶家族抑制剂 研究综述 药学0703班 U200717953 周俊
Src（sarcoma gene）受体激酶家族抑制剂研究综述 摘要；本文介绍了src的组成，作用以及与相关疾病的作用，总结了近几年研究src激酶家 族的方向，以src激酶家族作为靶点寻找抗癌药物中的一些进展和成果，并逐一分析比较有代表性的药物，如喹啉衍生物，嘧啶衍生物等等化合物，最后总结近期成果，指出现有工作的不足和未来的研究方向。 关键词鸡肉瘤病毒基因（src）酪氨酸蛋白激酶抑制因子ATP结合位点 引言： sarcoma gene（鸡肉瘤病毒基因，以下简称src）的组成 Src是一类癌基因，其表达产物主要是酪氨酸蛋白激酶类。Src在许多组织细胞中表达，在癌症发病机制中处于重要的地位，是肿瘤，癌症分子表达途径的重要的激酶。Src家族是研究最早最深入的家族，包括Blk, Brk, Fgr, Frk,Fyn, Hck, Lck, Lyn, c-Src, Srm,c-Yes等成员。根据氨基酸序列，可以分为两个亚族：一族是Src, Fyn, Yes and Fgr并且广泛在不同的组织中表达，Lck, Blk, Lyn and Hck和造血细胞有关.研究表明，Src与其他众多酶类可联合在一起促进多个细胞反应进程。Src 与多种激酶受体偶联，包括酪氨酸激酶受体，整合单白受体，G蛋白偶联受体等。.通过偶联作用影响细胞生长，发育，乃至转移扩散。最好的例子就是与EGFR（一种有关细胞生长的受体）的结合，Src可以使EGFR自身磷酸化，降低EGFR 的中间体的调节与胞吞作用。 除了牵涉到细胞内的反应，Src可能也在初级肿瘤细胞的转移中扮演着一个重要的角色。实际上Src转移细胞的存在减少了ECM反应以及组织反应的损失。分子调节这些过程的机理建立在Src和FAK的反应的基础上。Src与粘附分子有关。Src的磷酸化使得在粘附分子上的整联蛋白受体接收的黏着性与转移信号得以传播。 Src的作用靶点 一般来说就目前的研究而言，src的作用靶点有以下几类： 第一种是以src激酶为作用靶点。到目前为止还没有被批准的src激酶抑制剂，但是新的分子，有选择性的有潜力的化合物已经在被合成。设计测试更加有效的抑制剂，运用分子模型筛选技术，组合化学研发新的药物已经成为趋势。一般而言，一个抑制剂的选择性应该严格作用于癌细胞而不干扰正常细胞的生长进程，抑制剂也应间接作用于酶合成这样的在癌细胞进程中也会发生的物质。 第二种就是以SH2和SH3区域为靶点的药物，该药物是很多疾病的重要靶点，如癌症cardiovascular ，restenosis。这些分子阻断src和其他蛋白底物作用属于信号阻断途径，一般而言，SH2区域识别特殊的多肽包括一个磷酸化的酪氨酸残基。SH2的抑制剂分子设计基于氨基酸特定的排列顺序。在许多例子中，多肽库中产生的第一代配体给与了重要的信息以成功设计连接无受体的src的SH2的受体。而SH3的抑制剂则是基于与该区域作用的分子的多肽，其配体能够和SH3区域的酪氨酸富集区作用，但是一般而言这种作用是很弱的，因为形成的离子键和氢键数量有限。因此SH3抑制剂KI值在微摩尔范围内很低。尽管合成此种抑制剂的效果已经显现，但只有少量例子在文献中出现。 Src激酶家族的作用 Src酪氨酸激酶联系的受体对细胞的生长和分裂是非常重要的，它具有双重作用，既可以
畜牧兽医科技信息２００７．０６ １１ 作者简介：范艳，女，汉，山西介休人。硕士研究生。生物化学与分子生物学专业。 ’通讯作者：常泓，女，汉，博士，教授。主要研究钙激活酶激活 蛋白对肉嫩化的调解机理。 专论与综述 钙激活蛋白酶系统是高度可调的、依赖于Ｃａ２＋的蛋白质水解酶系统，包括ｃａｌｐａｉｎｓ（钙激活蛋白酶）、ｃａｌｐａｓｔａｔｉｎ（钙激活酶抑制蛋白） 和ｃａｌｐａｉｎａｃｔｉｖａｔｏｒ（钙激活酶激活蛋 白）。自１９６４年发现后，ｃａｌｐａｉｎ就越来越引起人们的重视。在过去的５０年内，大量的研究报道主要集中在ｃａｌｐａｉｎ和 ｃａｌｐａｓｔａｔｉｎ的生理和病理功能以及它们之间的相互作用机理 上。而对ｃａｌｐａｉｎａｃｔｉｖａｔｏｒ的研究很少。ｃａｌｐａｉｎａｃｔｉｖａｔｏｒ是 ｃａｌｐａｉｎ的正调节因子，是一种蛋白质。本文主要综述了ｃａｌ－ ｐａｉｎａｃｔｉｖａｔｏｒ的结构、 功能及其研究进展，重点论述了ｃａｌ－ｐａｉｎａｃｔｉｖａｔｏｒ的结构和功能及在肉嫩化中的作用机理。１ｃａｌｐａｉｎａｃｔｉｖａｔｏｒ的研究历史 ｃａｌｐａｉｎａｃｔｉｖａｔｏｒ是ｃａｌｐａｉｎ的正调节因子，是一种蛋白 质。首次发现ｃａｌｐａｉｎａｃｔｉｖａｔｏｒ的是美国Ｔｅｘａｓ健康科学中心大学生理和药理系ＤｅＭａｒｔｉｎｏ等人，他在１９８１年研究钙调蛋白（ＣａＭ）对ｃａｌｐａｉｎ的作用时发现此激活蛋白。 ＤｅＭａｒｔｉｎｏ等人在从牛脑中分离ＣａＭ时发现，牛脑中存 在一种能激活ｃａｌｐａｉｎ并明显区分于ＣａＭ的一种分子量特别小（约２０ｋＤ）的热稳定性蛋白质，它能提高ｃａｌｐａｉｎ的水解速率约２５倍，但不改变其对Ｃａ２＋的敏感度。 随后日本Ｋｏｂｅ医科大学Ｔａｋｅｙａｍａ等人于１９８５年在牛脑微粒体细胞中也分离得到此激活蛋白，并指明此激活蛋白既能激活ｃａｌｐａｉｎ－Ⅰ也能激活ｃａｌｐａｉｎ－Ⅱ，其分子量约为 １５ｋＤ。 １９８８年意大利热那瓦大学生化研究所的Ｐｏｎｔｒｅｍｏｌｉ和Ｍｅｌｌｏｎｉ等人对ｃａｌｐａｉｎａｃｔｉｖａｔｏｒ进行了进一步的研究，结果 表明从嗜中性细胞中提取的ｃａｌｐａｉｎａｃｔｉｖａｔｏｒ可以提高ｃａｌ－ ｐａｉｎ对Ｃａ２＋的敏感度。 １９９０年Ｍｅｌｌｏｎｉ等人又从鼠骨骼肌中提取得到了ｃａｌ－ｐａｉｎａｃｔｉｖａｔｏｒ，而且从动力学角度入手对此激活蛋白和抑制 蛋白的酶学特性，及它们之间的竞争性关系进行了研究。Ｍｅｌｌｏｎｉ等于１９９１年的研究主要是对ｃａｌｐａｉｎａｃｔｉｖａｔｏｒ的作 用机理进行研究，他们的初步研究结果为：ｃａｌｐａｉｎａｃｔｉｖａｔｏｒ可在较正常情况下ｃａｌｐａｉｎ所需Ｃａ２＋浓度低２５倍的情况下，提高８０ｋＤ的大亚基转化为７５ｋＤ亚基的速率；可以抑制 ｃａｌｐａｉｎⅡ的自溶作用，可以增加蛋白酶对同源性ｃａｌｐａｓｔａｔｉｎ 的降解作用；激活蛋白与ｃａｌｐａｉｎⅡ形成１∶１的复合体。 随后，日本科学家ＥｉｉｃｈｉＳｈｉｂａ等从人血小板中分离得到ｃａｌｐａｉｎａｃｔｉｖａｔｏｒ，意大利科学家ＳａｌａｍｉｎｏＦｒａｎｃａ等从人红细胞中也分离得到此因子。 １９９８年和２０００年Ｍｅｌｌｏｎｉ等对Ｃａｌｐａｉｎａｃｔｉｖａｔｏｒ的研究 取得了突破性的进展。在这些研究中，Ｍｅｌｌｏｎｉ等明确指出， ＵＫ１１４和ＡＣＢＰ（酰基辅酶Ａ结合蛋白）分别是ｃａｌｐａｉｎ－Ⅰ 和ｃａｌｐａｉｎ－Ⅱ的激活蛋白。随后，Ｐｏｎｔｒｅｍｏｌｉ和Ｍｅｌｌｏｎｉ等对 ｃａｌｐａｉｎａｃｔｉｖａｔｏｒ研究不断深入，测得了其氨基酸顺序。２０００ 年Ｍｅｌｌｏｎｉ等还对此激活蛋白在细胞内的定位进行了研究。 ２ｃａｌｐａｉｎａｃｔｉｖａｔｏｒ的结构２．１ ＵＫ１１４的结构 Ｍｅｌｌｏｎｉｅｔａｌ．，１９９８报道，从牛脑中分 离的ｃａｌｐａｉｎ－Ⅰ的激活因子为蛋白质，分子量为３０ｋＤ，分子结构为二聚体，广泛分布于各种动物细胞中。不同来源的 ＵＫ１１４对ｃａｌｐａｉｎ的激活特性是相同的。Ｃａｌｐａｉｎａｃｔｉｖａｔｏｒ的 氨基酸顺序与山羊肝脏蛋白ＵＫ１１４几乎一样；与小鼠ＨＲ１２蛋白很相似；与流感嗜血杆菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）和枯草芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｌｉｓ）获得的ＹｊｇＦ和ＹａｂＪ两种热激蛋白有很大的相似点，这就说明ｃａｌｐａｉｎａｃｔｉｖａｔｏｒ与这些蛋白一样是陪伴蛋白家族中的成员，这也就决定了ｃａｌｐａｉｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ在发挥作用时是它与Ｃａ２＋和ｃａｌｐａｉｎ的复合体发挥 作用，从而对ｃａｌｐａｉｎ起到激活作用。另外，这些蛋白的中心区域富含可以首先转变为螺旋结构的氨基酸。 ２．２ＡＣＢＰ的结构对于ＡＣＢＰ，Ｍｅｌｌｏｎｉ等２０００年报道，其 分子量约为２０ｋＤ，为二聚体。氨基酸序列与ＵＫ１１４基本相同，但其具体结构还未见报道。 ３ｃａｌｐａｉｎａｃｔｉｖａｔｏｒ对ｃａｌｐａｉｎ的激活机理 Ｃａｌｐａｉｎａｃｔｉｖａｔｏｒ是明显区别于ＣａＭ的ｃａｌｐａｉｎ的一种 激活蛋白，是一种热稳定性蛋白质。从牛脑中提取出的这种 钙激活酶激活蛋白的研究进展 范 艳，梁文涛，尹淑琴，常 泓[ （山西农业大学生命科学院，太谷０３０８０１） 摘 要：钙激活酶激活蛋白是钙蛋白酶的正调节因子，是其最直接的调节者。本文就钙激活酶激活蛋白的研究历史、现状发展以及意义详细论述，重点论述了其结构和功能及在肉嫩化中的作用机理。关键词：钙激活酶激活蛋白；钙蛋白酶；肉嫩化