实验 MS培养基母液和常用试剂的配制学习资料

▪ 亦可配制成混合母液（不主张采用）。
母
规定 浓 称 母液 配1L
液
用量 缩 取 定容 MS培
种 类
成分
/mg• 倍 L-1 数
量 /mg
体积 养基 /ml 吸取
量/ml
甘氨酸
2.0
100
有 盐酸硫胺素 0.1
5
机
成 盐酸吡哆素 0.5 200 25 250 5
分
烟酸
0.5
25
肌醇
100
5000
5.3.4 铁盐母液的配制
▪ MS培养基中的9种大量元素除C、H、O外， 剩下的六种可由KNO3、NH4NO3、CaCl2 • 2H20、MgSO4 • 7H2O、KH2PO4几种无机 盐来供应，它们可配在同一母液中（具体 配制见下表）。配制的步骤为：确定母液 的浓度和体积→计算各种化合物用量→称 量→分别溶解→混合→定容→装瓶→贴标 签→放入冰箱保存。
3 主要实验用具和仪器
▪ 冰箱、普通天平、分析天平、各种型号的 试剂瓶（棕色和白色）、移液管、量筒、 烧杯、容量瓶、搪瓷杯、药勺、称量纸、 玻棒、标签纸、pH试纸（pH5.4~7.0）， 电磁炉等。
4 药品和试剂
▪ 硝酸铵、硝酸钾、氯化钙、硫酸镁、磷酸 二氢钾、碘化钾、硫酸锰、硫酸锌、钼酸 钠、硫酸铜、氯化钴、乙二胺四乙酸二钠、 硫酸亚铁、甘氨酸、盐酸硫胺素、盐酸吡 哆素、烟酸、肌醇、2,4-D(2,4-二氯苯氧乙 酸)、NAA（α-萘乙酸）、 6-BA （ 6-苄 基腺嘌呤）、 KT、浓盐酸、氢氧化钠、浓 硫酸、重铬酸钾、95%酒精、蒸馏水等。
▪ 通常把每种试剂单独溶解后再与别的也已 完全溶解的药品混合，或者待前一种化合 物完全溶解后再加入后一种化合物。混合 已溶解的各种矿质盐时还应注意先后顺序， 力求把Ca2+与SO42- 和PO43-错开，以免形 成硫酸钙或磷酸钙的不溶物。同时，要慢 慢地混合，边混合边搅拌。
5.3.1 大量元素母液的配制
▪ 通过本次实验，使学生能熟练准确配制MS 培养基母液和组培室常用的化学试剂，巩 固相关理论基础知识。
2 实验原理
▪ 培养基是植物离体培养组织和细胞赖以生 存的营养基质。配制培养基时，为了减少 试剂称取时的工作量和少量称取时出现的 误差，以及避免多种营养成分混合导致沉 淀产生或相互反应而失去培养效果，预先 要将各种营养成分配制为一定倍数的培养 基母液，待使用时稀释到要求的浓度。母 液的浓度为培养基浓度的10倍、20倍、50 倍、100倍等或更高。
▪ 如果没有培养基干粉，则可采用以下两种 方法来配制：
▪ 一个是按照配方规定的数量分别称量出各 种成分，分别使它们溶解于水，然后再将 它们混合在一起。
▪ 另一个是先配制一系列的浓缩贮备液（母 液），贮存在2～4℃冰箱内，待配培养基 时取出，按比例稀释配用。此法较为常用。
5.3 MS 培养基母液的配制
▪ 注意： CaCl2 • 2H2O最后加入
母
规定 浓
母液
液
成分
用量 缩 称取量 定容
种
/mg• 倍 /mg 体积
类
L-1 数
/ml
KNO3
1900
38000
大
量
NH4NO3 1650 20 33000 1000
元 素
CaCl2 • 2H20
440
MgSO4 • 7H2O 370
8800 7400
KH2PO4
170
3400
配1L MS培 养基 吸取 取量 /ml
50
5.3.2 微量元素母液的配制
▪ MS培养基中的微量元素可由MnSO4 • 4H2O、ZnSO4 • 7H2O、H3BO3、KI、 Na2MoO4 • 2H2O、CuSO4 • 5H2O、CoCl2 • 6H2O几种无机盐来供应，它们也可配在 同一母液中（具体配制见下表）。配制步 骤同大量元素（混合时不要求先后顺序）。
5 MS培养基母液和 常用试剂的配制流程
▪ 5.1培养基的成分
▪ 目前，不论液体培养还是固体培养，大多 数植物组织培养中所用的培养基都是由无 机营养物、碳源、维生素、生长调节物质 和有机附加物等几大类物质组成。
5.2 培养基的配制方法
▪ 配制培养基的最简单的方法是用市售培养 基干粉溶解在蒸馏水里，加上蔗糖、琼脂 和其他必要的补加物，再加入蒸馏水使之 达到最终的容积。最后调节pH值，高压灭 菌，于是制成所需要的培养基。
50
CuSO4 • 5H2O 0.025
5
CoCl2 • 6H2O 0.025
5
5.3.3 有机成分母液的配制
▪ MS培养基中所需的维生素和氨基酸等有机 成分母液应分别单独配制（具体配制见下 表）。配制的步骤为：确定母液的浓度和 体积→计算各种化合物用量→称量→溶解 →定容→装瓶→贴标签→放入冰箱保存。
母 液
种
成分
类
规定 用量
/mg• L-1
浓 称取 母液 配1L
缩 量/mg 定容 培养
倍
体积 基吸
数
/ml 取量 /ml
MnSO4 • H2O 16.9
3380
ZnSO4 • 7H2O
微 量
H3BO3
元
KI
8.6
1720
6.2
1240
0.83 200 166 1000 5
wk.baidu.com
素 Na2MoO4 • 2H2O 0.25
实验1 胡萝卜愈伤组织的诱导培养
▪ 实验内容：
▪ 1-1 MS培养基母液和常用试剂的配制 ▪ 1-2 胡萝卜愈伤组织诱导培养基的配制 ▪ 1-3 胡萝卜愈伤组织的诱导 ▪ 1-4 胡萝卜愈伤组织继代培养基的配制 ▪ 1-5 胡萝卜愈伤组织的继代培养
实验1-1 MS培养基母液 和常用试剂的配制
▪ 1 实验目的
▪ 铁盐母液宜单独配制，其配制步骤为：
▪ 确定母液的浓度和体积→计算各种化合物 用量→称量→分别溶解→混合→煮沸数分 钟→调节pH值至5.8 →定容→装瓶（棕色） →贴标签→放入冰箱保存。
▪ 用时每配l L培养基取该溶液5ml。
母
液
成分
▪ 母液的配制有两种方法：
▪ 一种是配制成单一化合物母液。此法适合 配制多种培养基都需要的同一种母液。
▪ 另一种是配成几种不同化合物的混合母液。 此法在大量配制同种培养基时省时省力。 由于MS 培养基较为常用，故配制MS 培养 基母液。
▪ 配好的母液应放在试剂瓶中贮存。
▪ 在配制MS培养基母液时，为减少工作量可 以把几种药品（如培养基中的大量元素或 微量元素）配在同一母液中，但应注意各 种化合物的组合以及加入的先后顺序，以 免发生沉淀。