实验用果蝇饲养及保种注意事项_王彩丽
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2009年第44卷第11期生物学通报49
果蝇(Drosophila melanogaste,2n=8)为完全变态的双翅目昆虫,具有生活史短、突变型多、染色体数目少、繁殖率高等突出特点,是遗传学教学中不可缺少的实验材料,也是遗传学研究中经典的模式生物材料。因此,饲养好果蝇对遗传学教学和科学研究有着重要的意义。现将本实验室饲养果蝇和保种方法总结如下。
1果蝇的饲养技术
1.2果蝇饲养用具选择果蝇饲养中常使用牛奶瓶、大中型指管或大试管等培养瓶进行饲养。本实验室以100mL、150mL和250mL锥形瓶、大中型指管做对比实验,并均用纱布包裹棉球作瓶塞培养果蝇。结果发现250mL的锥形瓶培养的果蝇生活力好,繁殖力强,其产卵多、幼虫大而肥,尤其适合做果蝇唾腺多线染色体观察的实验。这表明果蝇的生长空间越大,越有利于果蝇繁殖和个体的生长发育。因此,为了快速更好的培养果蝇,可选用容器较大的器具。
1.2培养基的配制果蝇是以酵母菌作为主要食料,因此实验室内凡能发酵的基质都可用作果蝇培养基,果蝇常用的培养基有玉米粉、米粉和香蕉培养基[1]。本实验室选用玉米粉培养基,其配方为:水150mL、琼脂1.5g、蔗糖13g、玉米粉17g、酵母粉1.4g、丙酸1mL,效果较好,且价格便宜。
培养基的配制方法:首先,取应加水量的一半,加入琼脂和蔗糖,煮沸使之充分溶解。其次,再取应加水量的另一半混合玉米粉,加热调成糊状。然后,将上述两者混合煮沸。待稍冷后(50~60℃)加入酵母粉及丙酸,充分调匀,最后分装到经灭菌的培养瓶中。培养基的厚度一般为2cm。
1.3果蝇的接种为了减少污染,接种最好在无菌操作室进行。接种前将无菌操作室用紫外灯照射30min后,在超净工作台上接种,操作时将锥形瓶微侧用瓶底在操作台上轻敲,这样果蝇就会被震落到底部,这时迅速拔出棉塞将2个瓶口对接,新配置的培养基在下方,然后轻拍上方的培养瓶使果蝇落到下方的培养瓶中。
1.4果蝇培养的温度果蝇生活周期的长短与温度有着密切的关系。一般在30℃以上温度能使果蝇不育或死亡,低温能使生活周期延长,生活力下降。经比较试验,饲养果蝇的最适温度为20~25℃,温度低于20℃生长速度慢,高于25℃容易死亡。
2果蝇的保种注意事项
2.1丙酸的用量丙酸的作用是抑制霉菌污染,但其对果蝇的生长也有一定的刺激性,过量则会抑制果蝇的生长,因此在配制培养基时可适当减少丙酸的用量。在正常的果蝇培养过程中,一般是在玉米粉培养基中加入1mL丙酸,用来防霉。本实验室经过试验,发现保种时,在超净工作台接种下,将丙酸的用量减少到0.5mL,即可以起到抑制霉菌生长的作用,还有利于果蝇的生长发育。
2.2培养基的灭菌为减少长时间培养中的培养基污染问题,在保种时,可将分装好的培养基放入高压灭菌锅中121℃灭菌30min,虽杀死了培养基中的酵母菌,但大大减少了培养基污染的机会,实际上移入果蝇后依靠果蝇体表携带的酵母菌自然接种[2]使得培养基中的酵母菌复得,以供果蝇生长发育需要。
2.3保种的温度为了减少接种次数,有利于保持种性,保种时将果蝇培养温度设为15℃恒温暗培养,使得果蝇的生活周期延长,繁殖速度降低,以致培养基的消耗减少。本实验室采用上述措施,一瓶培养基可连续培养3个月,不需要转接,而果蝇依然存活,既保持了种性又减少了工作量。
2.4保种防杂原种保种时,一定要注意防止种系间的混杂。培养瓶的棉塞要塞紧,避免果蝇逃出,转移果蝇时,防止果蝇飞散,如果发现有从中逃逸者,必须捕杀。最好每天只转接一个种系或分室转接不同种系。
2.5果蝇的复壮由于长期在低温下生活,果蝇的生活力大大降低。因此,必须挑取个体较大,繁
实验用果蝇饲养及保种注意事项王彩丽(湖北省长江大学生命科学学院湖北荆州434025)
中国图书分类号:Q3-3文献标识码:B
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殖力较强的雌雄果蝇,装入新培养瓶,继续培养。
主要参考文献
1祝水金.遗传学实验指导(第2版).北京:中国农业出版社,
2005:1—14.
2贾永红.实验果蝇的一些饲养技巧和注意事项.生物学通报, 2007,42(7):55—56.
(E-mail:wangcaili88@)
50生物学通报2009年第44卷第11期
显微玻片就其分类来讲属标本范畴,由于它所具有的直观性和真实性,一直是人工绘图所无法替代的,在生物学教学中发挥着独特的作用。在课改以前,强调生物学系统知识,带来大量形态学内容,显微玻片和生物模型、生物标本成为生物学教学仪器的3大类别。课改以后,形态学内容大量减少,于是学校需要配备的模型标本品种和数量也大量减少。但是相比而言,显微玻片却无明显变化,正在制订的《高中理科教学仪器配备标准(征求意见稿)》中玻片标本的品种数量甚至比原来还有明显的增加。究其原因一是和它的标本特性有关,图谱、电子图片无法满足整体性和真实性的要求;二是显微玻片制作的某些技术是课程中的内容,是学生必须掌握的基本技能之一。因此,尽管目前由于信息技术发展,为图片的储存再现提供了方便,但也很难代替真实切片制作、观察、识别和判断等能力的培养。在《普通高中生物课程标准(实验)》5套教科书必修模块中,和显微玻片制作和观察有关的实验数量增加最明显。
就市场来讲,显微玻片并没有萎缩。上世纪90年代前后,全国大小切片厂不到15家,可目前不下20家。切片市场来源有3个方面,一是中小学,这部分市场受政策影响明显,比如近3年来,在均衡化办学思想的指导下,强调教学资源均衡配置,大部分省市教学仪器经费投向农村地区,加强薄弱学校常规教学仪器的配备,于是显微玻片的需求跟“九年义务达标”、“普及实验教学达标”一样又一次明显增加;二是出口,近20年来,生物学教学仪器大量出口,全世界大部分学生显微镜、大量生物模型来自中国,切片出口量也不少,粗略估计每年出口量超千万;三是高校,原来许多高等学校多采取自制部分玻片标本用于教学,目前大多已停止,切片的供应自然转嫁到专业厂身上。然而目前绝大多数专业生产厂规模小、技术力量薄弱,在质量把握和产品创新上能力不强,据我们了解高校基础课程相应的教学玻片严重缺乏,他们对市场的产品质量不很满意。在出口产品中也存在或多或少的问题,国际竞争力有待提高。
为了总结我国生物玻片制作经验和技术,借鉴和学习国外在理论和实践上的发展,提高切片产品质量,我们开展了“新技术与新方法在生物显微玻片标本制作中的应用”的课题研究,得到我们研究所的大力支持。我们从德国JOHANNES LIEDER GmbH&Co.KG(以下简称Lieder公司)、美国的WARD′S Natural Science Establishment,LLC(以下简称Ward′s公司)和Carolina Biological Supply Company(以下简称Carolina公司)购买了切片样品,收集了3家公司的近期产品目录,并对其网站进行浏览、比较和研究,总结如下。
1品种
美国Ward′s公司切片类别及数量如下:组织学458种、动物学358种、细胞和发育228、真菌
国内外显微玻片质量及技术比较
刘俊波(教育部教学仪器研究所北京100080)
摘要显微玻片是生物学教学不可缺少的教具之一。通过对德国Lieder公司、美国Ward’s 公司和Carolina公司的显微玻片产品品种的统计分析、对样品的检查研究,和国内显微玻片产品在品种数量、外观及染色技术上进行了比较,提出了提高我国显微玻片质量的做法。
关键词显微玻片多重染色整体染色单片染色
中国图书分类号:Q336文献标识码:A