小鼠精子畸形实验

操作步骤
固定：干燥，甲醇固定５分钟（ 固定：干燥，甲醇固定５分钟（可以直 接涂片镜检） 接涂片镜检） 染色：用２％伊红染色１小时，冲洗 染色： 伊红染色１小时， 镜检：干燥镜检（先用低倍镜， 镜检：干燥镜检（先用低倍镜，再用高 倍镜，在较暗的视野下观察） 倍镜，在较暗的视野下观察）
观察Fra Baidu bibliotek计数
首先，在低倍镜下选择背景清 晰、精子分布均匀、重叠较少的区 域，然后，在高倍镜下观察结构完 整的1000个精子，计数其中畸形的 精子。
注意事项
处于精母细胞阶段的生精细胞对诱变剂较 敏感，因此在染毒后3～5周时精子畸形率 最高，必要时可作动态观察有助于全面评 价； 缺血、感染、发热等可产生假阳性结果；
各组小鼠精子畸形检测结果
组别 动物数 / 只 5 5 5 5 5 受检精子数/ 受检精子数 个 5000 5000 5000 5000 5000 畸形精子总数/ 畸形精子总数 个 51 187 259 153 69 精子畸形率 /％ ％ 1.02 3.74* 5.18* 3.06* 1.38
小鼠精子畸形实验
Sperm Abnormality Test in Mouse
•遗传学终点（genetic endpoint）：遗传学实验观察到的 现象所反应的各种事件。 •遗传学终点分类：共4类 4 1）基因突变； 3）染色体组畸变； 2）染色体畸变； DNA损伤 4）DNA DNA
1、基因突变检测 Ames试验、果蝇伴性隐性致死试验、正向基 Ames 因突变试验 2、染色体损伤检测 染色体畸变分析、微核试验、显性致死试验 3、DNA损伤检测 DNA SCE试验、UDS SCE UDS试验、SCGE SCGE试验 UDS SCGE
器材与试剂
器材：显微镜；镊子；剪刀；平皿 试剂：生理盐水；无水乙醇；2%伊红水 溶液
试验设计
1、试验动物：采用6～8周龄性成熟雄性小鼠 、试验动物：采用 ～ 周龄性成熟雄性小鼠
2、接毒剂量及分组：受试物设高、中、低三 、接毒剂量及分组：受试物设高、 个剂量组，同时设阴性和阳性对照组。 个剂量组，同时设阴性和阳性对照组。
试验设计
受试物高剂量组的总剂量应能使部分 动物死亡，然后以1/5或 递减为中、 动物死亡，然后以 或1/10递减为中、低 递减为中 剂量组。 剂量组。 阳性对照组用环磷酰胺20 阳性对照组用环磷酰胺 mg/kg，腹 ， 腔注射，连续５ 每天一次。 腔注射，连续５天，每天一次。
操作步骤
处死动物：用颈椎脱法处死小鼠， 处死动物：用颈椎脱法处死小鼠，剪开腹 腔，取出两侧附睾 过滤：放入盛有约１ml生理盐水的平皿中， 生理盐水的平皿中， 过滤：放入盛有约１ 生理盐水的平皿中 用眼科剪剪碎附睾，四层擦镜纸过滤 用眼科剪剪碎附睾， 涂片： 涂片：取１小滴滤液涂片
目的
观察精子在生成过程中形态的改 变来检查受试物对雄性生殖细胞的 致突变作用. 致突变作用.
原理
精子的成熟和正常形态受多种基因控制， 当这些基因中任何一个在化合物的作用下 发生突变，就会导致畸形率增高。 某些特殊的染色体重排，如性-常染色体 易位是精子产生畸形的主要机理。但是， 缺血、变态反应、感染和体温升高也可能 导致精子的畸形。
正常组 损伤对照组 高剂量组 中剂量组 低剂量组
正常精子
香蕉形
胖 头 畸 形
双 尾 畸 形
精子畸形主要表现在头部。按Wyrobeks 的分类标准，主要类型有：无钩、香蕉形、 无定形、胖头、尾折叠、双头及双尾。 无尾精子、头部重叠的或整个与另一个 重叠的精子均不计数。 判断双头、双尾精子时，要注意与两条 精子的部分重叠相区别
注意事项
辨别小鼠附睾； 如将精子悬液经过滤、离心等步骤除去组 织残渣后再推片效果更好，注意推片的质 量； 镜检时注意鉴别制片过程中人为造成的精 子损伤。