实验一 蛋白质的两性反应及等电点的测定[2]

一、实验目的1. 了解蛋白质的两性反应特性。

2. 掌握蛋白质在酸碱环境中的电荷变化及其对溶解度的影响。

3. 学习通过实验观察蛋白质在不同pH值条件下的沉淀现象，并确定其等电点。

二、实验原理蛋白质是由氨基酸通过肽键连接而成的高分子化合物，分子中包含有氨基（-NH2）和羧基（-COOH）等基团。

这些基团在不同pH值条件下可以解离，从而使得蛋白质分子带正电荷或负电荷。

蛋白质的这种性质称为两性反应。

当蛋白质溶液的pH值等于其等电点时，蛋白质分子所带的正负电荷相等，此时蛋白质的溶解度最低，容易形成沉淀。

三、实验材料与试剂1. 实验材料：鸡蛋清、蒸馏水、pH试纸、滴管、试管等。

2. 试剂：1mol/L HCl、1mol/L NaOH、1mol/L Tris-HCl缓冲液（pH 7.0）、1mol/L硼砂缓冲液（pH 8.5）、1mol/L醋酸缓冲液（pH 4.5）。

四、实验步骤1. 将鸡蛋清用蒸馏水稀释至一定浓度。

2. 分别取适量稀释后的鸡蛋清溶液于试管中。

3. 使用pH试纸测定稀释后的鸡蛋清溶液的pH值。

4. 将1mol/L HCl逐滴加入鸡蛋清溶液中，观察并记录溶液pH值的变化及蛋白质沉淀现象。

5. 重复步骤4，使用1mol/L NaOH、1mol/L Tris-HCl缓冲液、1mol/L硼砂缓冲液和1mol/L醋酸缓冲液分别调节鸡蛋清溶液的pH值，观察并记录溶液pH值的变化及蛋白质沉淀现象。

6. 通过对比不同pH值条件下的蛋白质沉淀现象，确定鸡蛋清溶液的等电点。

五、实验结果与分析1. 在pH 4.5时，鸡蛋清溶液开始出现沉淀，随着pH值的降低，沉淀逐渐增多。

2. 当pH值达到2.5时，沉淀量达到最大，此时蛋白质所带的正负电荷相等，为等电点。

3. 随着pH值的升高，沉淀逐渐减少，当pH值达到8.5时，沉淀基本消失。

六、实验结论1. 蛋白质具有两性反应特性，在不同pH值条件下，其电荷和溶解度发生变化。

2. 通过实验观察蛋白质在不同pH值条件下的沉淀现象，可以确定其等电点。

蛋白质等电点测定实验报告蛋白质等电点测定蛋白质等电点测定及性质实验一、目的：了解等电点的意义及其与蛋白质分子聚沉能力的关系。

初步学会测定蛋白质等电点的基本方法，了解蛋白质的性质。

二、原理：固体颗粒在液体中为什么能够带电？当固体与液体接触时，固体可以从溶液中选择性吸附某种离子，也可以是固体分子本身发生电离作用而使离子进入溶液，以致使固液两相分别带有不同符号的电荷，由于电中性的要求，带电表面附近的液体中必有与固体表面电荷数量相等但符号相反的多余的反离子。

在界面上带电表面和反离子形成了双电层的结构。

在两种不同物质的界面上，正负电荷分别排列成的面层。

对于双电层的具体结构，一百多年来不同学者提出了不同的看法。

最早于1879年Helmholz提出平板型模型；1910年Gouy和1913年Chapman修正了平板型模型，提出了扩散双电层模型；后来Stern又提出了Stern模型。

根据O.斯特恩的观点，一部分反离子由于电性吸引或非电性的特性吸引作用（例如范德华力）而和表面紧密结合，构成吸附层（或称紧密层、斯特恩层）。

其余的离子则扩散地分布在溶液中，构成双电层的扩散层（或称滑移面）。

由于带电表面的吸引作用，在扩散层中反离子的浓度远大于同号离子。

离表面越远，过剩的反离子越少，直至在溶液内部反离子的浓度与同号离子相等。

紧密层：溶液中反离子及溶剂分子受到足够大的静电力，范德华力或特性吸附力，而紧密吸附在固体表面上。

其余反离子则构成扩散层。

滑动面：指固液两相发生相对移动的界面，是凹凸不平的曲面。

滑动面至溶液本体间的电势差称为ζ电势。

固体颗粒带电量的大小及测量方式？ζ电势只有在固液两相发生相对移动时才能呈现出来。

ζ电势的大小由Zeta电位表示，其数值的大小反映了胶粒带电的程度，其数值越高表明胶粒带电越多，扩散层越厚。

一般来说，以pH值为横坐标，Zeta电位为纵坐标作图，Zeta电位为零对应的pH值即为等电点。

对于蛋白质分子来说：蛋白质分子的大小在胶粒范围内，约1～100微米。

蛋白质的两性性质及等电点的测定一 实验目的通过实验了解蛋白质的两性性质和等电点的意义及与蛋白质分子聚沉的关系。

二 实验原理蛋白质是由许多氨基酸组成的，故也是两性电解质。

蛋白质分子中可以解离的基团除末端a －氨基与羧基外，还有肽链上氨基酸残基的侧链基团，如非a －羧基及氨基、胍基、咪唑基等基团，它们都能解离成带电基团。

因此，蛋白质分子与氨基酸一样，在酸性溶液中作碱性解离，成为带正电荷的阳离子，在碱性溶液中作酸性解离，成为带负电荷的阴离子。

HRCOOHNH 3+HRCOONH 3+HRCOO H 2NOH在一定氢离子浓度时，蛋白质分子的酸性解离与碱性解离相等，成为中性颗粒，所带正负电荷相等，净电荷为零，此时溶液的pH 值称为蛋白质的等电点（pI ）。

在等电点时蛋白质分子在电场中既不向阴极移动，也不向阳极移动。

而且分子间因碰撞而引起聚沉的倾向增加。

所以此时蛋白质溶解度最小，若再加入乙醇、丙酮等试剂与蛋白质分子争夺水分子，减低了蛋白质分子外水化膜的厚度，而使浑浊度增加，蛋白质等电点与所含氨基酸种类和数量有关。

若蛋白质含酸性氨基酸多，则等电点多略酸性，如胃蛋白酶的等电点为pH1左右，也有一些蛋白质含碱性氨基酸多，则等电点偏碱性。

如鱼精蛋白等电点为pH12.0-12.4，含酸性和碱性氨基酸残基数目相近的蛋白质，其等电点为中性偏酸约5左右。

本实验采用酪蛋白在不同pH 溶液中形成的混浊度来确定其等电点，即混浊度最大的溶液pH 值为该种蛋白质的等电点。

三 实验设备(1) 试管架 1个(2) 吸管 1mL 2支 ；2mL 1支 ；5mL 1支；10mL 1支 (3) 试管 1.5×15mL 10支 (4) 滴管 2支四 实验试剂（1）1mol/L 醋酸溶液：量取99.5%醋酸(比重1.05)2.875 mL ，加水至50 mL 。

（2）0.1mol/L 醋酸溶液：量取1mol/L 醋酸5 mL ，加水至50 mL 。

实验一蛋白质的两性反应及等电点的测定2一、实验目的1、学习蛋白质的两性反应；二、实验仪器pH计、电泳槽、电源、紫外分光光度计、比色皿、恒温水浴箱等。

三、实验原理蛋白质分子中含有大量的离子基团，它们可以接受或释放H+离子，从而表现出两性反应的特征。

根据pH的变化，蛋白质分子的电荷状态和溶解性都会发生改变。

不同蛋白质的两性反应的pH区间有所不同，但都表现出了一定的规律性。

一般来说，蛋白质的等电点（pI）即蛋白质分子带的净电荷等于零时的pH值。

在这个pH值附近，蛋白质分子的溶解度最低。

2、等电聚焦电泳等电聚焦电泳（isoelectric focusing, IEF）是基于蛋白质分子的等电点原理，运用电场作用于溶液中的蛋白质使其向等电点运动，到达等电点时就不再运动，电场作用力为零，从而使蛋白质在等电点处聚焦。

该技术可以高效地将蛋白质分子分离开，并且不产生电荷的副反应。

IEF的缺点是需要高纯度的蛋白质样品和复杂的设备。

四、实验操作1、示范两性反应的现象制备两个100mL的肉汤。

其中一个加入适量的氢氧化钠溶液，并记录溶液的pH值。

将两个溶液放在一起，观察两溶液之间的相互作用。

2、测定牛血清白蛋白（BSA）的pI值将0.1g的BSA溶解于100mL的蒸馏水中，并调整pH至2.0。

加入适量的氢氧化钠溶液，逐渐增加溶液的pH值。

每次变化pH值0.5时，用pH计测定一次溶液的pH值，并记录BSA 对应的电泳距离。

将记录的数据制成曲线图。

由BSA的等电点的定义，等电点的pH值应该是曲线的最低点。

3、等电聚焦电泳测定蛋白质的等电点（1）样品的制备制备10mL的蛋白质样品，如卵清蛋白（ovalbumin）、BSA、牛血浆血清白蛋白（BSC）、胰岛素等。

将蛋白质样品以蒸馏水稀释至10μg/μL。

（2）样品的前处理a. 加入10μL的pH 3-10缓冲液、10μL的非离子型洗涤剂和80μL的样品。

b. 活化酶处理：在样品中加入基质，辅助样品中蛋白酶的活化。

蛋白质的两性反应和等电点测定一、实验目的1.熟悉蛋白质的沉淀反应、颜色反应和两性反应及其机理。

2.掌握蛋白质等电点的测定方法及其原理。

3.掌握蛋白质电荷的测定方法及其机理。

二、实验原理(一)蛋白质的沉淀反应原理蛋白质的水溶液是一种比较稳定的亲水胶体，这是因为蛋白质颗粒表面带有很多极性基团，如—NH3+，—COO-，—SH，—CONH2等和水有高度亲和性，当蛋白质与水相遇时，就很容易被蛋白质吸住，在蛋白质颗粒外面形成一层水膜(又称水化层)。

水膜的存在使蛋白颗粒相互隔开，颗粒之间不会碰撞而聚成大颗粒。

因此蛋白质在溶液中比较稳定而不会沉淀。

蛋白质能形成较稳定的亲水胶体的另一个原因，是因为蛋白质颗粒在非等电状态时带有相同电荷，使蛋白质颗粒之间相互排斥，保持一定距离，不致相互凝集沉淀。

蛋白质由于带有电荷和水膜，因此在水溶液中形成稳定的胶体。

当某些物理化学因素破坏了蛋白质的水膜或中和了蛋白质的电荷，则蛋白质胶体溶液就不稳定而出现沉淀现象。

蛋白质可因加入下列试剂而产生沉淀：1.加盐类如硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等可以破坏蛋白质胶体周围的水膜，同时又中和了蛋白质分子的电荷，因此使蛋白质产生沉淀，这种加盐使蛋白质沉淀析出的现象称盐析。

盐析法是分离制备蛋白质的常用方法，不同蛋白质盐析时所需的盐浓度不同，因此调节盐浓度，可使混合蛋白质溶液中的几种蛋白质分段析出，这种方法叫做分段盐析。

但中性盐并不破坏蛋白质的分子结构和性质，因此，若除去或降低盐的浓度，蛋白质就会重新溶解。

2.加有机溶剂如酒精、丙酮等可使蛋白质产生沉淀，这是由于这些有机溶剂和水有较强的作用，破坏了蛋白质分子周围的水膜，因此发生沉淀作用。

若及时将蛋白质沉淀与丙酮或乙醇分离，蛋白质沉淀则可重新溶解于水中。

3.重金属盐如氯化汞、硝酸银、醋酸铅及三氯化铁等。

这是因为蛋白质在碱性溶液中带负离子，可与这些重金属的正离子作用而生成不易溶解的盐而沉淀。

4.某些酸类如苦味酸、单宁酸、三氯乙酸等能和蛋白质化合成不溶解的蛋白质盐而沉淀。

课程：基础生物化学实验学院：班级：学号：姓名：成绩：评阅教师：实验一蛋白质的等电点和含量测定1．蛋白质的等电点测定（pH值沉淀法）一、实验目的1．学习和掌握蛋白质的两性解离性质。

2．掌握pH值法测定蛋白质等电点的一般原理和操作方法。

二、实验原理三、试剂与仪器、耗材1．试剂2．仪器耗材四、实验方法取4支同样规格的试管，按下表顺序分别精确地加入各试剂，加入后立即混匀，加一管，摇匀一管。

静置，观察各管在不同时间的混浊度。

观察时可用+，++，+++，表示浑浊度。

表1试剂管号H2O/mL0.01mol/LHAC/mL0.10mol/LHAC/mL1.00mol/LHAC/mLpH蛋白质溶液/mL观察现象0 min 10 min 20 min1234五、实验结果、计算与分析1.观察各管中清澈度变化，记录结果并解释现象.2.确定酪蛋白的等电点。

六、思考题蛋白质在等电点沉淀的原因是什么？影响该实验结果准确性的因素有哪些？2. 双缩脲法测定蛋白质含量一、实验目的1．学习双缩脲法测定蛋白质浓度的基本原理。

2．学习和掌握双缩脲法测定蛋白质浓度的实验操作方法。

二、实验原理三、试剂与仪器、耗材1．试剂2．仪器耗材四、实验方法1.制标准曲线取试管6支，编号0-5，按下表顺序加入各试剂。

表2试管试剂/mL0 1 2 3 4 5标准牛血清白蛋白0.0 0.4 0.8 1.2 1.6 2.0 蒸馏水 2.0 1.6 1.2 0.8 0.4 0.0 双缩脲试剂 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 蛋白质含量 mg/mL 0.0 2.0 4.0 6.0 8.0 10.0上述试剂加完后，充分混匀，室温放置30 min。

以0号管为对照管，于540 nm处比色测定吸光值，记下各管吸光度，以每管蛋白质含量为横坐标，对应吸光度为纵坐标，作吸光度-蛋白质含量标准曲线。

2．样品测定五、实验结果、计算与分析1．使用Excel程序绘制标准曲线，计算回归方程。

实验一蛋白质的两性性质和酪蛋白等电点的测定实验一蛋白质的两性性质和酪蛋白等电点的测定一、实验目的与要求1.掌握蛋白质的两性解离性质；2.熟练掌握测定蛋白质等电点的基本方法。

二、实验原理蛋白质是由氨基酸组成的高分子化合物。

虽然大多数的α-氨基和α-羧基成肽键结合，但仍有N末端的氨基和C末端的羧基存在，同时侧链上还有一些可解离基团。

因此，蛋白质和氨基酸一样是两性电解质。

调节蛋白质溶液的pH，可使蛋白质带上正电荷或负电荷；在某一pH时，其分子中所带的正电荷和负电荷相等，此时溶液中蛋白质以兼性离子形式存在。

在外加电场中蛋白质分子既不向正极移动也不向负极移动，此时溶液的pH 称为该蛋白质的等电点，蛋白质的溶解度最小。

不同的蛋白质，因氨基酸的组成不同有不同的等电点。

三、实验材料、试剂与仪器1.材料与试剂NaOH、HCl、乙酸、溴甲酚绿、酪蛋白、精密pH试纸等。

0.5 %酪蛋白溶液：0.5 g酪蛋白，先加入几滴1 mol/L的NaOH使其湿润，用玻璃棒搅拌研磨使成浆糊状，逐滴加入0.01 mol/L的NaOH使其完全溶解后定容到100 mL.酪蛋白—乙酸钠溶液：将0.25 g酪蛋白加5 mL 1 mol/L的NaOH溶解，加20 mL水温热使其完全溶解后，再加入5 mL 1 mol/L的乙酸，混合后转入50 mL的容量瓶内，加水到刻度，混匀备用（pH应为8~8.5）；0.01%的溴甲酚绿溶液：将0.01g溴甲酚绿溶解于100mL含有0.57mL0.1mol/LNaOH的水中。

该指示剂的变色范围是：酸性（pH3.8）为黄色，pH5.4为蓝色；0.02 mol/L的HCl溶液：将0.8 mL浓盐酸用蒸馏水稀释到480 mL即可；0.02 mol/L的NaOH溶液：将0.8 g NaOH溶解于100 mL水中，最终加入到1000 mL；0.1 mol/L的乙酸溶液：将1 mL冰醋酸用水稀释到170 mL；0.01 mol/L的乙酸溶液：将0.1 mL冰醋酸用水稀释到170 mL；1 mol/L的乙酸溶液：1 mL冰醋酸（17 mol/L）加水到17 mL即可。

蛋白质两性性质及等电点的测定蛋白质是生物体中极其重要的有机化合物，是构成生物体的基本组成部分之一。

蛋白质具有很多种类和功能，不同的蛋白质在生物体内发挥着不同的作用。

蛋白质的性质也因其结构而异，其中包括两性性质和等电点。

本文将介绍蛋白质的两性性质及等电点的测定。

一、蛋白质的两性性质蛋白质是由多肽链组成的，其分子中含有氨基酸残基。

这些氨基酸残基中的羧基（-COOH）和氨基（-NH2）可以参与酸碱反应，所以蛋白质具有两性性质，能够在不同的pH值下呈现不同的电离状态。

1. 在低pH值下，蛋白质中的羧基处于质子化状态，成为正电荷，而氨基则不受质子化，保持中性。

因此，在低pH值时，蛋白质呈正电荷状态，称为阳离子。

2. 在高pH值下，蛋白质中的氨基受到氢离子的质子化，成为正电荷，而羧基则不受质子化，保持中性。

因此，在高pH值时，蛋白质呈负电荷状态，称为阴离子。

3. 在等电点附近，蛋白质的质子化和去质子化同时发生，羧基和氨基的质子化程度相等，呈中性状态。

此时，蛋白质没有净电荷，称为等电点。

由于蛋白质的两性性质，可以影响其溶解性、折叠构象和相互作用等特性，对其功能和生物学作用具有重要影响。

二、蛋白质等电点的测定等电点是蛋白质具有中性状态的pH值。

测定蛋白质的等电点可以帮助我们了解其溶解性、电动力学性质和酸碱加工过程中的变化。

常用的测定等电点的方法有以下几种：1. pH梯度电泳法：这是一种常用且广泛应用的测定等电点的方法。

在一个pH梯度上进行电泳，当蛋白质离子迁移速率和电场力相等时，达到等电点。

可以通过在梯度上观察蛋白质带的形成和移动情况来确定等电点。

2. 等电聚焦电泳法：这是一种利用电场作用下蛋白质在凝胶上垂直移动的方法，根据蛋白质在凝胶中的移动速率和电场力相等时的pH值来测定等电点。

3. 等电点电位计法：该方法利用等电点时蛋白质没有净电荷的特性，使用电位计测量蛋白质在不同pH值下的电位变化，找出没有净电荷时的pH值，即为等电点。

实验六蛋白质的性质（二）蛋白质的等电点测定和沉淀反应一、蛋白质等电点的测定（一）目的1、了解蛋白质的两性解离性质。

2、学习测定蛋白质等电点的一种方法。

（二）原理蛋白质是两性电解质，在溶液中存在下列平衡：蛋白质分子的解离状态和解离程度受溶液的酸碱度影响。

当溶掖的pH达到一定数值时，蛋白质颗粒上正负电荷的数目相等，在电场中，蛋白质既不向阴极移动，也不向阳极移动，此时溶液的PH值称为此蛋白质的等电点(p1)。

不同的蛋白质有其各自的等电点。

在等电点时，蛋白质的理化性质都有变化，可利用此种性质来测定各种蛋白质的等电点。

最常用的方法是利用物质在达到等电点时溶解度最小的性质，测定蛋白质溶液的溶解度呈现最低时的溶液pH值，此时的pH倍即为该蛋白质的等电点。

本实验通过观察酪蛋白在不同pH溶液中的溶解度，来测定酪蛋白的等电点。

用醋酸与醋酸钠配制成各种不同PH值的缓冲液．然后向各缓冲溶液中加入酪蛋白，观察沉淀出现并测定酪蛋白的等电点。

（三）实验器材1、水浴锅。

2、温度计。

3、200mL锥形瓶。

4、100mL容量瓶。

5、移液管。

6、试管。

7、试管架。

8、研钵。

（四）材料与试剂1、0.5％酪蛋白醋酸钠溶液：取0.5g酪蛋白．加少量水在研钵中仔细地研磨，将所得的蛋白质液移入200 mL锥形瓶内，并用少量40～50℃的温水洗涤研钵，将洗涤液也移入锥形瓶内。

加入10 mLlmol/L醋酸钠溶液。

把锥形瓶放入50℃水浴中，并小心地旋转锥形瓶，直到酪蛋白完全溶解为止。

将锥形瓶内的溶液全部移至100 mL容量瓶内，加水至到度，塞紧玻璃塞，混匀。

2、1mo1/L醋酸溶液。

3、0.1mo1/L醋酸溶液。

4、0.01mo1/L醋酸镕液.（五）操作方法2、。

静置20min后，再观察每支试管内溶液的混浊度，以—、＋、＋＋，＋＋＋符号表示沉淀的多少，根据观察结果，指出那一个pH是酪蛋白的等电点。

二、蛋白质的沉淀及变性（一）目的1、加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识。

蛋白质的两性性质及等电点的测定1 实验目的1.1 了解蛋白质的两性性质及等电点与蛋白质分子聚沉的关系。

1.2 掌握通过聚沉测定蛋白质等电点的方法。

2 实验原理蛋白质是两性电解质。

蛋白质分子中可以解离的基团除N端α―氨基与C端α―羧基外，还有肽链上某些氨基酸残基的侧链基团，如酚基、巯基、胍基、咪唑基等基团，它们都能解离为带电基团。

因此，在蛋白质溶液中存在着下列平衡：阳离子两性离子阴离子pH < pI pH = pI pH > pI电场中：移向阴极不移动移向阳极调节溶液的pH使蛋白质分子的酸性解离与碱性解离相等，即所带正负电荷相等，净电荷为零，此时溶液的pH值称为蛋白质的等电点。

在等电点时，蛋白质溶解度最小，溶液的混浊度最大，配制不同pH的缓冲液，观察蛋白质在这些缓冲液中的溶解情况即可确定蛋白质的等电点。

3 主要仪器与试剂3.1 器材试管架；试管1.5×15cm（×8）；移液管1mL（×4），2mL（×4），10mL（×2）；胶头滴管（×2）。

3.2 试剂1mol/L乙酸：吸取99.5%乙酸（比重1.05）2.875mL，加水至50mL。

0.1mol/L乙酸：吸取1mol/L乙酸5mL，加水至50mL。

0.01mol/L乙酸：吸取0.1mol/L乙酸5mL，加水至50mL。

0.2mol/L NaOH：称取NaOH2.000g，加水至50mL，配成1mol/L NaOH。

然后量取1mol/L NaOH 10mL，加水至50mL, 配成0.2mol/L NaOH。

0.2mol/L HCl：吸取37.2%（比重1.19）HCl 4.17mL，加水至50mL，配成1mol/L HCl。

然后吸取1mol/L HCl 10mL，加水至50mL，配成0.2mol/L HCl。

0.01%溴甲酚绿指示剂：称取溴甲酚绿0.005g，加0.29mL 1mol/L NaOH，然后加水至50mL。

蛋白质的两性反应实验报告一、实验目的1、了解蛋白质的两性解离性质。

2、掌握蛋白质两性反应的实验操作和现象观察。

二、实验原理蛋白质是由氨基酸组成的大分子化合物，其分子中同时含有可解离的酸性基团（如羧基 COOH）和碱性基团（如氨基 NH₂）。

在一定的pH 条件下，蛋白质会发生解离，使其分子带上正电荷或负电荷。

当溶液的 pH 达到某一特定值时，蛋白质所带的正电荷和负电荷数量相等，此时蛋白质的净电荷为零，这个 pH 值称为蛋白质的等电点（pI）。

在等电点以上的 pH 环境中，蛋白质解离成阴离子，带负电荷；在等电点以下的 pH 环境中，蛋白质解离成阳离子，带正电荷。

因此，通过调节溶液的 pH，可以观察到蛋白质的两性反应。

三、实验材料与设备1、实验材料鸡蛋清溶液04%酪蛋白乙酸钠溶液1%醋酸溶液01mol/L 盐酸溶液01mol/L 氢氧化钠溶液001%溴甲酚绿指示剂广泛 pH 试纸2、实验设备试管滴管移液管离心机四、实验步骤1、蛋白质的两性反应取 4 支试管，编号为 1、2、3、4。

向 1 号试管中加入 2mL 鸡蛋清溶液，滴加 2 滴 01mol/L 盐酸溶液，边加边振荡，观察溶液的变化。

向 2 号试管中加入 2mL 鸡蛋清溶液，滴加 2 滴 01mol/L 氢氧化钠溶液，边加边振荡，观察溶液的变化。

向 3 号试管中加入 2mL 04%酪蛋白乙酸钠溶液，滴加 2 滴 1%醋酸溶液，边加边振荡，观察溶液的变化。

向 4 号试管中加入 2mL 04%酪蛋白乙酸钠溶液，滴加 2 滴 01mol/L 氢氧化钠溶液，边加边振荡，观察溶液的变化。

2、蛋白质等电点的测定取 5 支试管，编号为 5、6、7、8、9。

向 5 号试管中加入 4mL 04%酪蛋白乙酸钠溶液。

向 6 号试管中加入 2mL 04%酪蛋白乙酸钠溶液和 2mL 01mol/L 盐酸溶液，摇匀。

向 7 号试管中加入 2mL 04%酪蛋白乙酸钠溶液和 2mL 01mol/L 氢氧化钠溶液，摇匀。

实验一蛋白质的两性反应及等电点的测定[2]一、实验目的2. 掌握测定蛋白质等电点的方法。

二、实验原理1. 蛋白质的两性反应蛋白质是一种复杂的高分子有机化合物，其分子中有许多含酸、含碱基的氨基酸残基。

因此，蛋白质具有两性反应。

当 pH 低于一个特定值时，氨基酸上的氨基质子化，成为带正电荷的离子型，蛋白质带正电；当 pH 高于另一个特定值时，氨基酸上的羧基失去质子，形成带负电荷的离子型，蛋白质带负电。

在这两个特定的 pH 值之间，蛋白质带有等量的正离子和负离子，呈等电点状态。

（1）等电聚焦法等电聚焦法是一种利用直流电场将蛋白质分离的方法。

在等电点时，蛋白质的总电荷为零，不受电场作用，停留在等电点位置，实现蛋白质的分离。

这种方法分辨率高、分离效率好，但设备复杂、操作难度大。

（2）等电点电泳法等电点电泳法是一种利用凝胶电泳原理测定蛋白质等电点的方法。

该方法在凝胶中涂上不同 pH 值的缓冲剂，形成不同 pH 值的电泳区，通过一定时间的电泳分离，观察蛋白质的运动位置，即可确定其等电点。

该方法比较简单、直观，分辨率较低。

三、实验步骤1. 预处理（1）将新鲜鸡蛋清取下，放在常温下静置 30 min，去除蛋清表面的泡沫和浮沫。

（2）采用冷环境离心机，将鸡蛋清离心 10 min，离心后取上清。

（1）将 1 mL 蛋清溶液分别加入 7 个不同 pH 值的缓冲溶液中，分别为 2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0。

（2）观察各实验管中的蛋清溶液的颜色变化。

（1）将 0.2 mL 蛋清溶液加入 4 mL 聚丙烯酰胺凝胶缓冲液中，混合均匀倒入凝胶板中。

（2）试管中加入 3 mL 结晶紫染色溶液（10^-3 M），将凝胶板浸泡在染色溶液中，染色 30 min 后，倒掉染色溶液，用蒸馏水清洗凝胶板几次，至染色液流出凝胶板没有颜色为止。

（3）取出凝胶板，用透明胶带覆盖红色刻度线，用间隔开的两条直线将凝胶板对折，压平，用剪刀从中央向两侧剪开，取下其中一块凝胶，放入测定盒中，插上电极进行电泳。