样本采集规范
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样本采集规范
●接到手术信息后,通知负责医生与样本提供者签写知情同意书
并留取样本提供者的术前配对血(抗凝、非抗凝血各一管,每管3~5ml),放置4℃冰箱并通知生物样本库人员来取。
●提前30分钟内进入手术室准备样本交接。
●样本离体后在最短时间完成样本交接,填写样本交接单,将样
本即刻转移到样本取材室进行采集。
●手术切除样本应在离体后30min内完成样本采集。
●依据科研需求,样本采集包括正常组织(>癌灶周围3cm)、
癌旁(癌灶周围3cm内)和癌灶。样本采集顺序为“正常→癌旁→癌灶”,每个位置采集不少于3块,每块应≥0.5cm3或300mg或1×107细胞。采集部位应与石蜡切片相一致。癌灶、癌旁、正常组织分别置于-80℃2管、液氮2管、RNAlater 1管保存。
●采集石蜡样本应≥0.5x0.5x0.2cm,样本和福尔马林的比例为1:8。
●保存RNA需用RNA later,组织体积与RNA later之比≥1:5。
●电镜样本采集将组织样本修成1mm3大小组织块,即刻投入4℃
固定液。样本和电镜保存液比例≥1:10。
●样本的配对血(抗凝、非抗凝各一管)应在离体后尽快分离,
2000r/m离心10分钟,离心后取上清液(血清、血浆)各五管保存,每管200~500μl,如果不够分5管则应保证每管最少200μl。
●将抗凝管上清液取走后,剩余血细胞加入人淋巴细胞分离液
2000r/m离心10分钟,洗脱后,1000r/m离心5分钟重复两次,用移液枪吹打贴壁细胞进行细胞计数分管,保证每管淋巴细胞数应不小于1x107个。根据科研需求,如需保证细胞活性,应加入冷冻保护剂,进行梯度降温后保存。
●根据研究需要,采集治疗过程中和治疗后的空腹外周静脉血,
术后1周、2周、1个月各取一次,肿瘤患者术前血液样本采集应在放/化疗前进行。