利用小鼠局部淋巴结法检测皮肤过敏反应及过敏机制的研究_王智琴
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Ｐ2
5
利 用 小 鼠 局 部 淋 巴 结 法 检 测 皮肤 过 敏 反 应 及 过 敏机 制 的研 究
王智 琴＼ 杨
（ 1
．
微
1
2
，
汪
7 0 0 4
；
岩＼
吕耀中Ｓ
王
捷
2
辽宁 千
一
生 物 技术 有 限 公 司 沈 阳
，
1
2
．
沈 阳 化工 研 究 院 安 全 评 价 中 心 沈 阳
1
应用
8
、
检 测 小 鼠 淋 巴 细 胞 悬液 中Leabharlann Baidu的 淋 巴 细 胞 亚 群 变 化 以 及 与 致敏 相 关 的 Ｃ Ｄ
。
5 4
、
ＣＤ 2
：
细 胞表 面 分 子 变 化 情 况
－
【
结果 】 成 功在 本 实 验 室 建立 了 稳 定
，
、
重 复性 好 的 ＬＬＮＡ
Ｂ ｒｄ Ｕ ＥＬＩ Ｓ Ａ方法
；
采 用 ＥＬ
ＩＳ
Ａ法 检 测 不
同 处 理 动 物 血清 中 组 胺
Ｉ
Ｌ
－
2
、
Ｉ
Ｌ
－
4
的 水平
，
应 用 荧光 定 量 Ｐ Ｃ Ｒ方法
，
检 测 测 试 动 物 脾脏致 敏 相
；
关基 因 流式 细 胞 术
ＣＤ 6
9
，
的 差 异表 达
研 究 小 鼠 脾脏 中 三 种 致敏 相 关 基 因 的 差 异 表 达
ｔ
其 中 丁 子 香 酚组
／
、
ａ
－
己 基 肉 桂 醛组
；
、
ＤＮ Ｃ Ｂ 组 的 增 加 量与
溶 剂对 照 组 相 比 差 异 性 显 着
小 鼠 淋 巴 结 中 ＣＤ 4
－
。
Ｚ＾ 但 ＣＴ
ｏｘ 基 因 ／ ｐ
的 表 达 量无 明 显 变 化
。
流 式 细 胞术 结 果 显 示
的 表 达量 均 增 多
关 键词
＊
1
，
：
小 鼠 局 部 淋 巴 结 试验
：
；
皮 肤过 敏 反应
；
ＥＬ ＩＳ Ａ
法
；
荧光 定 量 Ｐ Ｃ Ｒ
；
流式 细 胞术
责任 作 者
ｗｚ 7 6 2 6 ｑ
＠
1
2 6 ｃｏ ｍ
．
7 8
，
1
1
0 0 2
1
）
摘要
：
【
目
的 】 本 研 究拟 探 索 符合
－
“
3
Ｒ
”
原 则 的 临 床 前 药 物 皮 肤 致敏 试 验 的 替 代 方 法
）
，
，
根据
ＯＥ Ｃ Ｄ 指 导 原 则 ＬＬＮＡ Ｂ ｒｄ Ｕ ＥＬＩ Ｓ Ａ 法
：
（
4 4 2Ｂ
建 立敏感 度
法
、
、
准 确 率 高 并可 在 致 敏 诱 导 期 检
、
测 化 学 品 致敏 性 的 皮 肤致 敏试验 方 法
。
通 过Ｅ Ｌ
Ｉ
ＳＡ
荧 光 定 量Ｐ Ｃ Ｒ 法
流式 细 胞术观 察 致 敏
，
诱 导 期 小 鼠 血 清 生化 指 标
、
脾脏 中 致 敏基 因 以 及 引 流 淋 巴 结 淋 巴 细 胞膜 表面 分 子 的 变 化情 况
。
探 讨 在 致 敏 诱 导 期 检 测 致敏 性 的 机 制
【
材 料和 方法
硝基 氯苯
、
】
选 择 丁 子 香 酚 与 ａ 已 基 肉 桂 醛作 为 阳 性
－
致敏物
甘油
、
，
建 立 试 验方法
、
，
分 别 选择 2
，
4 二
－
2
－
巯 基苯 并 噻 唑
、
戊 二 醛 作 为 致 敏 阳 性物
；
，
氯 化钾
乙 醇 作 为 致 敏 阴 性物
、
，
验 证试验方 法 的 稳 定 性 和 重 复 性
，
：
＋
Ｔ
细 胞 数 量 比 例 与 溶剂 对照 组 相 比 显 着 增 多
。
ＣＤ 2
】
8
其中
：
戊 二 醛 组 与 2 巯 基 苯 并 噻 唑组 与 溶 剂 对 照 组 相 比 差 异 性 显 着
Ｂ ｒｄＵ ＥＬＩ Ｓ Ａ 方法
－
【
结 论 本 实 验室 成 功 建立 Ｌ ＬＮＡ
。
ＥＬ Ｉ Ｓ Ａ 法
，
检 测 小 鼠 的 血 液 生 化指 针 结 果 显 示
，
各 致敏 阳 性 组 小 鼠 血 清 中 的
；
Ｈ
ｉｓ 、
Ｉ
Ｌ 4
－
水平 均 增 加
－
Ｉ
Ｌ
－
2
无 明 显 变化
，
其中
Ｉ
Ｌ
－
4
水 平 显着 变 化
、
ＲＴ
－
Ｐ ＣＲ
结 果 显示
：
致 敏阳 性
组 小 鼠 脾 脏 中 Ｔ ｂ ｅ 基 因 表达 量 升 髙
。
，
可 以 选 用 ＥＬ
ＩＳ
Ａ试 剂 盒 检 测 血 清 中 Ｉ Ｌ
－
4
水 平 为 辅 助 指标
，
小 鼠 脾脏 中
基
因 表 达 量升 高
、
小 鼠 淋 巴 结 中 Ｔ 细 胞 数 量 与 Ｃ Ｄ 4 阳 性Ｔ 细 胞 数 量 比 例 增 多
。
表 明 了 皮 肤 过 敏 反应
是 由 Ｔ细 胞介 导 的 迟 发 型 变态 反 应
5
利 用 小 鼠 局 部 淋 巴 结 法 检 测 皮肤 过 敏 反 应 及 过 敏机 制 的研 究
王智 琴＼ 杨
（ 1
．
微
1
2
，
汪
7 0 0 4
；
岩＼
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王
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辽宁 千
一
生 物 技术 有 限 公 司 沈 阳
，
1
2
．
沈 阳 化工 研 究 院 安 全 评 价 中 心 沈 阳
1
应用
8
、
检 测 小 鼠 淋 巴 细 胞 悬液 中Leabharlann Baidu的 淋 巴 细 胞 亚 群 变 化 以 及 与 致敏 相 关 的 Ｃ Ｄ
。
5 4
、
ＣＤ 2
：
细 胞表 面 分 子 变 化 情 况
－
【
结果 】 成 功在 本 实 验 室 建立 了 稳 定
，
、
重 复性 好 的 ＬＬＮＡ
Ｂ ｒｄ Ｕ ＥＬＩ Ｓ Ａ方法
；
采 用 ＥＬ
ＩＳ
Ａ法 检 测 不
同 处 理 动 物 血清 中 组 胺
Ｉ
Ｌ
－
2
、
Ｉ
Ｌ
－
4
的 水平
，
应 用 荧光 定 量 Ｐ Ｃ Ｒ方法
，
检 测 测 试 动 物 脾脏致 敏 相
；
关基 因 流式 细 胞 术
ＣＤ 6
9
，
的 差 异表 达
研 究 小 鼠 脾脏 中 三 种 致敏 相 关 基 因 的 差 异 表 达
ｔ
其 中 丁 子 香 酚组
／
、
ａ
－
己 基 肉 桂 醛组
；
、
ＤＮ Ｃ Ｂ 组 的 增 加 量与
溶 剂对 照 组 相 比 差 异 性 显 着
小 鼠 淋 巴 结 中 ＣＤ 4
－
。
Ｚ＾ 但 ＣＴ
ｏｘ 基 因 ／ ｐ
的 表 达 量无 明 显 变 化
。
流 式 细 胞术 结 果 显 示
的 表 达量 均 增 多
关 键词
＊
1
，
：
小 鼠 局 部 淋 巴 结 试验
：
；
皮 肤过 敏 反应
；
ＥＬ ＩＳ Ａ
法
；
荧光 定 量 Ｐ Ｃ Ｒ
；
流式 细 胞术
责任 作 者
ｗｚ 7 6 2 6 ｑ
＠
1
2 6 ｃｏ ｍ
．
7 8
，
1
1
0 0 2
1
）
摘要
：
【
目
的 】 本 研 究拟 探 索 符合
－
“
3
Ｒ
”
原 则 的 临 床 前 药 物 皮 肤 致敏 试 验 的 替 代 方 法
）
，
，
根据
ＯＥ Ｃ Ｄ 指 导 原 则 ＬＬＮＡ Ｂ ｒｄ Ｕ ＥＬＩ Ｓ Ａ 法
：
（
4 4 2Ｂ
建 立敏感 度
法
、
、
准 确 率 高 并可 在 致 敏 诱 导 期 检
、
测 化 学 品 致敏 性 的 皮 肤致 敏试验 方 法
。
通 过Ｅ Ｌ
Ｉ
ＳＡ
荧 光 定 量Ｐ Ｃ Ｒ 法
流式 细 胞术观 察 致 敏
，
诱 导 期 小 鼠 血 清 生化 指 标
、
脾脏 中 致 敏基 因 以 及 引 流 淋 巴 结 淋 巴 细 胞膜 表面 分 子 的 变 化情 况
。
探 讨 在 致 敏 诱 导 期 检 测 致敏 性 的 机 制
【
材 料和 方法
硝基 氯苯
、
】
选 择 丁 子 香 酚 与 ａ 已 基 肉 桂 醛作 为 阳 性
－
致敏物
甘油
、
，
建 立 试 验方法
、
，
分 别 选择 2
，
4 二
－
2
－
巯 基苯 并 噻 唑
、
戊 二 醛 作 为 致 敏 阳 性物
；
，
氯 化钾
乙 醇 作 为 致 敏 阴 性物
、
，
验 证试验方 法 的 稳 定 性 和 重 复 性
，
：
＋
Ｔ
细 胞 数 量 比 例 与 溶剂 对照 组 相 比 显 着 增 多
。
ＣＤ 2
】
8
其中
：
戊 二 醛 组 与 2 巯 基 苯 并 噻 唑组 与 溶 剂 对 照 组 相 比 差 异 性 显 着
Ｂ ｒｄＵ ＥＬＩ Ｓ Ａ 方法
－
【
结 论 本 实 验室 成 功 建立 Ｌ ＬＮＡ
。
ＥＬ Ｉ Ｓ Ａ 法
，
检 测 小 鼠 的 血 液 生 化指 针 结 果 显 示
，
各 致敏 阳 性 组 小 鼠 血 清 中 的
；
Ｈ
ｉｓ 、
Ｉ
Ｌ 4
－
水平 均 增 加
－
Ｉ
Ｌ
－
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无 明 显 变化
，
其中
Ｉ
Ｌ
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4
水 平 显着 变 化
、
ＲＴ
－
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结 果 显示
：
致 敏阳 性
组 小 鼠 脾 脏 中 Ｔ ｂ ｅ 基 因 表达 量 升 髙
。
，
可 以 选 用 ＥＬ
ＩＳ
Ａ试 剂 盒 检 测 血 清 中 Ｉ Ｌ
－
4
水 平 为 辅 助 指标
，
小 鼠 脾脏 中
基
因 表 达 量升 高
、
小 鼠 淋 巴 结 中 Ｔ 细 胞 数 量 与 Ｃ Ｄ 4 阳 性Ｔ 细 胞 数 量 比 例 增 多
。
表 明 了 皮 肤 过 敏 反应
是 由 Ｔ细 胞介 导 的 迟 发 型 变态 反 应