学生姓名：
学号：
专业：应用化学
年级班级：12级C班
课程名称：现代仪器分析实验实验时间：2015年4月24日
0.02mo l/L KH2PO4溶液
的配制：磷酸二氢钾（KH2PO4，M=136）
将磷酸二氢钾溶液用蒸馏水稀释到1000ml的容量瓶中，是其浓度变为0.02mol／L，PH=2.75(用盐酸调节至PH为2.75)的 KH2PO4溶液。
计算：有公式m=cv*M=(0.02mol／L*1000ml/1000)*136
需要磷酸二氢钾的质量m=2.72g
苹果酸样品
的配制：将果实样品破碎除籽后研磨成粉状，之后准确称取1.000g样品，加入含0.008mol／L磷酸的蒸馏水25ml,在25摄氏度的水浴中震荡浸泡10min，然后在800r／min、4摄氏度的条件下离心20min，取上清液，用0.45pm的水系滤膜过滤后用与HPLC分析。
纯甲醇CH3OH(M=34)
2实验所得高效液相谱图：
高效液相图
特殊实验条件
泵B浓度95.0%（KH2PO4低浓度的缓冲盐）泵A浓度5.0%（纯甲醇）标准谱图
山西谱图山东谱图
甘肃谱图浓度
泵B浓度90.0%（KH2PO4低浓度的缓冲盐），泵A浓度10.0%（纯甲醇）高效液相图
特殊实验条件
标准图谱
山西谱图
山东图谱甘肃图谱
3苹果酸含量计算
实验1：实验2：
苹果产地：山西样品
称取量：
1.0903
g
容量瓶
体积：
25
ml
苹果
产地：
山西样品
称取量：
1.0903
g
容量瓶
体积：
25
ml
实验条件：流速为1ml/min，温度为 25℃, 用全波
分析, 采用0.02mol／L,PH=2.75(用盐
酸调节至PH为2.75)的 KH2PO4低浓度缓
冲盐，并加以适量的纯甲醇，限制最大压
力17.0MPa最小压力0.0MPa。
LC停止时间10min，PDA停止时间10min，
模式为二元高压梯度。
实
验
条
件：
流速为1ml/min，温度为 25℃, 用全波分
析, 采用0.02mol／L,PH=2.75(用盐酸调
节至PH为2.75)的 KH2PO4低浓度缓冲盐，
并加以适量的纯甲醇，限制最大压力
17.0MPa最小压力0.0MPa。
LC停止时间10min，PDA停止时间10min，
模式为二元高压梯度。
特殊实验条件：泵B浓度95.0%（KH2PO4低浓度的缓冲盐），
泵A浓度5.0%（纯甲醇）
特殊
实验
条件：
泵B浓度90.0%（KH2PO4低浓度的缓冲盐），
泵A浓度10.0%（纯甲醇）
苹果酸含量计算苹果酸含量计算
标准曲线：
由于峰往后移了，检测出来的含量为零。所以用保留时间5.604，峰面积为69562计算得出浓度为13.96ug/ml。
用外标法计算。函数为F(x)=4975.23*X+123.23
得X=13.96ug/ml
苹果酸含量为W苹果酸=CVM/m
=13.96*25*134/1.0903
=42892ug/g 标准曲线
正常出峰
在保留时间4.357，峰面积10835时测得苹果酸浓度为2.334ug/ml
用外标法计算
函数为F(X)=5123.99*X-1125.04
苹果酸含量为W苹果酸=CVM/m
=2.334*25*134/1.0903
=7171ug/g
实验1：实验2：
苹果产地：山东样品
称取量：
1.2084
g
容量瓶
体积：
25
ml
苹果
产地：
山东样品
称取量：
1.2084
g
容量瓶
体积：
25
ml
实验条件：流速为1ml/min，温度为 25℃, 用全波
分析, 采用0.02mol／L,PH=2.75(用盐
酸调节至PH为2.75)的 KH2PO4低浓度缓
冲盐，并加以适量的纯甲醇，限制最大压
力17.0MPa最小压力0.0MPa。
LC停止时间10min，PDA停止时间10min，
模式为二元高压梯度。
实
验
条
件：
流速为1ml/min，温度为 25℃, 用全波分
析, 采用0.02mol／L,PH=2.75(用盐酸调
节至PH为2.75)的 KH2PO4低浓度缓冲盐，
并加以适量的纯甲醇，限制最大压力
17.0MPa最小压力0.0MPa。
LC停止时间10min，PDA停止时间10min，
模式为二元高压梯度。
特殊实验条件：泵B浓度95.0%（KH2PO4低浓度的缓冲盐），
泵A浓度5.0%（纯甲醇）
特殊
实验
条件：
泵B浓度90.0%（KH2PO4低浓度的缓冲盐），
泵A浓度10.0%（纯甲醇）
苹果酸含量苹果酸含量
标准曲线：
由于峰往后移了，检测出来的含量为零。所以用保留时间5.593，峰面积为20080计算得出浓度为4.011ug/ml。
用外标法计算。函数为F(x)=4975.23*X+123.23
苹果酸含量为W苹果酸=CVM/m
=4.011*25*134/1.2084
=11120ug/g 标准曲线
正常出峰
在保留时间4.410，峰面积6672时测得苹果酸浓度为1.522ug/ml
用外标法计算
函数为F(X)=5123.99*X-1125.04
苹果酸含量为W苹果酸=CVM/m
=1.522*25*134/1.2084
=4219ug/g
实验1：实验2：
苹果产地：甘肃样品
称取量：
1.0123
g
容量瓶
体积：
25
ml
苹果
产地：
甘肃样品
称取量：
1.0123
g
容量瓶
体积：
25
ml
实验条件：流速为1ml/min，温度为 25℃, 用全波
分析, 采用0.02mol／L,PH=2.75(用盐酸
调节至PH为2.75)的 KH2PO4低浓度缓冲
盐，并加以适量的纯甲醇，限制最大压力
17.0MPa最小压力0.0MPa。
LC停止时间10min，PDA停止时间10min，
模式为二元高压梯度。
实
验
条
件：
流速为1ml/min，温度为 25℃, 用全波分
析, 采用0.02mol／L,PH=2.75(用盐酸调
节至PH为2.75)的 KH2PO4低浓度缓冲盐，
并加以适量的纯甲醇，限制最大压力
17.0MPa最小压力0.0MPa。
LC停止时间10min，PDA停止时间10min，
模式为二元高压梯度。
特殊实验条件：泵B浓度95.0%（KH2PO4低浓度的缓冲盐），
泵A浓度5.0%（纯甲醇）
特殊
实验
条件：
泵B浓度90.0%（KH2PO4低浓度的缓冲盐），
泵A浓度10.0%（纯甲醇）
苹果酸含量苹果酸含量
标准曲线：
由于峰往后移了，检测出来的含量为零。所以用保留时间5.599，峰面积为69577计算得出浓度为13.36ug/ml。
用外标法计算。函数为F(x)=4975.23*X+123.23
苹果酸含量为W苹果酸=CVM/m
=13.36*25*134/1.0123
=44874ug/g 标准曲线
正常出峰
在保留时间4.410，峰面积5657时测得苹果酸浓度为1.324ug/ml
用外标法计算
函数为F(X)=5123.99*X-1125.04
苹果酸含量为W苹果酸=CVM/m
=1.324*25*134/1.0123
=4381ug/g
苹果中总酸的测定 实验原理：苹果中的有机酸，用酸碱滴定，被中和生成盐类。 RCOOH+NaOH==RCOONa+H2 一、试剂：1、氢氧化钠标准溶液的配制与标定 在粗天平上称取固体氢氧化钠1克，加蒸馏水溶解并稀释至250毫升，摇匀，备用。 在分析天平上准确与105-110℃至恒重的邻苯二甲酸氢钾0.3-0.5克于250毫升的锥形瓶中，加蒸馏水100毫升溶解，加两滴酚酞指示剂，用配用的氢氧化钠标准溶液滴定至溶液呈微红色，同时做空白试验。 C（NaOH）=m/【（V-V o）*0.2042】 式中;C(NaOH)---氢氧化钠标准溶液的物质的量浓度，mol/L V o---空白试验氢氧化钠标准溶液的用量，ml M---邻苯二甲酸氢钾的质量，g 0.2042---邻苯二甲酸氢钾的摩尔质量，Kg/mol 2、酚酞指示剂（10g/L) 二、测定方法： 将苹果洗净，取可使用部分切碎，加等量水打碎，与粗天平上称取50g，移入250毫升容量瓶中，约2/3的蒸馏水，摇匀，与75-80℃水浴中浸提30分钟，冷却至室温加水定容到刻度，摇匀，过滤。 用吸管吸取滤液50毫升于250毫升锥形瓶中加2滴酚酞指示剂，用氢氧化钠标准溶液滴定至溶液呈微红色。
三、计算： 总酸（以苹果酸计）%=C*V*0.067*20 式中：C--氢氧化钠标准溶液的物质的量浓度，mol/L V---氢氧化钠标准溶液的用量，ml 0.067---苹果酸的系数。 四、说明： 1、平行试验结果容许差为0.5% 2、酸度包括总酸（可滴定酸度），有效酸（氢离子活度，即PH值）和挥发酸。总酸是指所有酸性成分的总量，通常用碱液来滴定，并以样品中所含主要酸的百分数表示。
烟草中草酸、苹果酸、柠檬酸和高级脂肪酸类物质的测定方法1.原理 利用在酸性条件下的酯化反应和置换反应，使有机酸全部转变成甲酯类化合物，然后用二氯甲烷萃取、离心分离，利用GC/FID进行定量分析检测其中7种有机酸的含量。 2.实验 2.1.试剂和仪器 （1）试剂 浓硫酸（分析纯），甲醇（分析纯），二氯甲烷（分析纯）。 （2）仪器 12ml试管（带旋盖）；气相色谱仪（带FID检测器）；旋转震荡仪；离心机（3000转/分钟）；分析天平（感量0.1mg）。 （3）标准品 己二酸（内标），草酸，苹果酸，柠檬酸，棕榈酸甲酯，亚油酸甲酯，油酸甲酯，硬脂酸甲酯。 注：15ml玻璃试管应配备相适应的盖子，同时盖子应垫上表层有聚四氟乙烯的橡胶垫。当橡胶垫有损坏、拱起的情况时，应及时更换新的橡胶垫。 2.2实验方法 2.2.1溶液配制 （1）10%硫酸-甲醇溶液 在冰冷却和搅拌条件下，将50ml浓硫酸缓慢加入450ml甲醇中，摇匀。 （2）己二酸内标液 准确称取1.000g己二酸，加入100ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度。 （3）标准溶液 按下表所示准确称取标样于100ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度。 标准溶液组成（单位：mg） 注：在计算过程中按分子式及其相应的相对物质的量由高级脂肪酸甲酯的值换算成高级脂肪酸的实际值。
分别取25、50、100、200、500μL标准溶液加入15ml试管中，按2.2.2所述甲酯化程序对其进行甲酯化后，进行GC/FID分析。根据保留时间定性、内标法定量原理得到各种酸的回归方程。 2.2.2 样品处理 准确称取100mg烟末置于15ml试管中，加入2ml 10%硫酸-甲醇溶液和100μL己二酸内标液，旋紧旋盖，震荡5min，室温放置过夜（24h±2h）,进行甲酯化反应。然后加入4ml 去离子水，4ml二氯甲烷，旋紧旋盖，震振荡萃取5min后离心（3000转/分钟，离心5min），取下层清夜进行GC分析。每个样品应平行测定两次。 2.2.3 GC分析条件 毛细管柱：DB-5（30m*0.32mm*0.25μm）; 进样量：1μL，不分流； 进样口温度：280℃； 载气：He，恒流，1.7ml/min； 程序升温：40℃下保持5min，然后以5℃/min的速率升至260℃，保持5min； 检测器：FID； 检测器温度：300℃ 3结果的计算与表述 由气相色谱校正曲线计算出7种非挥发有机酸和高级脂肪酸的量W（mg），每个样品中7种有机酸的含量由公式1得出，取两个平行样品的算数平均值作为测试结果，以每克烟草或烟草制品中含有的有机酸的毫克数来表示，结果精确到0.01mg。 公式1：样品中有机酸的含量（mg/g）=W/G G为样品的重量（g） 精密度：两次平行的相对偏差不应大于10.0%
DL －苹果酸检测方法介绍 ——科标检测 OH O OH HO O C 4H 6O 5 科标检测拥有全面的光谱、色谱、质谱、热学、生物培养实验室等国内外最先进的现代分析检测仪器设备，可以根据客户的需求，根据相关标准，制定专业的技术解决方法，提供一站式专业检测服务，以下是根据《中国药典》中苹果酸检测方法介绍： 【性状】本品为白色结晶性粉末；无臭，无 味。 本品在水和乙醇中易溶，在丙酮中微溶。 熔点 本品的熔点（中国药典2005年版二部附录VI C ）为 128℃～132℃。 【鉴别】（1） 取本品约0.5g ，加水10ml 使溶解，用氨水调pH 值至中性，加1%对氨基苯磺酸溶液1ml ，在沸水浴中加热5分钟，加20%亚硝酸钠溶液5ml ，置水浴中加热3分钟，加4%氢氧化钠溶液5ml ，溶液应立即呈红色。 （2）本品的红外光吸收图谱应与DL －苹果酸对照品的图谱一致（中国药典2005年版二部附录Ⅳ C ）。 【检查】 比旋度 取本品，精密称定，加水溶解并稀释制成每1ml 中含0.2g 的溶液，依法测定（中国药典2005年版二部附录VI E ），比旋度为－0.10︒～＋0.10︒。 有关物质 照高效液相色谱法（中国药典2005年版二部附录V D ）测定。 色谱条件与系统适用性试验 用磺酸基阳离子交换树脂为填充剂，以0.005mol/L 硫酸溶液为流动相；检测波长为210nm ；柱温为 37℃；取富马酸、马来酸、DL-苹果酸对照品适量，加流动相溶解并稀释制成每1ml 中约含富马酸10µg，马来酸4µg，DL －苹果酸1mg 的溶液，作为系统适用性溶液，精密量取20µl，注入液相色谱仪，理论板数按DL －苹果酸峰计算不低于2000，富马酸和马来酸
生物仪器分析课程实验报告 姓名： 开课时间：2016－2017学年第 2学期 授课教师：
一、实验目的 1、了解液相色谱仪的基本原理、结构及使用注意事项。 2、掌握液相色谱的操作方法。 二、实验原理 高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography,简称HPLC）又叫做高压或高速液相色谱，是色谱法的一个重要分支。它是用高压输液泵将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，经进样阀注入待测样品，由流动相带入柱内，在柱内各成分被分离后，依次进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。 果汁中含有多种有机酸，苹果酸和柠檬酸是果汁中重要的有机酸。样品经离心及过滤后，直接注入反相液相色谱体系，以磷酸二氢铵为流动相，经分离后采用紫外检测器在210nm处外标法定量分析。 三、实验简要步骤（最好以流程图形式表达） 1、标准溶液的配制：分别准确称取100mg苹果酸及柠檬酸标准标准品并用超纯水定容至100mL，配制成1000mg/L的贮备液。然后分别吸取上述溶液2mL、4mL、8mL、10mL定容到10mL（相当于浓度200mg/L、400mg/L、800mg/L、1000mg/L），配制标准品混合溶液； 2、样品的处理：将样品经0.45μm水相微孔滤膜过滤后备用； 3、流动相的配制及过膜：0.05mol/L磷酸二氢铵溶液（磷酸调节至pH=2.5）配制，并过膜，脱气； 4、高相液相色谱仪操作流程： 1）开机顺序：
点击电脑图标，听到哔哔两声则说明仪器和LCsolution工作站已连接上。（关机顺序完全相反） 2）柱平衡 排气（Purge）：使用前按A泵、B泵和进样器的Purge键进行自动排气排杂。
苹果酸规定 苹果酸规定主要是针对食品行业中苹果酸的使用进行规范，以确保食品安全和质量。苹果酸是一种天然有机酸，广泛用于食品工业中作为酸味剂和酸化剂，常见于饮料、果汁、食品调味品等。下面是一份针对苹果酸使用的规定： 一、苹果酸的纯度要求 1. 苹果酸的纯度不低于99%。 2. 不得混有其他酸类物质，如柠檬酸等。 二、苹果酸的外观要求 1. 苹果酸应为白色结晶粉末状，无色斑、杂质等。 2. 不得有异味和异色。 三、苹果酸的理化指标 1. pH值：苹果酸溶液pH值应在 2.0- 3.5之间。 2. 水溶性：苹果酸应在20℃下完全溶解于水中。 四、苹果酸的微生物指标 1. 总大肠菌群不得超过100个/克。 2. 霉菌和酵母菌不得超过10个/克。 3. 没有大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌等致病菌。 五、苹果酸的食品添加剂使用标准 1. 苹果酸的添加量应符合国家相关标准，不得超过规定的最大使用限量。 2. 添加苹果酸的食品应符合国家食品安全标准，不得超过对应
食品类别的最大添加量。 六、苹果酸的储存和包装要求 1. 苹果酸应储存在干燥、通风、阴凉的环境中，远离火源和有害气体。 2. 避免阳光直射，防潮、防尘。 3. 包装应符合国家标准，使用符合卫生要求的食品级包装材料。 七、苹果酸的标签要求 1. 标签上应标明产品的名称、纯度、生产日期、批号、储存条件和使用方法等。 2. 生产企业的名称、地址和联系方式也应标明在标签上。 以上是对苹果酸使用的规定，食品生产企业和销售商在使用和销售苹果酸时应严格遵守相关规定，加强品质管理，确保产品的安全性和合法性。同时，监管部门也应加强对苹果酸的抽检和监督，及时处理违法违规行为，维护消费者的权益和食品市场的秩序。 虽然苹果酸对人体基本无毒，但滥用和不合格的使用可能对健康造成不良影响。因此，各相关方应共同关注苹果酸的使用和管理，促进食品行业的健康发展。
实验水果、蔬菜中总酸的测定 （学号：030212011031，030212011026 李欣钰和郎琳） 【实验目的】 1、利用标准液滴定水果蔬菜，测定不同水果蔬菜中总酸度 2、练习利用滴定管滴定溶液 3、练习移液管的使用 4、练习pH计的使用 【实验原理】 1、水果和蔬菜中含有各种不同的有机酸，主要为苹果酸，柠檬酸，酒石酸，草酸等。果树的种类不同，含有机酸的种类和数量也不同。果汁或菜汁的酸性取决于游离态的酸或酸式盐的存在数量。这些算都是有机弱酸，所以在测定时，有氢氧化钠标准溶液滴定就能测出酸度。这样测得的数据是总酸度，包含了未离解酸和已离解酸的浓度。用下式计算： 总酸度（%）=（V 样/W 样 ）x（V NaOH xc NaOH x折算系数/V取样）x100 式子中V样为样品稀释总体积；V取样为滴定时取样体积；W样为样品的质量。折算系数为不同有机酸的毫摩尔质量 2、食品中的总算度往往根据算韩算的不同，而取其中某种主要有机酸计量。食品中常见的有机酸及其毫摩尔质量折算系数如下 苹果酸——0.067（苹果，梨，西红柿） 酒石酸——0.075(葡萄) 柠檬酸——0.090(柑橘类) 【仪器试剂】 烧杯（100ml）(3-5只)，洗耳球，移液管（25ml）,容量瓶（250ml）（3只），滤纸，铁架台，滴定管夹，碱式滴定管，玻璃棒，胶头滴管，电子天平，研钵，酚酞指示剂，NaOH标准溶液（约为0.2mol/l），西红柿，葡萄，橘子（自备），塑料袋若干（自备），小刀（自备） 【实验内容】 1．准确称取混合均匀磨碎的样品10g 2.转移到250ml容量瓶中，加纯水至刻度线，摇匀 3.吸取50ml溶液于锥形瓶中，加入两滴酚酞试剂 4.用NaOH标准溶液滴定溶液至淡红色，并且在30s内不退色，即到达终点。 5.记下所用的NaOH体积。重复测定三次取平均值。 6.利用同样的方法测定剩余的两种水果或蔬菜。并记录实验数据 7.用pH计测出样品稀释液的pH 8.处理实验数据，比较所测的西红柿，葡萄，橘子的总酸度的不同
苹果酸、柠檬酸含量的测定（HPLC 法） 苹果酸、柠檬酸在酸性缓冲液中，利用反相键合色谱法将其从样品基质中别离出来，根 据该类物质在紫外 波长下的吸收进行定性和定量分析。 1）溶剂：水，过滤后的二次蒸储水 2）流动相：0.5%的H3P04/KH2Po4缓冲液,PH=2.81,含2.5%乙月青 3）苹果酸、柠檬酸标准品；纯度99.2%和99.5% 4）苹果酸、柠檬酸标准溶液 分别准确称取苹果酸、柠檬酸标准品0.2g 和0.02g ,精确至0.0001g,用过滤后的二次 蒸储水将标准品溶解，转移、定容于50ml 容量瓶中，混匀后贴标签备用。 5）苹果酸、柠檬酸标准工作溶液 分别将上述标准品贮备液以5倍和10倍比例稀释，得到三个不同浓度的系列，在给定的 色 谱条件下，每一浓度样品进样三次，然后绘制出标准工作曲线。 标准溶液应避光，在。〜4℃下贮存，标准液贮存期不超过二个月。 所使用的玻璃仪器必须是洁净的。 3.1 液相色谱： 单元泵，可变波长检测器，化学工作站。 3.2 色谱柱: ODS 反相柱 150mm * 4.6mm （ID ）.5um 填充颗粒。 3.3 进样器：20ul 微量进样针 3.4 色谱条件：流动相:0.5%H3PO4/KH2PO4缓冲液（PH=2.81）；含0.025%乙月青。 流量：l.Oml/min 柱温：40℃ 检测波长：206nm 进样量：5ul 保存时间:苹果酸2.5min ；柠檬酸3.5min 以上条件是典型条件，可根据情况对给定参数作适当调整，以确保方法的稳定性和耐用 性。 4.1 样品溶液的制备 称取浓缩果汁4.0〜 5.0g 或清汁10ml,精确至0.01g,用二次蒸偏水将其溶于50ML 容量 瓶中， 定容至刻度，混匀后，用0.45um 滤膜的过滤器将其过滤至样品瓶中，贴上标签备 用。 4.2 测定：在以上色谱条件下，运行仪器和测试方法，待基线稳定后，按照标准溶液、样 品 的顺序进样。 4.3 计算 根据标准液绘制的标准曲线进行外标法定量，保存时间和响应因子均由标准液确定。 两次平 行测定结果之差，相对偏差SO%。 网友评论： 1）这个方法，能将苹果酸跟水果中其他物质的杂峰分开吗？ 2）我用此体系KH2P04+甲醇，柠檬酸做的和配料表不一样，还没时间找原因？不过，感觉你的出峰快!1）原理 2）试剂 3）仪器 4）测定步 骤 5）允许差
反相高效液相色谱法测定苹果酸发酵液中的有机酸 黄慧敏;张伟国 【摘要】Reversed phase HPLC method was applied to determine organic acid in malic acid fermentation liquor in this paper. The chromatographic conditions are finally conformed to apply to all kinds of organic acid content deter-mination in the fermentation. The conditions are as follows：COSMOSIL 5C18 - PAQ column （4.6 mm I.D. × 250 mm） was used at 23℃. UV detection wavelength was 210 nm. Solution containing 1% acetonitrile and 20mmol/L KH2PO4 at pH 2.8 was used as mobile phase with flow rate of 0.5 mL/min. The seven organic acids in malic acid fermentation liquor were preferably separated under these conditions. The recovery ratio was 94.2% - 102.7% and the method had good accuracy and precision.%采用反相高效液相色谱法分析测定苹果酸发酵液中的有机酸，最终确 定了适用于发酵液中各种有机酸含量测定的色谱条件，色谱柱：COSMOSIL 5C18-PAQ（4．6mmI．D．×250mm）；紫外检测波长：210nm；流动相：1％乙腈-20mmol／L KH2PO4溶液（pH2．8）；流速：O．5mL／min；柱温：23℃。结果表明，在该条件下苹果酸发酵液中的7种有机酸都得到了较好分离， 方法的回收率为94．2％-102．7％，表明具有较好的准确度和精密度。 【期刊名称】《食品与发酵工业》 【年(卷),期】2012(038)005 【总页数】5页(P180-184)
怎样做葡萄酒苹果酸测定 一，原理： 龟兔赛跑的故事大家都听说过，纸层析苹果酸测定就是葡萄酒中酸的“龟兔赛跑”。 想把一大群龟兔分开，最好的办法就是举行赛跑比赛。 枪响！大群兔子跑开了，龟都落在了起点附近。 假如加入一群犬，犬比兔子还快，会跑得更远。 层析中，葡萄酒中的酒石酸就是龟，苹果酸就是兔子，乳酸琥珀酸就是犬。 犬比兔子跑得快，但也快不多，要想分的开一点，就要延长比赛时间和距离。层析也一样，纸长一点（30厘米左右），展开时间也长一点（4-6小时），酸才能分得开。 层析过程好似赛跑过程。 比喻是为了理解，并不一定精准。 二，材料准备； 1，高30公分的层析缸；（见图） 如果没有现成的，自制可用5毫米厚的玻璃，裁成31厘米长、13厘米宽的4块做成方形筒体，14厘米*14厘米大的一块做底板。用玻璃胶粘结。再在口部粘两块可以挂层析纸的凹槽板就可
以了。（见下图） 2，展开剂；买正丁醇一瓶（500毫升，参考价15元），冰乙酸一瓶（500毫升，参考价18元），溴酚蓝一瓶（25克参考价29元）和苹果酸一瓶（100克参考价15元）。 按溴酚蓝0.1克、正丁醇100毫升、乙酸50毫升配好溶液备用。 3，苹果酸标准液按蒸馏水100毫升，苹果酸0.5克配方备用。 4，滤纸：买60厘米*60厘米的普通滤纸（参考价1-2元一张），裁成30厘米长，宽度按瓶的口径或实际需要剪裁。这种未经酸化的普通滤纸斑点拖尾会比较长，会影响图的质量。见下图：未经酸化的滤纸苹果酸斑点长达10厘米
经过酸化后，斑点缩减至4厘米
滤纸买来后，可以先用苹果酸试一下展开，如果展开剂里展开5.5小时，其斑点长度在6厘米左右，则不必进行酸化处理，因为酸化比较麻烦，特别是丙酮受控制不太好买。有时碰巧买到质量比较好的滤纸就可以省却酸化这一步。