水质 氨氮的测定 纳氏试剂分光光度法 方法学验证报告
验证起始日期 ：2018年 月 日 结束日期：2018年 月 日
一、实验目的
1、掌握比色法测定水中氨氮含量的测定方法及原理。
2、熟悉纳氏试剂分光度法测定氨氮的方法学验证。
二、依据标准文献 HJ 535-2009 水质 氨氮的测定 纳氏试剂分光光度法 化学分析方法确认和验证指南 GB/T 27417-2017
三、适用范围 适用于地表水、地下水、生活污水和工业废水中氨氮的测定。
四、方法原理
以游离态的氨或铵离子等形式存在的氨氮与纳氏试剂反应生成淡红棕色络合物，该络合物的吸光度与氨氮含量成正比，于波长420 nm 处测量吸光度。
氨氮与纳氏试剂反应生成棕色胶态化合物，
[][]KI O H I NH O Hg NH KOH HgI K 7232222342++⋅=++
五、仪器设备
紫外可见分光光度计 型号：T6新世纪 出厂编号：26-1650-01-1108 厂家：北京普析
六、试剂材料
1． 20mm 比色皿，50毫升比色管，实验室用超纯水机。 2． 纳氏试剂（碘化汞-碘化钾-氢氧化钠（HgI 2-KI-NaOH ）溶液）：
称取 16.0g 氢氧化钠（NaOH ），溶于50ml 水中，冷却至室温。 称取7.0g 碘化钾（KI ）和10.0g 碘化汞（HgI 2），溶于水中，然后将此溶液在搅拌下，缓慢加入到上述50ml 氢氧化钠溶液中，用水稀释至100ml 。贮于聚乙烯瓶内，用橡皮塞或聚乙烯盖子盖紧，于暗处存放，有效期1年。
3． 酒石酸钾钠溶液：称取50.0g 酒石酸钾钠（KNaC 4H 4O 6·4H 2O ）溶于100mL 水中，加热煮沸以驱除氨，充分冷却后稀释至100ml 。
4． 氨氮标准贮备溶液（1000μg/ml ）：称取3.8190g 氯化铵（NH 4Cl ，优级纯，在100~105℃干燥2h ），溶于无氨水中，移入1000ml 容量瓶中，稀释至刻度，摇匀。可在2~5℃保存1个月。
5． 氨氮标准工作溶液（10μg/mL ）：吸10.00ml 氨氮标准贮备溶液于1000ml 容量瓶内，用无氨水稀释至刻度，摇匀。临用前配制。
以下为水样需预处理时所需试剂
6. 硫代硫酸钠溶液（3.5g/L ）：称取3.5g 硫代硫酸钠（Na 2S 2O 3）溶于水中，稀释至1000ml 。
7. 硫酸锌溶液（100g/L ）：称取10.0g 硫酸锌（ZnSO 4·7H 2O ）溶于水中，稀释至100ml 。
8. 氢氧化钠溶液（250g/L ）：称取25g 氢氧化钠溶于水中，稀释至100ml 。
9. 氢氧化钠溶液（1mol/L ）：称取4g 氢氧化钠溶于水中，稀释至100ml 。 10. 盐酸溶液(1mol/L)：量取8.5ml 盐酸于适量水中用水稀释至100ml 。 11. 硼酸（H 3BO 3）溶液（20g/L ）：称取20g 硼酸溶于水，稀释至 1 L 。
12. 溴百里酚蓝指示剂（0.5g/L ）：称取0.05g 溴百里酚蓝溶于50ml 水中，加入10ml 无水乙醇，用水稀释至100ml 。
13. 淀粉-碘化钾试纸：棕色瓶中密封保存，外购。 七、实验步骤 1. 校准曲线的绘制
在8个50mL 比色管中，分别加入0.00、0.50、1.00、2.00、4.00、6.00、8.00和10.00mL 氨氮标准工作溶液，其所对应的氨氮含量分别为0.0、5.0、10.0、20.0、40.0、60.0、80.0和100µg ，加水至标线。加入1.0ml 酒石酸钾钠溶液，摇匀，再加入纳氏试剂1.0ml ，摇匀。放置10min 后，在波长420nm 下，用20mm 比色皿，以水作参比，测量吸光度。
以空白校正后的吸光度为纵坐标，以其对应的氨氮含量（µg ）为横坐标，绘制校准曲线。 2. 样品预处理
样品采集与保存→去除余氯→ 絮凝沉淀→调节PH 值至约6.5，预蒸馏→馏出液达200 mL 时，停止蒸馏，加水定容至250 mL 。
3. 样品测定
取经预处理后的适量水样50 mL （使氨氮含量不超过2mg/L ），加入50mL 比色管中，稀释至刻度。按与校准曲线相同的步骤测量吸光度。
空白试验：用水代替水样，按与样品相同的步骤进行前处理和测定。 4.数据处理
由水样测得的吸光度，从标准曲线上查得氨氮含量（µg ）。
V
m
L mg
）氨氮（/N, 式中：m ——由标准曲线查得的氨氮量(µg)； V ——水样体积（mL ）。
5注意事项
1. 纳氏试剂中碘化汞与碘化钾的比例，对显色反应的灵敏度有较大影响。静置后生成的沉淀应除去。
2. 纳氏试剂显色后的溶液颜色会随时间变化，应在较短时间内完成比色操作。
八、方法学实验
1.标准溶液配制记录表
2.标准曲线试验结果：
检测日期：2018年7月31日
检测日期：2018年8月6日
日
检测日期：2018年8月10
结论：综合3次测量数据，线性方程相关系数均>0.99，表明标准曲线方程良好。
3.检出限
连续测量8次空白溶液的3倍标准偏差法得出检出限。
结论：依据标准 HJ 535-2009 水质氨氮的测定纳氏试剂分光光度法要求，
使用20mm(2㎝)比色皿，50毫升水样体积，检出限为0.025mg/mL，检出限符合要求。。
4.准确度检查(回收率测定)
回收率=(测得氨氮总量－样品氨氮测得量)÷加入标准溶液含量×100％
=(0.58mg/L－0.20mg/L)÷0.4mg/L×100％
=95％
结论：回收率95％，准确度符合要求。
5 精密度检查
标准溶液名称：氯化铵NH4Cl 浓度:10μg/mL
检测日期：2018年7月31日
