实验大鼠常见脏器形态学取材方法和注意事项
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实验大鼠常见脏器形态学取材方法和注意事项
[取材内容]
大鼠肺组织、大鼠肝脏组织、大鼠胰腺组织、大鼠胃部组织、大鼠空场回肠组织、大鼠肾组织、门静脉血、淋巴组织、大鼠心脏。
[试剂及药品]
戊巴比妥钠或10%水合氯醛、75%酒精、生理盐水、多聚甲醛或福尔马林液、3戊二醛磷酸
盐缓冲液LP 或4戊二醛、肝素钠、器械液器械清洗消毒液
[器材]
备皮刀、解剖台、弯盘、组织剪、眼科剪、手术刀柄、刀片、小号弯式血管钳、蚊式血管钳、
眼科镊、无损伤血管夹、聚乙烯管、三通管、丝线、培养皿、天平、一次性离2ml、、冻存管、肝素锂真空采血管、微量移液器、高速离心机、注射器
10ml、5ml、
2ml、无菌手套、冰箱、冰盒、液氮罐
[取材动物]
大鼠
[取材步骤]
1. 取材前夜禁食，自由饮水。
2. 小鼠称重，按照50mg/kg的比例用5ml的注射器配合针头抽取戊巴比妥钠备用。
3. 正左手的小指和无名指抓住大鼠的尾巴，另外三个手指抓住大鼠的颈部，使大鼠头部向向下。这样腹腔中的器官就会自然倒向胸部，防止注射器刺入时损伤大肠、小肠等器官。右手持注射器，从腹部近腿根处刺入后再腹部皮下穿行深入，动作轻柔，缓慢注射。注射完药物后，缓缓拔出针头，手指按住针口对小鼠腹部轻柔按摩，促进麻醉药物的吸收，掐小鼠尾部检测小鼠麻醉程度。
4.将小鼠四肢固定于解剖台上，暴露小鼠整个胸部和腹部，修剪去腹部毛发，75%酒精消毒。
5.沿腹侧正中线自阴茎上源由下而上剪开腹部皮肤直至剑突，向两侧钝性剥开皮肤与皮下组织，暴露腹壁浅肌层。沿白线钝性分离腹壁肌肉，剪开腹膜，暴露腹腔，将肝脏向上翻起，显露肝门。
6.门静脉血采集：将剪成斜口的聚乙烯管尖端背向肝门方向插入门静脉，抽取门静脉血2ml，无创血管夹夹闭门静脉止血。将抽取门静脉血加入一次性离心管低温静置过夜，4℃离心，3000-3500/min，10分钟，吸出上清液，分装，-80摄氏度保存备用。
7.肝脏取材：结扎剪断肝门管道系统，钝锐结合完整取出大鼠肝脏，放置于无菌培养皿，生理盐水冲洗，称重并记录。①切取肝左叶约1mm×1mm×1mm组织3块，3-戊二醛磷酸盐缓冲液LP 或4-戊二醛固定；②左叶肝组织浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定；③右叶肝组织称重记录分装后全部放置于无菌冻存管液氮冰冻保存备用。
8.胰腺取材：把胃与脾之间的薄膜除去，可见到在其下方有如树枝状的肉色组织分为左、右两叶，钝锐结合整体取下胰腺组织及脾脏组织，结扎止血。胰腺放置于盛有无菌生理盐水的培养皿中涮洗去血迹。①切取胰腺体部约1mm×1mm ×1mm组织3块。3-戊二醛磷酸盐缓冲液LP 或4-戊二醛固定；2.胰腺体部相邻部位组织浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定；③其余组织全部液氮冰冻保存备用。生理盐水冲洗操作器械。
9.脾脏取材：剔除脾周组织，放置脾脏于盛有无菌生理盐水的培养皿中涮洗去血迹。①从脾脏一端切取5×5mm脾组织浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定；
②继续切取脾约1mm×1mm×1mm组织3块，3-戊二醛磷酸盐缓冲液LP 或4-戊二醛固定；③其余组织液氮冰冻保存备用。
10.心脏取材：从剑突继续向上剪开皮肤自颌下，向两侧钝性剥开皮肤与皮下组织，暴露胸廓及颈浅肌层。沿正中剪开胸廓、胸膜，避免损伤胸腺的胸腔脏器。暴露心脏，找到主动脉弓，夹住主动脉，剪断动脉，①从心脏一端切取5×5mm脾组织浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定；②继续切取心脏约1mm×1mm×1mm组织3块，3-戊二醛磷酸盐缓冲液LP 或4-戊二醛固定；③其余组织液氮冰冻保存备用。
11.淋巴组织取材：展开肠系膜，于肠系膜根部寻找淡蓝色结节样淋巴结组织，剔取肠系膜淋巴结数枚，放置于盛有无菌生理盐水的培养皿中涮洗去血迹。①取部分淋巴结组织浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定；②其余组织放置于无菌冻存管，液氮冰冻保存备用。上端于贲门上端结扎食管，下端于直肠远端结扎直肠末端钝锐结合完整取下胃肠道。
12.胃组织取材：离断胃放置于无菌培养皿残端结扎。①沿胃大弯剖开，生理盐水洗涤，切取约1mm×1mm×1mm胃窦和胃体黏膜组织各3块，3-戊二醛磷酸盐缓冲液LP 或4-戊二醛固定；②剪取宽约包含胃窦、胃体组织1条，浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定；③其余胃组织放置于无菌冻存管，液氮冰冻保存备用。
13.空回肠取材：①treitz韧带10cm处切取空肠10cm距回盲部10cm处切取回肠10cm，生理盐水洗涤，距切取约1mm×1mm×1mm空肠和回肠黏膜组织各3块，3-戊二醛磷酸盐缓冲液LP 或4-戊二醛固定；②剪取宽约包含全层的空肠和回肠组织各1条，做标记，浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定；③其余空肠和回肠组织全部放置于无菌冻存管液氮冰冻保存备用。
14.肾脏取材：于腹膜外腰部脊柱两侧寻找到肾脏，表面光滑、背腹略扁呈蚕豆形。剪开后腹膜，结扎剪断双侧肾门，钝锐结合，取下双侧肾脏，剔除肾周筋膜组织，放置于盛有无菌生理盐水的培养皿中涮洗去血迹。①于中间肾门部横行切开左侧肾脏，切取上端肾脏1mm×1mm×1mm组织3块。3-戊二醛磷酸盐缓冲液LP 或4-戊二醛固定；②下端脾脏浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定；
③右侧肾脏放置于无菌冻存管，液氮冰冻保存备用。
15.肺组织取材：整体取下大鼠肺组织，剪开分离双侧肺脏置于盛有无菌生理盐水的培养皿中涮洗去血迹。①切取左肺1mm×1mm×1mm组织3块，3-戊二醛磷酸盐缓冲液LP 或4-戊二醛固定；②余左肺浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定，冻存管，液氮冰冻保存备用。
16.各取样标本细致编号登记。
17. 大鼠废弃尸体处理。
[注意事项]
1. 戊巴比妥钠，配成1%生理盐水溶液，平均每只大鼠用量，左右。
2. 大鼠腹腔注射可以大鼠腹腔注射的给药容积一般为5-10ml/kg。
3. 完整取下胃肠道后已将肠系膜撕碎,不易寻找肠系膜淋巴结,所以先取淋巴结。取下胃肠道,由专人操作,取胃肠道及胃肠道取下后取材的操作器械单用一套。
4.取材时三人同时操作取一只大鼠,结合取材方案,多脏器并行取材缩短取材时间。
1、解剖后应迅速将脏器称重，以免水分蒸发造成差异。
2、脏器称重前应尽量将周围脂肪组织和结缔组织剔除，并用滤纸吸去脏器
表面血液及体液，特别是肾上腺、甲状腺、前列腺等较小的器官，更要新鲜称重，防止器官干燥失水而重量减轻。
3、空腔器官称重前，应清除其腔内液体，如心脏应除去血块。
