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生物化学实验课件课件

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生物化学检验ppt课件

生物化学检验ppt课件
酶类CK-MB,α-AMY等。
底物/代谢产物类：包括TG，TC，HDL-C，LDL-C，UA， UREA，Cr，Glu，TP，Alb，T-Bil，D-Bil，NH4+,CO2 等。
无机离子类：包括Ca，P，Mg，Cl 等。
认识到了贫困户贫困的根本原因，才 能开始 对症下 药，然 后药到 病除。 近年来 国家对 扶贫工 作高度 重视， 已经展 开了“ 精准扶 贫”项 目
吸收曲线
波长从200nm-400nm 的电磁波，称为紫外光，波长从400nm-760nm 的电磁波，称为可见光。以波长(λ)为横坐标，以吸光度为纵坐标而绘 制出的一条曲线称为吸收曲线，在一段波长范围内，有最大吸收波长 λmax 和最小吸收波长λmin，在最大吸收波长处测定可获得最大的测 定灵敏度。
认识到了贫困户贫困的根本原因，才 能开始 对症下 药，然 后药到 病除。 近年来 国家对 扶贫工 作高度 重视， 已经展 开了“ 精准扶 贫”项 目
二、连续监测法
连续监测法属于动态法检测的一种，适用于酶活性测 定和代谢物检测，多有酶的参与。该法是通过适当的 仪器，连续测定酶促反应过程中某一反应产物或底物 的浓度随时间变化的情况。原理是：在酶反应的最适 条件下，用物理、化学或酶促反应的分析方法，在反 应速度恒定期（零级反应期）来连续观察和记录一定 时间内底物或产物量的变化，以单位时间酶反应初速 度计算出酶活力大小代谢物的浓度。计算方法有：1） 绝对法：酶活力（U/L）=△A×（反应液体积/样品体 积）×（1000/消光系数）；2）相对法：酶活力 （U/L）=〔 △A （测定）/ △A （标准） 〕标准物的 活力或浓度。
两点终点法
两点终点法也称因定时间法，它可以用一种试剂或两 种试剂。这种方法是近年来，可加双试剂的生化分析 仪问世后，才被广泛应用。优点是可以消除样品、试 剂的颜色、浊度，以及一些干扰物对测定的干扰。原 理是：加入样品→试剂1 →读取A1 →试剂2 →读取 A2，其中要读取两次吸光度值，第一次相当于读出样 品空白的值，加入试剂2至第二次读数才是实际呈色 反应，因此A=A1-A2。比浊法也是一种终点法，不过 是一种浊度测定，而不是比色测定。比浊法可分为化 学比浊法与免疫比浊法，免疫比浊法又分为透射比浊 法和散射比浊法。免疫比浊法目前主要用于血清特种 蛋白的测定，如载脂蛋白(apoAI,apoB 等)、补体类(C3、

生物化学实验五《聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳分离血清蛋白》课件

生物化学实验五《聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳分离血清蛋白》课件
优点：
➢ 分辨率高 ➢ 用于复杂和特殊样品的分离
6
不连续电泳的四种不连续体系
➢凝胶的不连续 ➢缓冲液成份的不连续 ➢缓冲液pH值的不连续 ➢电压梯度的不连续
不连续电泳的三种物理效应
➢ 样品的浓缩效应 ➢ 凝胶的分子筛效应 ➢ 电荷效应
电泳的过程三种效应同时存在，对蛋白样品起协同作用，使样品各组 分按照带电量、分子质量及形状按一定的顺序分离。
7
三、实验步骤
封槽
清洁、干燥的小玻管一端，用Parafilm贴封后垂直放在管架上
8
制胶和灌胶
分离胶：A:C:D:E＝1:2:3:2（V/V） 浓缩胶：B:C:D:E＝2:1:5:2（V/V）
➢ A: pH8.9 Tris/Hcl缓冲液
➢ B: pH6.7 Tris/Hcl缓冲液
➢ C: 30% Acr-Bis贮存液
电泳
➢ 连接电极，上负下正； ➢ 浓缩胶：3mA／管，分离胶：4mA／管； ➢ 待示踪染料接近凝胶管底部约0.5cm处，切断电源。
剥胶
取下凝胶管，用注射器吸取一定量的蒸馏水，将针头插入胶柱-与管内壁之间 ，边注水边旋转玻管，直至胶柱与管壁分离，然后用洗耳球轻轻在玻管的一 端加压，使凝胶柱从玻管缓慢滑出，将凝胶柱置于干净的试管内，用蒸馏水 冲洗几次。
实验五 聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳分离血清蛋白 动物医学院动物生化教研室
1
一、实验目的
① 掌握聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳的原理； ② 学习聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳的操作技术； ③ 了解血清蛋白的主要成份。
2
二、实验原理
➢ 不连续系统聚丙烯酰胺凝胶电泳中，蛋白样品通过浓缩胶的浓 缩按分子大小排列成层，然后进入分离胶，随着电泳的不断进行 ，不同大小、电荷的蛋白质分子逐渐被分开。

生物化学实验ppt-new全

生物化学实验ppt-new全
淀粉遇碘呈蓝色，是由于碘被吸附在淀粉上，形成一复合物， 此复合物不稳定，极易被醇、氢氧化钠和加热等使颜色褪去，其 他多糖大多能与碘呈特异的颜色，此类呈色物质也不稳定。
淀粉在酸催化下加热，逐渐水解成分子较小的糖，最后水解 成葡萄糖，其过程如下：淀粉--各种糊精—麦芽糖—葡萄糖。淀 粉完全水解后，失去与碘的作用，同时出现单糖的还原性。
五、操作
1、RNA的提取 称取5g干酵母粉于100ml烧杯中，加入0.2%NaOH溶
液30ml，沸水浴加热30min，经常搅拌。冷却，加入乙酸 数滴，使提取液呈酸性（PH5-6，用试纸试之），离心1015min（1000r/min）,取上清液，加入两倍体积的95%乙醇， 边加边搅拌。加毕，静置，待完全沉淀，离心5min （1000r/min），取沉淀物，沉淀物即为粗RNA，可作鉴 定和测定含量用。 2、鉴定
试剂
管号 0 1
2
4
6
2mg/ml卵清蛋白质/ml
0.0 0.3 0.6 1.2
1.8
蒸馏水/ml
3.0 2.7 2.4 1.8
1.2
双缩脲试剂/ml
2.0 2.0 2.0 2.0
2.0
充分混合，在540nm比色
蛋白质浓度/(mg/ml)
0.0 0.2 0.4 0.8
1.2
A540nm
需于显色后30min比色测定，30min后可能有雾状沉淀产生。各管由显色到比色的时间应尽 可能一致。
一、目的 掌握稀碱法提取酵母RNA的原理和方法。
二、原理 酵母核酸中RNA含量较多，DNA则少于2%。
RNA可溶于碱性溶液，当碱被中和后，可加乙醇使 其沉淀，由此即可得到粗RNA制品。
用碱液提取的RNA有不同程度的降解。

生物化学实验课件

生物化学实验课件

通过转氨基作用形成的氨基酸可通过展层层析检测。氨基酸的纸层析属 于分配层析，滤纸为支持介质，滤纸上所吸附的水为固定相，有机溶剂
为流动相。把混合氨基酸样品点于滤纸上，使流动相经样品点移动，混 合氨基酸在两相溶剂间进行分配，在固定相中分配比例较大的氨基酸， 随流动相移动的速度慢；在流动相中分配比例较大的氨基酸，随流动相 移动的速度快。由于各种氨基酸的分配系数不同，在一定时间内，逐渐 集中于滤纸上不同的部位，而彼此分离。层析完毕后显色，使氨基酸显 色形成斑点。
18
3.仪器、试剂和材料 4. 操作步骤
具体参见实验指导书
19
5. 结果处理
根据所测样品提取液吸光值，在标准曲线上查得 相应的蛋白质含量（μg），按下式计算：
样品蛋白 (g质 /鲜 g含 )重 查 样 量得 品(的 鲜 g)测 蛋 重( 定 白 g )提 时 质取 取 含液 用 量((m 总 提 m )ll体 取 ) 积 液
6. 注意事项
比色应在出现蓝色后2min~1h内完成。
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7. 思考题
1）考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质含量的 原理是什么？
2）如何正确使用分光光度计？
3）测定蛋白质含量还有哪些方法，测定原理 有哪些不同？
21
酶的基本性质
1.目的 酶是生物催化剂，是具有催化功能的蛋白质，
生物体内的化学反应基本上都是在酶催化下 进行的。通过本实验了解酶催化的高效性、 特异性以及pH、温度、抑制剂和激活剂对 酶力的影响，对于进一步掌握代谢反应及其 调控机理具有十分重要的意义。
5
2.1氨基酸的两性解离和等电点
2.1.1 氨基酸的两性解离
H 3 N + C RC HO K 1H O ' 3 N + C R H C H-O K 2H ' 2 O N C RC H-O

生物化学实验设计PPT课件(初中科学)

生物化学实验设计PPT课件(初中科学)

。
实战演练：
（09杭州）某同学将生长状况类似的A、B二盆蚕豆幼苗分别置于
两个暗箱中，在B盆蚕豆幼苗的暗箱右侧开一小窗口，并在窗口外
侧装一个固定光源，保持其它环境条件适宜并相同。一星期后，
A,B两盆蚕豆幼苗的生长状况如图所示。请回答下列问题：
(1)该同学设计这一实验的目的是为了探究
单侧光对蚕豆幼苗生长的影响
（3）每组为什么要选用较多数量的胚 减少由于种子死亡 ？
或遗传差异带来的误差
实战演练：
(4）小芳同学认为叶绿素的合成除了需要镁等矿物质 元素外，还需要其他的一些环境条件。她设计了如下 表的方案。
分析小芳同学的实验设计，你认为她要研究的问题
是 叶绿素的合成是否需要光
。
根据实验设计方案提出研究问题的技能是:
。
化学实验设计和评价
❖ 化学实验设计题和实验评价题是对学生进行实验综合能力考 查的题型之一，是当前课程改革和中考所关注的热点。其命 题方式通常有：①设计反应原理 ②设计实验装置 ③设计操 作程序 ④侧重于某一要求的综合设计并含定量设计要求⑥以 批评的思想方法对所提供的实验方案进行评价。
❖ 解答实验设计题时，必须遵循“四性”：科学性、可行性、 规律性、创新性。即原理正确、操作简便、现象明显、药品 经济、结论可信、有创新意识。解答实验评价题时，要环绕 题目提供的多种方案，从原理是否科学合理、操作是否简单 可行、所用试剂是否经济、实验现象是否明显、是否体现 “绿色化学”等方面进行评价。
不同浓度的重金属污染液中的种子萌发率都比
蒸馏水中的低，幼苗根长也较短。随着重金属浓度 的升高，种子萌发率降低，幼苗根长也缩短。
活动二：
设计一份实验记录单
培养皿
污染液 浓度 萌发率

大学课程生物化学实验SOD3课件

大学课程生物化学实验SOD3课件
琼脂糖凝胶（Sepharose；Bio-Gel) 依靠糖链之间的次级键维持网状结构，琼脂糖密度越 大，网状结构越密集。
聚丙烯酰胺 一种人工合成的凝胶，以丙烯酰胺为单位，由甲叉双 丙烯酰胺交联而成。交联剂越多，孔隙度越小。商品 名为生物胶—P （Bio-Gel P)。
聚丙乙烯凝胶（Styrogel) 大网孔结构。
结构。 ❖ 被分离的混合物流过层析柱
时:
大分子先下来 小分子后下来
分子筛层析原理示意图
分
凝胶颗粒
子
筛
凝胶柱
层
析
与
洗
脱
曲
线
蛋白质混合物 从柱上面加缓冲溶液
大分子
小分子
收
集
蛋
白
质
大分子
小分子
管
V0
Ve1
Ve2
洗脱体积（Ve）
Andrews的经验公式：logMr=K1-K2(Ve/Vo)
logMr
Kav
通无常细使胞用提高取分液辨率柱层析及电泳方法。
粗
另外，结晶也是蛋白质分离纯化的方
分 离
法结选之构择一分性，析制之沉备用淀的。法结晶物常常作为蛋白质
电泳
离子交 换层析
凝胶 亲和 疏水 过滤 层析 层析
吸附 层析
细
分
离
精制后的蛋白质
凝胶过滤柱层析
（分子筛层析）
❖ 凝胶作为支持剂 ❖ 凝胶颗粒内部具有多孔网状
中粗 超细
中粗 超细
干胶颗粒 直径/μm
40-120
40-120 100300
50-150 20-80 10-40
100-300 50-150 20-80 10-40
40-120 10-40

生物化学实验课件[1]

生物化学实验课件[1]

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生物化学实验课件[1]
2.实验原理
o 过氧化氢酶广泛分布于生物体内，能将代谢中产生的 有 剂害铁的粉高H21O02分个解数成量H级2。O和O2，其催化效率比无机催化
o 酶的另一特点是具有高度的特异（专一）性，淀粉酶 和蔗糖酶虽然都催化糖苷键的水解，但是淀粉酶只对 淀粉起作用，蔗糖酶只水解蔗糖。
考马斯亮蓝G-250（Coomassie brilliant blue G250）染料，在游离状态下溶液呈棕红色，当它 与蛋白质结合后变为蓝色。蛋白质含量在 0~1000μg 范 围 内 ， 蛋 白 质 - 色 素 结 合 物 在 595nm下的吸光度与蛋白质含量成正比，故可用 比 色 法 进 行 定 量 分 析 。 考 马 斯 亮 蓝 G-250 法 （Bradford法）是比色法与色素法相结合的复合 方法，简便快捷，灵敏度高，稳定性好，是一种 较好的蛋白质常用分析方法。
在蛋白质溶液中存在着下列平衡：
阴离子
两性离子
pH＞pI
pH = pI
电场中： 移向阳极
不移动
阳离子 pH＜pI
移向阴极
调节溶液的pH使蛋白质分子的酸性解离与碱性解离相等，即所带正负电荷相等， 净电荷为零，此时溶液的pH值称为蛋白质的等电点(pI)。
在等电点时，蛋白质溶解度最小，溶液的混浊度最大。配制不同pH的缓冲液， 观察蛋白质在这些缓冲液中的溶解情况即可大致确定蛋白质的等电点。在pH 梯度电泳中，蛋白质泳动到其相应的等电点时则停止泳动，据此可分离等电 点不同的蛋白质。
2.实验原理
o 淀粉酶广泛存在于植物中，特别是萌发的禾谷类种子淀粉酶活 力最强，其中主要是α-淀粉酶和β-淀粉酶。α-淀粉酶随机地作 用于淀粉中的α-1,4-糖苷键，生成葡萄糖、麦芽糖、糊精等； β-淀粉酶从淀粉的非还原性末端进行水解，生成麦芽糖、极限 糊精等。

生物化学实验课件

生物化学实验课件
• 操作：
• 用醋酸和醋酸钠配制成各种不同pH值的缓冲液。向 诸缓冲液中加入酪蛋白后，沉淀出现最多的缓冲液 的pH值即为酪蛋白的等电点。
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12
二、蛋白质的沉淀反应
• 原理：
• 蛋白质是一类高分子化合物，分子大小已达胶体颗粒范 围（1~100毫微米）,因此蛋白质在水溶液中具有胶体 的性质。维持蛋白质胶体稳定的因素有两个：一是胶体 颗粒所带的电荷，一是与介质水形成的水化膜。这种稳 定性是有条件的、相对的，在一定物理化学因素影响下， 蛋白质颗粒失去电荷、脱水，甚至变性而丧失稳定因素， 从溶液中析出，这种作用称为蛋白质的沉淀反应。
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18
实验内容
• （一） 血清γ—球蛋白的分离纯化
• 1．硫酸铵盐析 ：注意应缓慢滴入饱和硫酸铵溶液 并边加边摇，避免局部浓度过高。
• 2．透析脱盐：用纳氏试剂检查水中NH4+，直至硫酸 铵全部透析完毕。
• 3．DEAE—纤维素柱层析：装柱、平衡柱床、上样、 洗脱收集。
• 4．检查洗脱液中蛋白质：磺基水杨酸检查，出现白
• 本法多用于测定糖原含量，也可用于测定葡萄糖含 量。
PPT学习交流
4
实验内容与结果
• 1、制作葡萄糖标准曲线 • 2、测定样品含糖量 • 计算100克小麦面粉中总糖含量
PPT学习交流
5
实验二
氨基酸的分离鉴定——纸层析法
实验要求
• 学习分配层析法的原理 • 掌握氨基酸纸上层析的操作技术（包括点样、平衡、
生物化学实验
任课教师：李遂焰
实验一
总糖的测定——蒽酮比色法
实验要求
• 掌握蒽酮比色定糖法的原理和方法 • 掌握72型分光光度计的原理和操作方法 • 学习通过制作标准曲线测定未知物含量的方法

《生物化学实验教案》课件

《生物化学实验教案》课件

《生物化学实验教案》PPT课件第一章：生物化学实验基本原理与技能1.1 生物化学实验的目的与意义解释生物化学实验在生物学和医学研究中的重要性强调实验对于理论知识的巩固和应用的作用1.2 生物化学实验的基本原则介绍实验设计的科学性和合理性强调实验操作的准确性和可重复性1.3 生物化学实验的基本技能介绍实验室安全操作规程演示实验室常用仪器的使用方法第二章：生物化学实验数据处理与分析2.1 实验数据的记录与处理讲解实验数据的记录方法和注意事项介绍数据处理的基本原则和方法2.2 实验数据的分析与解读讲解实验结果的统计分析方法强调数据分析在实验结果解释中的重要性第三章：生物化学实验操作技巧与实例3.1 生物化学实验操作技巧讲解实验操作中的注意事项和技巧强调实验操作的精确性和规范性3.2 生物化学实验实例解析介绍经典生物化学实验案例分析实验操作步骤和结果的关联性第四章：生物化学实验常用仪器与设备4.1 生物化学实验常用仪器介绍实验室常用仪器的作用和操作方法强调仪器使用中的注意事项和维护保养4.2 生物化学实验常用设备讲解实验室常用设备的结构与功能强调设备操作的安全性和正确性第五章：生物化学实验安全与环保5.1 生物化学实验安全知识讲解实验室安全的基本原则和措施强调实验操作中的安全意识和风险控制5.2 生物化学实验环保知识介绍实验室废物的分类和处理方法强调实验室环保的重要性和责任意识第六章：蛋白质实验6.1 蛋白质的提取与分离介绍蛋白质提取和分离的基本原理演示蛋白质提取和分离的实验步骤6.2 蛋白质的纯化与鉴定讲解蛋白质纯化方法和技术介绍蛋白质鉴定的方法和原理第七章：酶实验7.1 酶的提取与纯化讲解酶提取和纯化的方法和原理强调酶活性检测的重要性7.2 酶活性的测定与分析介绍酶活性测定的方法和原理讲解酶活性数据分析的方法和技巧第八章：碳水化合物实验8.1 碳水化合物的提取与分析介绍碳水化合物提取和分析的方法强调碳水化合物在生物体中的重要性8.2 碳水化合物的代谢实验讲解碳水化合物代谢的实验方法和原理介绍碳水化合物代谢产物的检测方法第九章：脂质实验9.1 脂质的提取与分析讲解脂质提取和分析的方法强调脂质在生物体中的功能和作用9.2 脂质代谢实验介绍脂质代谢的实验方法和原理讲解脂质代谢产物的检测方法第十章：核酸实验10.1 核酸的提取与纯化介绍核酸提取和纯化的方法和原理强调核酸在生物体中的重要性10.2 核酸的检测与分析讲解核酸检测和分析的方法和原理介绍核酸序列测定和分析的方法重点和难点解析1. 生物化学实验基本原理与技能：理解实验设计的原则和实验操作的准确性是进行生物化学实验的基础。

生物化学实验课件-影响酶活力的因素-温度和pH

生物化学实验课件-影响酶活力的因素-温度和pH

注意事项
注意事项
1.反应试管应清洗干净，不同试剂、酶液以及移液管不能交叉使用。 2.使用混合唾液或者通过预试选出合适的唾液稀释度，效果更为显著。 3.使用完毕的生物试剂（如：人唾液）的无公害处理。
生物化学实验
THANKS
实验步骤 3.pH对酶活力影响
取干净试管5只，按下表加入试剂并操作。
试剂/管号
1
2
3
4
5
0.2mol/lNa2HPO4/ml
0.16
0.56
1.47
2.43
2.84
0.2mol/lNaH2PO4/ml
2.84
2.44
1.53
0.57
0.16
pH
5.6
6.2
6.8
7.4
8
1%淀粉溶液/ml
1
1
1
1
1
唾液淀粉酶可将淀粉逐步水解成各种不同大小分子的糊精及麦芽糖。它们 遇碘呈不同的颜色。直链淀粉(即可溶性淀粉)遇碘呈蓝色；糊精按分子从 大到小的顺序，遇碘可呈蓝色、紫色、暗褐色和红色，最小的糊精和麦芽 糖遇碘不呈现颜色。因此可由酶反应混合物遇碘所呈现的颜色来判断。
实验步骤
1.酶的专一性
取干净试管4只，按下表加入试剂并操作。
生物化学实验
影响酶活力的因素-温度、pH
目录 / CONTENTS
CHAPTER 01 CHAPTER 02 CHAPTER 03 CHAPTER 04 CHAPTER 05
实验目的 实验原理 实验试剂 实验步骤 注意事项
实验目的
实验目的
1.掌握温度、pH对酶活力的影响。 2.理解温度、pH影响酶活力的机制。 3.了解测定酶的最适温度、最适pH的方法。

动物医学-动物生物化学实验《动物DNA提取》课件

动物医学-动物生物化学实验《动物DNA提取》课件
4
氯仿 ➢ 强蛋白质变性剂，使液相与有机相分开 ➢ 抑制DNA酶的活性
异戊醇 ➢ 消除抽提过程中出现的泡沫
95%乙醇 ➢ 沉淀DNA
5
三、实验步骤
取材
取出冻肝,待溶化后,称取3g,剪成碎块.
匀浆
➢ 加入5 mL 0.14mol/LNaCl-0.15mol/LEDTA-Na溶液充分匀 浆;
3
主要试剂及其作用
EDTA ➢ 螯合Mg2＋、Ca2＋等金属离子 ➢ DNase作用时需要一定的金属离子作辅基 ➢ 抑制脱氧核糖核酸酶对DNA的降解作用
SDS ➢ 抑制核糖核酸酶的作用 ➢ 溶解细胞膜上的脂质与蛋白，溶解膜蛋白而破坏细胞膜 ➢ 与蛋白质结合成为R-O-SO3-…R＋-蛋白质的复合物，使蛋白 质变性而沉淀下来
➢ 再快速加入1mL 25% SDS,轻轻混匀10min； ➢ 加入3mL 5mol/L NaCl溶液(终浓度为1.07mol/L),继续轻轻混匀10min; ➢ 加入(14mL)一倍体积的氯仿-异戊醇混合液.于带磨口塞的锥形瓶中震摆
10min; ➢ 分别引流入三支小试管，3000rpm离心20min,分为三层:
8
上层-----水相 中间层---蛋白质 下层-----有机相
➢ 小心用皮头滴管吸取上层水相于小烧杯中,加入 2 倍体积的95%的乙醇,静 置；将DNA丝状物缠绕在玻棒上.
7
四、思考题
① 用95%酒精提抽DNA时为什么要轻轻搅动; ② 结合本人操作的体会，试述在提取过程中应如何避免大分子
DNA的降解.
实验六 动物肝脏DNA的提取 动物医学院动物生化教研室

一、实验目的
① 了解从动物组织中提取DNA的一般原理； ② 掌握DNA提取的方法和步骤。

《生物化学实验》教学课件—35 血液中转氨酶活力的测定

《生物化学实验》教学课件—35 血液中转氨酶活力的测定
生物化学实验技术
生物化学实验技术
α-酮戊二酸也能与2,4-二硝基苯肼结合， 生成相应的苯腙，但后者在碱性溶液中吸收光 谱与丙酸酮二硝基苯稍有差别，在520m波长 比色时，α-酮戊二酸二硝基苯腙的吸光度远较 丙酮酸二硝基苯腙为低（约相差3倍）。经转 氨基作用后，α-酮戊二酸减少而丙酮酸增加， 因此在波长520m处吸光度增加的程度与反应 体系中丙酮酸与α-酮戊二酸的摩尔比基本上呈 线性关系，故可藉以测定谷丙转氨酶的活力。
3、酮体的测定
（1）另取2只50mL锥形瓶，按下表编号后加 入有关试剂。加完试剂后摇匀，放置10min。
编号
滤液1
I（实验） 2.0 II（对照） --
试剂（mL）
滤液2
0.1mol/L 10%NaO
H2O
碘溶液 H溶液
--
--
3.0
3.0
2.0
--
3.0
3.0
生物化学实验技术
在标准曲线上查出丙酮酸的μmol数（用 1μmol丙酮酸代表1.0单位酶活力），计算每 100mL血清中转氨酶的活力单位数。
混匀后，37℃水浴20min
0.4mol/L NaOH溶液/mL
5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0
混匀后，室温放置10min，以0号管作空白，在505nm比色
丙酮酸的μmol数（横坐标） 0
0.1 0.2 0.3 0.4 0.5
A505nm（纵坐标）
生物化学实验技术
2、另取2支试管，按下表进行操作。
生物化学实验技术
本实验以丙氨酸及α-酮戊二酸作为谷丙转氨酶 （GPT或ALT）作用的底物，利用内源性磷酸吡哆醛 作辅酶，在一定条件及时间作用后测定所生成的丙酮 酸的量来确定其酶活力。丙酮酸能与2,4-二硝基苯肼 结合，生成丙酮酸-2,4-二硝基苯腙，后者在碱性溶液 中呈现棕色，其吸收光谱的峰为439~530nm，可用于 测定丙酮酸含量。

第二章--生物化学检验基本知识PPT课件

第二章--生物化学检验基本知识PPT课件

2024/10/16
12
二、生物化学检验报告单的发放
即使是临床医护人员能够通过“医院信息系统（HIS）”在医生 工作站直接读取检验结果的临床科室或医疗单位，实验室也 应该用电话向临床报告，这是考虑到临床一线医护人员可能 会忙于抢救而不能及时观察到检测结果需要提醒的缘故。
“危急值”报告不同于“急诊检验”报告，是两个完全不同
4．技术要求高的检测项目 检测系统本身的不稳定因素，影响检验结果可靠性的检
验项目，或者检测系统本身存在着影响检验质量的诸多人
为环节，对检验人员的理论和技能要求较高的检验项目。
（三）急诊生化检验
急诊检验是实验室为了配合临床对危、急、重症患者的诊 断和抢救而实施的一种特需检验。如血气分析、电解质、 淀粉酶、心肌标志物、血糖等。
2．标本难以获得的检测项目
某些检验项目的标本获得比较困难，或者因为标本数 量极少，对标本的处理和保存都不能按规定要求和程序 进行，甚至不能进行复检的检验项目。
2024/10/16
8
一、生物化学检验的项目
3．发病率低或成本高的检测项目 由于某疾病的发病率很低造成标本数量过少或检验成 本过高的检验项目。
2024/10/16
15
第二节 生物化学检验的标本
一、标本的采集
生物化学检验最常用的标本是血液，其次是尿液，此外还有 脑脊液、浆膜腔积液、羊水等各种体液。 正确采集标本是获得准确、可靠检验结果的关键。
标本采集时应尽可能避免一切干扰因素，选择最佳的采集时 间，减少饮食和药物影响，减少昼夜节律带来的干扰。对于 有创伤性的操作，操作前应先与患者沟通建立互信，消除患 者的恐惧和紧张情绪。
剂及抗凝原理；尿液标本的采集方法；标本收检、分离、储存和转运；生物 化学检验项目类型；危急值、危急值报告的概念；检验报告单的发放方式。

生物化学实验课件

生物化学实验课件
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(二) 还原作用 许多糖类由于其分子中含有自由的或潜在 的醛基或酮基，因此在碱性溶液中能将铜、铁、 银等金属离子还原，同时糖类本身被氧化成糖 酸及其他产物。糖类这种性质常被利用 (lìyòng)于检测糖的还原性及还原糖的定量 测定。 本实验所用的试剂为斐林试剂和本尼迪克 特试剂。它们都是Cu2＋的碱性溶液，能使还 原糖氧化而本身被还原成红色（颗粒大）或黄 色（颗粒小）的Cu2O沉淀。 本尼迪克特试剂是改良的斐林试剂。（见 P100,101脚注）
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一、实验目的
1、学习和掌握(zhǎngwò)测定脂肪碘值
的原理和方法。
教材(jiàocái)第6、7页
2、了解和学习空白对照实验的原理和方
法
第二十六页，共128页。
二、实验原理(yuánlǐ) 碘值（价）是指100g脂肪在一定 条件下吸收碘的克数。碘值是鉴别脂 肪的一个重要常数，可用以判断脂肪 所含脂肪酸的不饱和程度。 脂肪中常含有不饱和脂肪酸，不饱 和脂肪酸具有一个或多个双键，能与 卤素起加成作用而吸收卤素。
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附注 （1）碘瓶必须洁净、干燥，否则油中含有水分，引起反应 不完全。 （2）加碘试剂后，如发现碘瓶中颜色变浅褐色时，表明试 剂不够(bùgòu)，必须再添加10～15 mL试剂。 （3）如加入碘试剂后，液体变浊，这表明油脂在CCl4中溶 解不完全，可再加些CCl4。（4）将近滴定终点时，用力振荡 是本滴定成败的关键之一，否则容易滴加过头或不足。如震荡 不够(bùgòu)，CCl4展会出现紫或红色，此时应用力振荡，使 碘进入水层。 （5）淀粉溶液不宜加得过早，否则滴定值偏高。
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五、实验结果记录(jìlù) 1、原始数据记录(jìlù) 1）花生油的质量 W值 2）Na2S2O3摩尔浓度 C值
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一、实验目的：
1、了解糖类某些颜色反应的原理； 2、学习应用糖的颜色反应鉴别糖类的方法； 3、学习几种常用的鉴定糖类还原性的方法及
其原理。
二、实验原理
(一)颜色反应
1. α-萘酚反应
糖在浓无机酸（硫酸或盐酸）作用下，脱水生
成糠醛及糠醛衍生物，后者能与α-萘酚生成紫红色 物质。
注意：因糠醛及糠醛衍生物对此反应均呈阳性， 不是糖类的特异反应。
1%果糖溶液
或 ＋ 1%蔗糖溶液 1%麦芽糖溶液
2ml本尼迪克特 1%淀粉溶液
（8）最后一组实验人员，离开实验室时，检查水、电、门、 窗是否关闭，以保证实验室安全。
（9）如有突发事件（起火、试剂腐蚀伤人）发生，不要惊 慌失措，应妥善处置（使用灭火机、关闭电源等）。
实验一 糖类的性质实验
糖类的重要鉴别方法是 Ｍｏｌｉｓｈ反应和Ｓｅｌｉ ｗａｎｏｆｆ反应。糖类、苷类及其他含糖物质与α 萘酚和 浓硫酸呈紫红色的环的反应称为 Ｍｏｌｉｓｈ反应，该反应 可用于糖类和非糖物质的鉴别。酮糖糖加入间苯二酚和６ｍ ｏｌ／Ｌ盐酸能产生红色的反应称为Ｓｅｌｉｗａｎｏｆｆ 反应，该反应可用于酮糖和醛糖的鉴别。如己酮糖加入间苯 二酚和浓盐酸，加热后迅速产生红色，而同样条件下己醛糖 的反应速度要慢得多。
四、实验步骤
1、α-萘酚反应
1%葡萄溶液
观
1%果糖溶液 各加1ml
★各加2滴
★各加1ml
察
5
记
1%蔗糖溶液
支
莫氏试剂 混
浓硫酸
录
试
各
1%淀粉溶液
管
匀
管
0.1%糠醛溶液
颜 色
Molisch反应（-萘酚反应）
界面：显色------鉴定：所有的糖类均可显色
浓H2SO4
糖 α -萘酚+酒精
2. 间苯二酚反应
8、验中所用得玻璃仪器及其它器皿，应 洗涤干净，桌面、地面要保持清洁有序，实 验完毕后，所用仪器设备应恢复原状。
9、必须遵守实验室规则：
（1）室内不得高声谈笑，保持安静的实验环境。 （2）爱护仪器，不得浪费药品，节省水电，遵守学生守则 及实验室安全、卫生等制度。
（3）公用仪器及试剂瓶用完后应及不要移动原有的位置。 注意瓶塞切勿盖错，以免污染试剂，用毕后立即放回原处。对 于有害药品，应按实验室规定取用。
本实验所用的试剂为斐林试剂和本尼迪克特试剂。它们都是Cu2＋的碱 性溶液，能使还原糖氧化而本身被还原成红色（颗粒大）或黄色（颗粒小） 的Cu2O沉淀。
本尼迪克特试剂是改良的斐林试剂。（见P100,101脚注）
三、器材及试剂
1、器材：试管、试管架、滴管、水浴锅（或电炉）
2、试剂： 1%葡萄糖溶液， 1%果糖溶液， 1%蔗糖溶液， 1%淀粉， 1%麦芽糖溶液， 0.1%糠醛溶液， 浓硫酸， 莫氏试剂， 塞氏试剂， 斐林试剂， 本尼迪克特试剂
3、实验时应严格按照实验步骤及试剂用量进行 操作，不能任意变更。不熟悉的仪器和设备，应先 请老师讲解后使用，切勿随意乱动。
4、实验进行时，必须随时把观察得到的现象和实验数 据，如实地记录在记录本上，不得记录在其他纸上，要养成 作原始记录的良好习惯。
5、实验时如有问题发生，应首先用自己学过的知识， 独立思考加以解决，培养独立分析问题和解决问题的能力， 如自己不能解决，可与指导老师共同讨论研究，提出解决问 题的办法。
生物化学实验课件
实验一 糖类的性质实验（实验一和二） 实验二 氨基酸的分离鉴定--纸层析法（7） 实验三 蛋白质及氨基酸的呈色反应（8） 实验四 酶的特性（18） 实验五 脂肪碘值的测定(5) 实验六 蛋白质的等电点测定和沉淀反应(9) 实验七 米氏常数的测定(20) 实验八 维生素C的定量测定(23)
（4）滤纸、火柴棒、碎玻璃等应投入废品袋，切勿丢入水 池，以保证下水道畅通。
（5）如用仪器有损坏，立即向指导老师报告，再行登记。
（6）保持实验室的整齐清洁，个人所带与实验无关的东西， 如书包等要放在实验室指定地方，不得乱放在实验桌上。
（7）由学生轮流值日，值日生要负责当天实验室的卫生、 安全和服务性的工作，特别注意打扫水槽中废弃物。
非还原性糖在酸存在下，加热水解后产生还原性 的单糖。淀粉的水解是逐步发生的，先水解成紫糊 精，再水解成红糊精、无色糊精、麦芽糖，最终水 解成葡萄糖。用碘液可以检查这种水解过程。完全 水解后，可用Ｂｅｎｅｄｉｃｔ试剂加以证实。
多糖类遇浓硫酸被水解成单糖，单糖被浓硫酸脱 水闭环，形成糠醛类化合物，在浓硫酸存在下与α萘 酚发生酚醛缩合反应，生成紫红色缩合物。
实验室规则及安全、卫生教育
实验课是提高教学质量的重要环节。通过实验巩 固理论知识，训练基本操作，培养独立工作的能力， 为了保证实验顺利进行，实验前应注意以下几点：
1、每次实验前必须详细预习实验讲义，明确实 验原理及操作步骤，并在记录本上拟出操作时的注 意事项。
2、实验时自觉遵守课堂纪律，严格按操作规程 操作，既要独立操作又要与其他同学配合。
1%葡萄糖溶液 1%果糖溶液 1%蔗糖溶液
各加0.5ml
3 支
试 管
各加5ml
赛氏试剂
混
均
同时 置沸 水浴 中
观察 记录 各管 颜色
3、糖与斐林试剂的反应
1）检验试剂：
1ml 斐 林试剂
或
1ml 本
＋ 4ml 蒸 馏 水
1 支 试 管
加 热 煮 沸
观 察 现 象
尼迪克
特试剂
2）实验过程
2ml斐林试剂 1%葡萄糖溶液
CHO
O
-CH2OH
பைடு நூலகம்
2. 间苯二酚反应
在酸作用下，酮糖脱水生成羟甲基糠醛， 后者再与间苯二酚作用生成红色物质。
此反应是酮糖的特异反应。因为醛糖在同 样条件下呈色反应缓慢，只有在糖浓度较高 或煮沸时间较长时，才呈微弱的阳性反应。
(二) 还原作用
许多糖类由于其分子中含有自由的或潜在的醛基 或酮基，因此在碱性溶液中能将铜、铁、银等金属离 子还原，同时糖类本身被氧化成糖酸及其他产物。糖 类这种性质常被利用于检测糖的还原性及还原糖的定 量测定。
6、精心爱护各种仪器。实验所需的一般仪器按规定借 领，归还。完成实验后应将仪器洗净倒置于实验柜中并排列 整齐。如有损坏或遗失，需要说明原因，经指导教师签名后 方可补领，并按规定赔偿。
7、精密贵重仪器每次使用后应登记姓名 并记录仪器使用情况。要随时保持仪器的清 洁。如发生故障，应立即停止使用并报告指 导教师。

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