下载文档原格式
实验一MS培养基的配制一、实验目的：了解MS培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程和分装方法。
二、实验材料与仪器：电子天平、量筒、烧杯、玻璃棒、组培瓶、移液器、6种母液、白沙糖、琼脂、氢氧化钠、盐酸、酸度计或pH试纸。
三、实验方法与步骤1、母液配制（1）大量元素(母液Ⅰ) (2) 微量元素(母液Ⅱ) (3) 铁盐(母液Ⅲ) (4) 有机成分(母液Ⅳ) ⅣA 和ⅣB (5) 植物生长调节物质(6－BA，NAA)以上各种营养成分的用量，除了母液Ⅰ为20倍浓缩液外，其余的均为100倍浓缩液。
2、1 L固体MS培养基配制（1）用电子天平称出8 g琼脂粉和 30 g蔗糖放在烧杯中，加入少量的蒸馏水在微波炉中加热使之溶解。
（2）用量筒从各种母液中分别取出所需的用量：母液Ⅰ为50 ml，母液Ⅱ、Ⅲ、ⅣA和ⅣB 各10ml。
（3）最后用蒸馏水定容到1 L；用 2 mol/L NaOH 或 2 mol/LHCL 溶液调节培养基的 pH 值至 5.8～6.0。
（4）用量筒量取100ml液体培养基分装在组培瓶里，再用移液器取适量的6－BA和NAA放入组培瓶里。
（5）在 1.1kg/cm2 压力（约 121℃）高压灭菌锅中灭菌 15～20 min；灭菌后，放置于室温自然冷却凝固待用。
3、实验分组本实验分五组，每组负责配制一组培养基组合：（1）MS+0.1mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA（2）MS+0.5mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA（3）MS+1mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA（4）MS+2mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA（5）MS+3mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA4、其他需要灭菌的实验材料剪刀、镊子、蒸馏水、滤纸、培养皿、组培瓶。
四、分析1.MS母液分得更加细，一般实验室只分大量元素、微量元素、铁盐、有机成分四大类。
这里将大量元素中钙离子与硫酸根离子分开配，避免产生不溶物，将硼酸也单独列出来。
一、MS培养基母液的配制注意：1．除CaCl2·2H2O单独配制外，大量元素按照使用时高10倍的数值称取，将各种化合物称量后，分别用少量水在不同的容器内充分溶解，然后在500ml烧杯中按顺序加入各溶液，加适量蒸馏水，用玻璃棒搅拌促溶，倒入1000ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度，置小口瓶中保存，贴上标签注明化合物名称（或编号），浓缩倍数，配制日期和配制者姓名，CaCl2·2H2O配制同上置于另一小口瓶中。
2．微量元素母液的配制按要求浓缩100倍的数值称取，分别将各种化合物称量除铁盐（FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O）作为一组单独配制外，其余化合物可混合置于烧杯内加少量蒸馏水溶解后，定容在1000ml容量瓶中，置小口瓶中保存，贴上标签。
3．铁盐配制将FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O分别溶于450ml蒸馏水中，加热，（很重要）不断搅拌，溶解后，两液混合，调PH至5.5加水定容至1000ml，置于小口瓶中，贴上标签。
4．有机物母液配制，按母液要求浓缩50倍，除蔗糖按3%单独临时称量外，其余分别称量后，溶解，定容在500ml容量瓶中，置于小口瓶中保存，贴上标签。
5．母液最好在2~4℃的冰箱中贮存，特别是有机类物质，贮存时间不宜过长，无机盐母液最好在一个月内用完，如发现有霉菌和沉淀产生，就不能再使用。
A.制备母液和营养培养基时，所用蒸馏水或无离子水必须符合标准要求，化学药品必须是高纯度的（分析纯）。
B.称量药物采用高灵敏度的天平，每种药品专用一药匙。
二、培养基配制和灭菌一．养培养基配制程序(一).母液吸取量的计算配制培养基的升数母液吸取量= 母液体积（CC）×——————————母液浓缩倍数（二）各种母液按顺序编号排列A.大量元素；B.CaCl2.2H2O；C.微量元素；D.铁盐；E.有机物；F．生长素萘乙酸（NAA）：配制0.5mg/ml的NAA称取50mg ， NAA用少量95% 酒精溶解后加蒸馏水定容至1000ml；G..细胞分裂素、激动素（KT）配制0.5mg/ml的KT 称50mgKT 用少量1N HCL溶解后,加蒸馏水定容至100ml。
MS 培养基的配制1、配制几种母液（1）配制MS 大量元素母液一般将大量元素分别配制成100倍的母液，使用时再分别稀释100倍。
倍。
分别称取分别称取名称名称 重量重量 名称名称 重量重量 NH 4NO 3 165g 82.5 KH 2PO4 17g 8.5 KNO 3 190g 95 CaCl 2·2H 2O 44g 22 MgSO 4·7H 2O37g18.5各自配成1L 1L（（500ml 500ml）的母液。
各自倒入）的母液。
各自倒入1L 1L（（500ml 500ml）试剂瓶中，存放于冰箱中。
）试剂瓶中，存放于冰箱中。
）试剂瓶中，存放于冰箱中。
（2）配制MS 微量元素母液一般将微量元素配制成100倍母液。
倍母液。
依次称取（注：溶好一个后，再加下一个）依次称取（注：溶好一个后，再加下一个）名称名称 重量重量 名称名称 重量重量 KI 0.083g Na 2MoO 4·2H 2O 0.025gH 3BO 3 0.62g CuSO 4·5H 2O 0.0025g MnSO 4·H 2O 1.69g CoCl 2·6H 2O 0.0025g ZnSO 4·7H 2O0.86g配成配成1L 母液，倒入1L 试剂瓶中，存放于冰箱中。
试剂瓶中，存放于冰箱中。
注：注：CuSO CuSO 4·5H 2O 和CoCl 2·6H 2O O 由于称取量很小，如果天平精确度没有达到万分之一，由于称取量很小，如果天平精确度没有达到万分之一，可先配成调整液。
可先配成调整液。
分别称取CuSO 4·5H 2O 0.05g O 0.05g，，CoCl 2·6H2O ·6H2O 0.05g 0.05g各自配成100ml 的调整液，然后取5ml 就还有0.0025g 的量。
的量。
（3）配制MS 有机母液一般配制成100倍MS 有机母液。
一、MS培养基的配制1. 培养基母液的配制和保存MS培养基含有近30种营养成分，为了避免每次配制培养基都要对这几十种成分进行称量，可将培养基中的各种成分，按原量的10倍或100倍分别称量，配成浓缩液，这种浓缩液叫做培养基母液。
2. 按配方表配制MS培养基母液：大量元素50×，微量元素配100×，铁盐、有机成分配制成100×，母液贮存于4℃的冰箱中。
激素配成浓度为0.1mg/mL.3. 配制各种母液是，成分顺序加入，上一成分溶解后再加下一成分。
钙液和铁盐都单独配制。
生长素配制时，先用微量1MNaOH溶解，再以蒸馏水定容；细胞分裂素配制时，先用微量0.1MHCl溶解，再以蒸馏水定容。
二、MS母液配制取作表序号药品名称MS量(mg/L）扩大倍数母液量(g)定容取作量(mg/L)甲液NH4NO3KNO3MgSO4.7H20KH2PO41650190037017050×41.2547.59.254.25500ml 20钙液无水CaCl2440 100×11 500ml 20乙液MnSO4.4H2O或MnSO4. H2OZnSO4.7H2OH3BO3KI22.316.98.66.20.83100× 1.120.850.430.310.0415500ml 10铁盐Na2.EDTA.2H2OFeSO4.7H2037.227.8100× 1.861.39500ml 10有机成分盐酸吡哆醇(VB6)烟酸甘氨酸0.50.52100×0.0050.0050.02100ml 10丙液ⅠNa2MoO4.2H2O.2H2OCuSO4.5H2OCoCl2.6H2O0.250.0250.025100×0.01250.001250.00125500ml 10丙液Ⅱ肌醇100 100× 2 200ml 10丙液Ⅲ盐酸硫胺素(VB1) 0.4 50×0.02 100ml 2附注琼脂5.5-6.5g/L 蔗糖30g/LpH5.8-6.2备注：1钙液的母液量由于易沉淀所以取11g2丙液Ⅰ由于取的量太少所以先去12.5mg,溶于10mL水，再取1mL溶液稀释三、注意事项1、药品的质量问题：为了避免杂质及有害物质对组织培养的影响，必须注意药品质量，国内药品采用国际上通用标准，分为：一级，即保证试剂、优质纯试剂Guaranteed Reagent, GR级；二级，即分析纯试剂，Analytical Reagent, AR级；三级，即化学纯试剂，Chemical Pure, CP级；四级，即实验试剂，Laboratory Reagent, LR级。
一、MS培养基母液的配制注意：1．大量元素按照使用时高10倍的数值称取，分别将各种化合物称量后，除CaCl2·2H2O单独配制外，其余化合物混合在500ml烧杯中加适量蒸馏水溶解，用玻璃棒搅拌促溶，倒入1000ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度，置小口瓶中保存，贴上标签注明化合物名称〔或编号〕，浓缩倍数，配制日期和配制者姓名，CaCl2·2H2O配制同上置于另一小口瓶中。
2．微量元素母液的配制按要求浓缩100倍的数值称取，分别将各种化合物称量除铁盐〔FeSO4·7H2O和Na22O〕作为一组单独配制外，其余化合物可混合置于烧杯内加少量蒸馏水溶解后，定容在1000ml容量瓶中，置小口瓶中保存，贴上标签。
3．铁盐配制将FeSO4·7H2O和Na22O分别溶于450mlml，置于小口瓶中，贴上标签。
4．有机物母液配制，按母液要求浓缩50倍，除蔗糖按3%单独临时称量外，其余分别称量后，溶解，定容在500ml容量瓶中，置于小口瓶中保存，贴上标签。
5．母液最好在2~4℃的冰箱中贮存，特别是有机类物质，贮存时间不宜过长，无机盐母液最好在一个月内用完，如发现有霉菌和沉淀产生，就不能再使用。
1．制备母液和营养培养基时，所用蒸馏水或无离子水必须符合标准要求，化学药品必须是高纯度的〔分析纯〕。
2．称量药物采用高灵敏度的天平，每种药品专用一药匙。
．生长调节剂母液配制：为了操作方便，节约时间，生长调节剂也可如同配制母液一样，先配成原液，这样配制培养基时只要稍加计算，按需要量取即可。
不同药品在配制时假设不溶于水，可用少量不同的溶剂先溶解，萘乙酸〔NAA〕，吲哚乙酸〔IAA〕,赤霉素〔GA3〕，2，4-D等生长素和玉米素〔ZT〕可先用少量95%酒精溶解，然后加水，如溶解不完全再加热。
冲动素〔KT〕和6-苄基嘌呤〔BA〕可溶于少量1mol/L的盐酸中，叶酸需用少量稀氨水溶解。
称取50mg生长调节物质，溶解后，在100ml的容量瓶中定容，配制的母液每毫升那么含有生长调节物质，配制后一般要求在低温〔0~4℃〕保存，配制培养基时如每升〔1000ml〕需添加的生长调节剂物质为时，那么取1ml母液即可。
MS 培养基一、大量元素母液1：大量A母液2：大量B母液3：Fe盐注：配制顺序如下1。
称取3。
73 g Na2—EDTA•2H2O溶解于200 ml去离子水中,并置于70℃预热(A）；2. 称取2.78 g FeSO4•7H2O溶解于200 ml去离子水中（B）;3. 将B缓慢倒入A中混合，边倒边搅动,置于70 ℃水浴锅中螯合2 h；4. 冷却后定容至1 L。
二、微量元素母液4：微量三、有机物质母液5：有机（不含肌醇）℃注:配固体培养基可在调pH后加适量Agar或Phytagel；肌醇也可加入有机母液。
四、抗生素和激素母液试剂名称配制方法母液浓度Amp（氨苄青霉素) 双蒸水溶解，定容，过滤灭菌50 mg/ ml Km(卡那霉素）双蒸水溶解，定容，过滤灭菌50 mg/ ml Str（链霉素）双蒸水溶解,定容，过滤灭菌50 mg/ ml Cb（羧苄青霉素）双蒸水溶解，定容，过滤灭菌250 mg/ ml 6-BA (6-苄基嘌呤) 1M NaOH或盐酸溶解，双蒸水定容，高压灭菌 1 mg/ ml NAA（萘乙酸) 1M NaOH溶解，双蒸水定容，高压灭菌 1 mg/ ml IAA 95% 乙醇溶解,双蒸水定容，过滤灭菌 1 mg/ ml五、乙酰丁香酮(Acetone—syringone，AS）称取196。
2 mg AS用10 ml DMSO溶解，母液浓度100 mM，-20℃避光保存,工作浓度100 ～200 μM六、MS溶液的混合5种母液分别依次加入到800 ml蒸馏水中,混匀后加入肌醇、蔗糖和能高压灭菌的激素（6-BA和NAA）,定溶至1000 ml，用1M NaOH调pH至5.8。
最后加Phytagel （Sigma)4.4g或Agar 10g。
灭菌完后，在培养基凝固前加入AS或抗生素及不能高压灭菌的激素(IAA）.。
一、实验目的1. 掌握母液配制的基本原理和操作流程。
2. 熟悉MS培养基母液、微量元素母液等不同类型母液的配制方法。
3. 了解母液在植物组织培养中的重要作用。
4. 培养实验操作技能和严谨的科学态度。
二、实验原理母液是植物组织培养中常用的一种浓缩溶液，将培养基中的各种成分按照一定比例配制成高浓度的储备液。
在配制培养基时，只需按比例稀释母液即可，这样可以简化操作、减少误差，提高实验效率。
三、实验材料与仪器1. 材料：MS培养基各成分试剂、植物生长调节剂（如2，4-D、6-BA、IAA、NAA 等）、洗涤剂、蒸馏水等。
2. 仪器：电子天平、药匙、玻璃棒、称量纸、吸水纸、滴管、洗瓶、标签纸、烧杯、容量瓶、试剂瓶、量杯、量筒、移液管、移液枪、洗耳球、电炉、冰箱等。
四、实验步骤1. 大量元素母液的配制（1）按照MS培养基配方的需要量，将各种化合物称量扩大10倍。
（2）用电子天平称取，并分别用少量蒸馏水溶解，如溶解速度慢，可稍加热。
（3）完全溶解后，按表4-1顺序依次混合已溶解的化合物。
（4）将混合液转移至容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度线。
（5）将配制好的大量元素母液转移至棕色试剂瓶中，贴上标签，置于冰箱中保存。
2. 微量元素母液的配制（1）按照微量元素母液的配方，将各种化合物称量扩大10倍。
（2）用电子天平称取，并分别用少量蒸馏水溶解，如溶解速度慢，可稍加热。
（3）完全溶解后，将混合液转移至容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度线。
（4）将配制好的微量元素母液转移至棕色试剂瓶中，贴上标签，置于冰箱中保存。
3. 生长调节物质母液的配制（1）按照生长调节物质母液的配方，将各种化合物称量扩大10倍。
（2）用电子天平称取，并分别用少量蒸馏水溶解，如溶解速度慢，可稍加热。
（3）完全溶解后，将混合液转移至容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度线。
（4）将配制好的生长调节物质母液转移至棕色试剂瓶中，贴上标签，置于冰箱中保存。
五、实验结果与分析1. 本实验成功配制了MS培养基的大量元素母液、微量元素母液和生长调节物质母液。
