香豆素类成分分析.ppt

➢有含氧取代 最大吸收红移-OH>-OCH3>-CH3
➢7位有含氧取代 最大吸收峰红移至315-325nm
理化性质
香豆素的鉴别
➢ （一）化学反应法 ➢ （二）荧光法 ➢ （三）薄层色谱法
化学反应法
化学反应法即是利用上述显色方法（如 异羟肟酸铁反应，三氯化铁反应，重氮化 反应等）进行成分显色鉴别。
香豆素类成分分析
王林艳（043007121） 黄 宏（043007122） 徐艺铨（043007123） 梅 琪（043007124） 贡 磊（043007125）
香豆素定义
香豆素是一类具有苯骈α-吡喃酮环结构 的化合物，从结构上可看作是由顺式邻羟 基桂皮酸脱水缩合而成的内酯。
香豆素的分布
（偶氮染料衍生物）
理化性质
显色反应
（4） Gibb’s反应和Emerson反应
条件：有游离酚羟基且对位无取代基 原理：试剂与酚羟基对位活泼氢缩合 试剂： Gibb’s——2,6-二溴（氯）苯醌氯亚胺
Emerson——氨基安替匹林和铁氰化钾 颜色： Gibb’s反应——蓝色
Emerson反应——红色
点、芳香性气味。小分子游离香豆素尚具 有挥发性和升华性，能随水蒸气蒸馏。 ➢ 香豆素苷类无香味、挥发性和升华性。
理化性质
物理性质
溶解性
游离香豆素多为亲脂性化合物，一般不 溶或难溶于水，易溶于苯、乙醚、三氯甲 烷和甲醇、乙醇等有机溶剂（相对分子量 较小的游离香豆素可溶于沸水）
香豆素苷能溶于水、甲醇、乙醇，难溶 于苯、乙醚等极性小的有机溶剂
理化性质
荧光反应
（1）香豆素母核无荧光，呋喃香豆素荧光弱 （2）羟基香豆素成蓝色荧光，7-OH荧光最强 （3）加OH-，羟基香豆素荧光增强 （4）7-OH香豆素，6或8位有取代，荧光减弱 （5）7-OH香豆素醚化、酯化、酰化，荧光减弱
理化性质
光谱特征（紫外）
➢母核上无含氧官能团取代时 274nm——苯环 311nm——α，β-不饱和内酯
（3）薄层鉴别：吸取供试品溶液5µl，两种 对照品溶液各1µl，分别点于同一硅胶G薄 层板上，以正己烷-乙酸乙酯（4：1）为展 开剂，展开，取出，晾干，喷以10%氢氧 化钾甲醇溶液，置紫外灯（365nm）下检 识。
（4）结果：在与对照品相应位置上，显相同 颜色的斑点。
香豆素的含量测定
➢（一）分光光度法 ➢（二）荧光光度法 ➢（三）薄层扫描法 ➢（四）高效液相色谱法 ➢（五）气相色谱法
香豆素类化合物广泛分布于高等植物中， 特别是伞形科,芸香科等，在生物体内多以 游离形式或苷的形式存在。
香豆素的作用
• 1、消炎 • 2、利胆 • 3、镇咳 • 4、吸收紫外线 • 5、抗辐射
………
➢（一）结构类型 ➢（二）理化性质 ➢（三）鉴别 ➢（四）含量测定
结构类型
简单香豆素 呋喃香豆素 吡喃香豆素 其他香豆素
异香豆素 有取代的香豆素 二聚体和三聚体
结构类型
七叶内酯 （简单香豆素）
结构类型
呋喃香豆素
吡喃香豆素
结构类型
其他香豆素 仙鹤草内酯（异香豆素）
异七叶内酯（二聚体） 双香豆素
理化性质
➢ 一、物理性质 ➢ 二、化学性质 ➢ 三、荧光特征 ➢ 四、光谱特征
物理性质
性状： ➢ 游离香豆素多有完好的结晶、固定的熔
理化性质
化学性质
与碱反应 异羟肟酸铁反应 三氯化铁反应
显色反应 Gibb’s反应 Emerson反应 重氮化反应
理化性质
与碱反应
理化性质
显色反应
（香1）豆异素羟O肟H-酸开铁环反盐应缩酸合羟胺
异羟肟酸H+ 显红色来自百度文库
Fe3+
（2）三氯化铁反应
酚羟基+FeCl3 络合 兰绿色或棕色
（3）重氮化反应
酚羟基对位无取代+重氮化试剂 红色或紫色
• 常用固定相：十八烷基硅烷键和硅胶 • 常用流动相：不同比例的甲醇-水 • 举例：补骨脂素，欧前胡素，蛇床子素，
白花前胡甲素。
气相色谱法
• 某些相对分子质量小，具有挥发性的香豆 素类成分。可用气相色谱法测定（如蛇床 子素，香柑内素，花椒毒素，花椒毒酚等）
• 常用检测器：SE-30石英毛细管柱，氢火焰 离子化检测器。
分光光度法
➢利用香豆素类成分的显色反应进行比色测定。 举例：补骨脂素注射液的含量测定，可在样品 中加入重氮化试剂，生成紫色偶氮染料，于 580nm处测定含量。
➢ 利用香豆素类成分都具有紫外吸收，样品较 纯时，也可进行分光光度法测定。 举例：消痔液中补骨脂素的测定，检测波长 246nm。
分光光度法
说明：中药制剂成分复杂，可先用薄层 色谱分离，在紫外灯下荧光定位，找出香 豆素成分，将其吸附层刮下，用适宜溶剂 洗脱，再加入重氮化试剂，进行比色测定。 如健腰丸中补骨脂素、异补骨脂素的测定。 但应同时进行空白试验及净化回收率实验。
荧光光度法
羟基香豆素成分大多能产生强烈荧光， 用荧光光度计进行荧光测定有较高的灵敏 度及选择性。当干扰成分较多时，可先用 色谱法净化。
荧光法
荧光法是利用羟基香豆素大多能产生荧 光，可直接观察提取溶液的荧光，也可观 察薄层荧光斑点
薄层色谱法（首选）
薄层色谱法也是利用香豆素大多具有荧 光用薄层色谱法进行鉴别。（PS：不具荧 光或荧光强度较弱的香豆素，可用喷显色 剂或喷碱溶液以增强荧光再进行鉴识）
香豆素鉴别举例
课本P148 例15 七宝美髯颗粒中补骨脂素，异补骨脂素的 鉴别就是利用薄层色谱法供试品溶液和对 照品溶液显相同颜色而进行鉴别。
薄层扫描法
样品经薄层分离后，于荧光灯下定位， 利用香豆素类成分具有紫外吸收或能产生 荧光的特性，不经显色，直接进行荧光扫 描测定。举例：复方制剂中补骨脂素，异 补骨脂素，白瑞香素，欧前胡素等。
高效液相色谱法
• 由于香豆素类成分含有芳香环及其他共轭 结构，用高效液相色谱法测定，紫外检测 器检测，有较高灵敏度。
七宝美髯颗粒中补骨脂素、异补 骨脂素的鉴别
• 组成：何首乌（制）、当归、补骨脂、枸 杞子等
• 鉴别： （1）供试品制备：取本品10g，研细，加乙
酸乙酯20ml，盐酸0.5ml，超声处理20min， 滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯0.5ml使 溶解，作为供试品溶液。
（2）对照品溶液制备：另取补骨脂素、异补 骨脂素对照品，加乙酸乙酯分别制成每1ml 含2mg的溶液，作为对照品溶液。