风疹病毒IgG抗体检测操作规程
一、检测目的
规范风疹病毒IgG抗体的检测实验，以保证检测结果的准确性和重复性。
二、检测方法
采用酶联免疫吸附法（ELISA)检测IgG抗体。
三、检测原理
采用基因工程表达的重组RV抗原包被反应板，酶标记的鼠抗人IgG为示踪物，四甲基联苯胺显色系统，ELISA间接法检测人血清或血浆中的风疹病毒IgG抗体。
四、实验条件
（1）实验室应具有空调、离心机、加样器、水浴锅，酶标仪等设备。
（2）检验人员应经过操作前培训。
（3）用酶标仪测定。
五、操作程序
（1）样本采集。无抗凝静脉血2ml，当日不做的标本4℃保存，必要时，-20℃冻存。
（2）操作步骤。
○1平衡：将试剂盒从冷藏环境中取出，置室温平衡30分钟后使用。
○2配液：将浓缩洗液用蒸馏水或去离子水20倍稀释，摇匀备用。
○3稀释待测血清：将待测血清分别用标本稀释液稀释作1：101稀释（1ul 血清加入100ul标本稀释液或者5ul血清加500ul标本稀释液），混匀。
○4加样：预留一个空白孔，不加任何液体（每次实验设1孔阴性对照、1孔阳性对照及2孔Cut-off值对照）将阴、阳性对照及Cut-off值对照各取100ul/孔加入反应孔内，稀释好的待测血清各取100ul加入反应孔内。
○5温育：在反应板上加盖封板膜，置37℃温箱或水浴锅中，反应60分钟。
○6洗板：甩去孔内液体，用洗液加满各孔，静止30秒，甩去板内液体，如此反复洗板5次，最后在吸水纸上拍干。
○7加酶：每孔加入酶结合物100ul。
○8温育：加盖封板膜，置于37℃反应30分钟。
○9洗板：同操作步骤○6。
○10显色：每孔依次加入底物液A、B各50ul，振荡混匀，37℃避光反应15分钟。
○11终止：每孔加入终止液50ul，振荡混匀。
六、参考值：○1采用酶联仪（波长450/630nm或450nm)测定各孔OD值。（结果须在终止反应后30分钟内测定完毕）。○2临界值（Cut-off）=两孔Cut-off对照OD 值的均值。
检验结果的解释：
○1测定标本OD值<临界值时为RV-IgG抗体阴性；
○2测定标本OD值≥临界值时为RV-IgG抗体阳性。
七、质量控制
阳性对照OD值应≥1.00，阴性对照OD值≤0.05，Cut-off对照OD值≥0.16，否则实验结果无效，应重新试验。
八、临床意义
风疹病毒可由感染者的分泌物经呼吸道传播给易感人群。抗风疹病毒IgM抗体在发病2--5天即可测出，6--25天检出率可达高峰，常用于风疹急性期或新近感染的诊断。抗风疹病毒IgG抗体用既往感染，一般在感染后2--3周血清中出现抗风疹病毒IgG抗体，6个月达高峰，并且阳性结果可持续数年。孕妇在妊娠开始4个月内感染风疹病毒，易引起流产、死胎、早产、胎儿宫内发育迟缓、神经发育畸形。同时，病毒可通过胎盘感染胎儿，引起先天性风疹综合征（CRS），导致胎儿器官缺陷或畸形，如新生儿先天性白内障、先天性心脏病、先天性耳聋等。RuV-IgG、RuV-IgM 用于对早孕妇女产前筛查和监测十分必要。
鉴于技术上的原因和生物学上的交叉反应，对阳性结果的意义应结合临床综合判断，孕妇不能仅以此抗体阳性作为终止妊娠的依据。
