液相色谱分析仪法ppt课件

feature and instrument of HPLC
2020/3/30
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一、液相色谱仪器
high performance liquid chromatograph
• 目前常见的HPLC仪生产厂家 国外有Waters公司、Agilent公司 （原HP公司）、岛津公司等， 国内有大连依利特公司、上海分 析仪器厂、北京分析仪器厂等。
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㈡.色谱法分类
• 按两相的物理状态可分为： • 气相色谱法(GC): 适用于分离挥发性化合物。有
机物质中分子量小于400的采用气相色谱法分析， 此范围的物质约占有机物质总数15%~20%.
• 液相色谱法(LC): 适用于分离低挥发性或非挥发 性、热稳定性差的物质。
• 分子量为400~2000的有机物质可采用液相色谱法 分析，而分子量大于2000的则须用凝胶色谱法。
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液-液分配色谱固定相的液体往往容易溶解到流动 相中去，所以重现性很差，后来在此基础上发展 了一种新型固定相---化学键合固定相 。
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液相色谱仪（1）
high performance liquid chromatograph
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液相色谱仪（2）
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液相色谱仪（3）
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液相色谱仪（4）
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二.概论：
㈠定义：
• 以液体为流动相的色谱法称为液相色法。 用常压输送流动相的方法为经典液相色谱 法，这种色谱法的柱效能低、分离周长。 高效液相色谱法（high performance liquid chromatography，简称HPLC）是在经典 液相色谱的基础上发展起来的一种色谱方 法。与经典的液相色谱法相比，高效液相 色谱法具有下列主要优点：
流动相的极性小于固定液的极性（正相 normal phase），反之，流动相的极性大于固 定液的极性（反相 reverse phase）。正相与反 相的出峰顺序相反。
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正相色谱法：由极性固定相(如氨基与腈基键合相)和非极性
（或弱极性）流动相 (烷烃类如正已烷、环已烷）所组成 的HPLC体系。其代表性的固定相是改性硅胶、氰基柱、 氨基柱等，代表性的流动相是正己烷。用于分离中等极性 和极性较强的化合物（如酚类、胺类、羰基类及氨基酸类 等）。吸附色谱也属于正相色谱
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1. 应用了颗粒极细（一般为10μm以下） 规则均匀的固定相，柱效高，分离效 率高；
2. 采用高压输液泵输送流动相，流速快， 一般试样的分析需数分钟，复杂试样 分析在数十分钟内即可完成；
3. 广泛使用了高灵敏检测器，大大提高 了灵敏度。目前，已发展了多种固定 相，有多种不同的分离模式，使高效 液相色谱法的应用范围不断扩大。
5～10μm的硅胶吸附剂； • 流动相：主要是非极性的烃类（如己烷、庚烷）并加入少
量极性溶剂作缓和剂（如水、甲醇）。 • 基本原理：组分在固定相吸附剂表面对不同物质吸附能力
不同使混合物分离的；吸附力越强,保留时间越长,反之,保 留时间短,。 • 适用于分离分子质量中等 （200~1000 ）的油溶性试样或 极性较小的植物色素等组分，大多数用于非离子型化合 物，。常用于分离同分异构体不适宜于分离强极性的离子 型化和物和同系物。 • 缺点：非线形等温吸附常引起峰的拖尾（离子型化合物易 产生拖尾）；
反相色谱法；由非极性固定相和极性流动相所组成的HPLC
体系，与正相HPLC体系正好相反。其代表性的固定相是 十八烷基键合硅胶(ODS柱、 C18、C8 ），代表性的流动 相是甲醇-水和乙腈-水或水的缓冲液。是当今液相色谱的 最主要分离模式。 适用于分离非极性和极性较弱的化合物。为控制样品在分 析过程的解离，常用缓冲液控制流动相的pH值。但需要注 意的是，C18和C8使用的pH值通常为2.5~7.5（2~8），太 高的pH值会使硅胶溶解，太低的pH值会使键合的烷基脱 落。
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2. 液-液分配色谱 （liquid- liqHale Waihona Puke Baiduid partition chromatography）
固定相与流动相均为液体，流动相与固定相之间应互不相溶（极性不 同，避免固定液流失），有一个明显的分界面。当试样进入色谱柱， 溶质在两相间进行分配。达到平衡时，服从于下式：
Cs • K= Cm
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按固定相性质及外形分类
• 柱色谱: 固定相装在柱管内的色谱分析法
• 纸色谱: 固定相为滤纸的色谱分析法
• 薄层色谱: 固定相压成或涂成薄膜的色谱 分析法
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（三）HPLC的主要分离类型和原理：
高效液相色谱法按分离机理的不同主要分为四类： 1. 液-固吸附色谱（liquid-solid adsorption chromatography） • 固定相：固体吸附剂。如硅胶、氧化铝等，较常使用的是
• 式中，Cs—溶质在固定相中浓度；Cm--溶质在流动相中的浓度； 分 离的顺序取决于K值，在同一色谱条件下，样品中K值大的组分保留 值大；后流出色谱柱；K值小的组分则滞留时间短，先流出色谱柱。 混合物中各组分的分配系数相差越大，越容易分离，因此混合物中 各组分的分配系数不同是色谱分离的前提。
• 在HPLC中，固定相确定后，K主要受流动相的性质影响。实践中主 要靠调整流动相的组成配比及pH值，以获得组分间的分配系数差异 及适宜的保留时间，达到分离的目的。
高效液相色谱分析法
high performance liquid chromatograph
主讲:王庆俐
一、高效液相色谱仪
HPLC 二、高效液相色谱法的特点
feature of HPLC 三、流程及主要部件
general process and main assembly of HPLC 四。固定相和流动相
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基本原理：组分在固定相和流动相上的分配；是 根据被分离的组分在流动相和固定相中溶解度 不同而分离。分离过程是一个分配平衡过程。
固定相：将特定的液态物质涂于担体表面，或化 学键合于担体表面而形成的
液液色谱法按固定相和流动相的极性不同可分 为正相色谱法(NPC)和反相色谱法(RPC);