特发性卵巢早衰患者AMH,AMHR—Ⅱ基因多态性分析

特发性卵巢早衰患者AMH，AMHR—Ⅱ基因多态性分析

目的探讨特发性卵巢早衰与AMH，AMHR-Ⅱ的基因多态性。方法选择2015年6月～2017年3月在我院诊断的特发性卵巢早衰患者50例为POF组。另选择健康体检者100例为对照组。PCR方法测定两组AMH，AMHR-Ⅱ基因多态性。结果POF组AMH基因突变位点基因型及等位基因频率与对照组比较差异无统计学意义（P>0.05）。POF组AMHR-Ⅱ c.49+10T>G 基因位点GG基因型比例显著高于对照组，G等位基因频率显著高于对照组，c.622-2C>T基因位点TT基因型比例显著高于对照组，T等位基因频率显著高于对照组，c.622-24C>A 基因位点AA基因型比例显著高于对照组，A等位基因频率显著高于对照组，c.1038G>T基因位点TT基因型比例显著高于对照组，T等位基因频率显著高于对照组，差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论AMHR-Ⅱ基因多态性可能是特发性卵巢早衰的重要的发病机制。

[Abstract] Objective To discuss polymorphism analysis of AMH，AMHR-Ⅱgene in patients with idiopathic premature ovarian failure. Methods 50 cases with idiopathic premature ovarian failure from Jun 2015 to Mar 2017 were selected as POF group. And 100 cases for physical examination were selected as control group. Polymorphismof AMH，AMHR- II gene of two groups was detected by PCR. Results Genotype and allele frequency of AMH gene mutation sites of POF group showed no significant difference with the control group（P>0.05）. The proportion of GG genotype in AMHR- loci II，c.49+10T>G of POF group was higher than that of the control group，and G allele frequency was higher than that of the control group；The proportion ofTTgenotype inc.622-2C>Tof POF group was higher than that of the control group，and Tallele frequency was higher than that of the control group；The proportion ofAAgenotype inc.622-24C>Aof POF group was higher than that of the control group，and Aallele frequency was higher than that of the control group；The proportion ofTTgenotype inc.1038G>Tof POF group was higher than that of the control group，and Tallele frequency was higher than that of the control group；The difference showed significant difference（P＜0.05）. Conclusion Polymorphism of AMHR-Ⅱgene may be an important pathogenesis of idiopathic premature ovarian failure.

[Key words] Idiopathic premature ovarian failure；AMH；AMHR-Ⅱ；Gene polymorphism

特發性卵巢早衰是指無精确原因的，自身免疫抗体正常的，染色体核型正常的女性在40周岁之前出现的性器官萎缩、持续性闭经，伴有卵泡雌激素、黄体生成素升高，雌激素下降的一种综合征[1-2]。我国卵巢早衰的发病率相对较高，而其中有80%为特发性卵巢早衰，患者主要表现为月经紊乱，血管

舒缩功能不稳定，容易出汗、潮热、情绪波动等。目前特发性卵巢早衰的发病机制还不十分明确，可能与遗传、自身免疫因素、感染、代谢异常、环境等有

关[3-4]。特发性卵巢早衰尚无明确有效的治疗方法。抗苗勒激素（AMH）属于转化生长因子超家族成员，与人类生殖系统的发育及功能密切相关[5-6]。其与抗苗勒激素Ⅱ型受体（AMHR-Ⅱ）结合而发挥作用。本研究分析特发性卵巢早衰患者AMH以及AMHR-Ⅱ基因多态性，现将结果报道如下。1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2015年6月～2017年3月在我院诊断的特发性卵巢早衰患者50例为POF组。纳入标准：年龄18～39岁，汉族，无月经来潮≥4个月；超声检查显示内生殖器萎缩；两次间隔1个月以上检测空腹血清FSH>40IU/L；排除有明确病因的卵巢早衰。排除标准：既往腮腺炎病史，盆腔结核病史，卵巢手术，盆腔内放疗、化疗者。所有患者对本次研究知情同意，本研究经过医院医学伦理委员会同意。另选择健康体检者100例为对照组。POF组年龄18 ～39岁，平均（35.1±7.5）岁。对照组年龄21～39岁，平均（35.5±7.1）岁。两组平均年龄比较差异无统计学意义（P>0.05）。

1.2 方法

POF组患者与对照组均于月经来潮第三天采集晨起空腹静脉血10mL用于检测，POF组中无月经来潮的患者，B超观察双侧卵巢无优势卵泡形成时采集晨起空腹静脉血标本。-75℃保存待测。血标本提取DNA：采用饱和酚/氯仿法提取目的基因DNA片段；血标本解冻，取2mL置于离心管中，加10mL灭菌蒸馏水，颠倒混匀，静止10min；4000转/min离心10分钟，弃上清，重复离心3次，至上清液澄清；沉淀物种加STE700μL，SDS 1～2滴，蛋白裂解酶K 10μL，摇匀，37℃温浴过夜，至沉淀完全消失，室温下离心，弃上清，将细胞沉淀转至1.5mL 试管；试管内加入饱和酚至试管加满，摇匀，静置5min，16000转/min离心10分钟，提取上清液至另一个1.5mL试管，加等体积氯仿，摇匀，静置5min，16000转/min离心10min，取上清，加入1.5mL试管，加入95%冰冻酒精，醋酸钠1滴，摇匀；16000转/min离心10min，弃上清，75%冰冻酒精萃洗沉淀，16000转/min离心5min，弃上清，自然干燥，得DNA。AMH、AMHR-Ⅱ基因检测：自数据库中获得AMH、AMHR-Ⅱ基因相关序列，采用引物设计软件设计正向及反向引物。配制引物。PCR反应体系：模板DNA 1μL，正向引物1μL，反向引物1μL，MgCl2 3μL，10×Buffer 3μL，dNTPs 3μL，Tag酶0.3μL，H2O 17.7μL。PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳。PCR扩增产物进行纯化及序列测定。

1.3 统计学处理

采用SPSS17.0统计学软件对数据进行分析，计数资料采用χ2检验，计量资料以（）表示，采用t检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 兩组AMH基因突变位点基因型及等位基因频率比较