< 医学生物学实验>整理
1. 常用的吸量管有：
奥氏吸量管、移液管、刻度吸量管
4. 如何正确使用吸量管？
答：(1) 选用原则：就近原则
(2) 吸量管的使用：吸- 擦-调-放
5. 如何正确使用微量加样器？
答：转-按-吸-擦-按
6. 如何正确使用离心机？
放置-装管-平衡-启动-取出
二、主要实验方法原理
1. 分光光度法基本原理是什么？答：不同物质由于其分子结构不同，对不同波长光线的吸收能力也不同，因此每种物质都具有其特异的吸收光谱，在一定条件下，其吸收程度与该物质浓度成正比，故可利用各种物质的不同的吸收光谱特征及其强度, 对不同物质进行定性和定量的分析。分光光度法常被用来测定溶液中存在的光吸收物质的浓度，其基本原理是根据Lambert 和Beer 定律。该定律
阐明了溶液对单色光吸收的多少与溶液浓度及溶液厚度之间的关系。
2. 利用分光光度法对物质进行定量测定的方法主要有哪两种？答：直接比较法(公式法) 、标准曲线法
3. 层析法基本原理是什么？答：层析法就是利用混合物在经过固定相和流动相两相的过程中，其中的待分离物质在不同的两相中不断地进行交换、分配、吸附及解吸附等过程，由于混合物中各组分间在理化性质如吸附力、分子形状和大小、分子极性、分子亲和力、分配系数等方面存在着差异，因此当它们经过上述相同重复过程时，各自的情况就会有所不同从而使各物质得以分离。
4. 常用的层析法有哪几种？
答：薄层层析、离子交换层析、凝胶层析、亲和层析。
5. 离子交换剂的作用原理是什么？
答：①阳离子交换剂吸附阳离子；②阴离子交换剂吸附阴离子；
当离子结合到固定相交换基团上以后，用提高流动相中离子强度或改变pH 的办法，把它们从离子交换剂上依次洗脱下来，达到分离纯化的目的。
6. 凝胶层析的作用原理是什么？
答：分子筛
7．亲和层析的作用原理是什么？答：亲和层析是以能与生物分子进行特异结合的配基作为固定相，对混合物中某一生物分子进行高效分离纯化的层析技术。
9. 影响电泳的主要因素是什么？
答：
(1) 电泳溶液的pH 值|: 当溶液的pH 值等于某种两性电解质的等电点时，不带电荷。当溶液pH 小于其等电点时，则呈正离子状态，移向负极；反之，溶液pH 值大于其等电点时，
则呈负离子状态，移向正极。
(2) 缓冲液的离子强度: 离子强度低，电泳速度快，分离区带不易清晰；离子强度高，电泳速度慢，但区带分离清晰。常用离子强度为0.02~0.2 。
(3) 电场强度: 电泳速度和电场强度成正比关系。电场强度愈高，则带电粒子的移动愈快，但电压增加，相应电流也增大，电流过大时易产生热效应, 可使介质中溶液蒸发及生物样品变性。
(4) 电渗作用: 如纸上电泳蛋白质移动的方向与电渗现象相反，则实际上蛋白质泳动的距离，等于电泳移动距离减去电渗距离。如电泳方向和电渗方向一致，其蛋白质移动距离，等于二者相加。电渗现象所造成的移动距离可用不带电的有色染料或有色葡聚糖点在支持物的中间，观察电渗方向和距离。
10. 区带电泳分几类？
2 •按支持物的装置形式不同，可分为：①平板式电泳；②垂直板式电泳；③垂直管状电泳。
3 .按pH值的连续性不同，可分为：①连续pH电泳：电泳的全部过程中缓冲液pH值保持
不变；②不连续pH电泳：缓冲液与支持物之间有不同的pH值，能使分离物质的区带更加
清晰。不连续与连续电泳的主要区别在于前者有两层不同孔径的凝胶系统；电极槽中及两层凝胶中所用的缓冲液pH 值不同；电泳过程中形成的电位梯度亦不均匀。而后者在这三个方面都是单一或是均匀的。
11. 离心技术基本原理是什么？
低速6000r/min 高速25000r/min 超速答：离心基本原理是根据物质沉降系数、质量、浮力因子等不同，利用离心机产生强大离心力来分离具有不同沉降系数的物质。沉降系数是微颗粒在离心力场的作用下，从静止状态到到达极限速度所需要的时间。其单位用S表示，1S = 1 X 10 -13秒。它反映的是单位离心力
做用下颗粒沉降的速度。
12•常用的离心分离方法有哪些？原理是什么？
答：1 •差速离心法：不同的离心速度，由低速到高速分阶段离心，将不同颗粒大小的微粒分批沉降析出，留取所需成分。
2 •密度梯度离心法：样品溶液在密度梯度介质中进行离心沉降，在一定的离心力作用下把各组分的颗粒分配到梯度液中相应位置上，形成不同区带的分离方法。
3 .超速离心法：超速离心法多用于亚细胞结构的分离制备和生物大分子的制备。目前转速
已达85000r／min 以上。生物大分子在超离心力场作用下，离心力大于分子扩散力，生物大分子便逐渐沉降。分子量和分子形状不同，其沉降的速度就不同，因此而被分离。离心分离是利用离心力将悬浮液中的悬浮微粒快速沉降，借以分离比重不同的各种物质成分的方法，是实验室分离提取生物分子常规采用的技术之一。
17. 细胞培养必需设备有哪些？
答：细胞培养必需设备有超净工作台、CO2 培养箱、倒置显微镜、液氮生物容器、压力蒸汽消毒器、无菌过滤器、电热干燥箱、离心机、细胞计数板和冰箱等。
18. 无菌操作技术包括哪些内容?
答： 1. 保持安静、整洁的无菌工作区域; 2. 保持干净整洁的工作面; 3. 注意个人卫生； 4. 在洁净工作台内无菌操作
实验一贴壁细胞的传代培养
1. 何谓贴壁细胞？答：贴壁细胞又称锚着依赖性细胞，是指赖于贴附在培养器皿表面生长的细胞，大多数培
养细胞属于此类。细胞附着或贴附于底物表面上，呈现出极性细胞的典型形态过程，称为贴壁。贴壁是贴附类细胞生长增殖的条件之一。
2. 贴壁细胞的传代培养的实验原理是什么？答：细胞的贴壁是通过特异的细胞表面受体与细胞外基质分子结合而实现的，细胞在铺展
之前，细胞已分泌了细胞外基质和蛋白聚糖。细胞外基质先粘着在带电荷的培养基质上，然后，细胞再通过特异的受体附着到基质上。蛋白酶可消化细胞外基质，甚至通过降解跨膜蛋白的胞外区使单层培养的贴壁细胞彼此分离。上皮细胞一般不易解离，因为它们通过紧密连接复合体使细胞结合在一起；间充质间结合则更多地依赖基质的作用，因此容易分离。3．细胞的计数方法是什么？
n/4*104 * 稀释倍数
4．怎样鉴别死、活细胞？台盼蓝染色法” 。
5. 怎样进行细胞计数？答：低倍镜下按一定方向逐格计数板内四个角的每格大格中的呈透亮的细胞数。若细胞正好压在格线上，则按数上不数下、数左不数右的原则计数。
