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动物繁殖学实验
动物繁殖学实验
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二、材料和方法
(一)材料、仪器
1、睾丸、卵巢组织切片;睾丸、卵巢组织学及精子 发生、卵泡发育过程的幻灯片、多媒体投影仪或胶 片投影仪。 2.显微镜、幻灯机或投影仪。 (二)方法
先结合投影或挂图进行讲解,对睾丸、卵巢组织学 结构及精子发生、卵泡发育过程有了初步的了解。 然后再用显微镜进行睾丸、卵巢组织切片的观察。
根据实践操作、考勤、实习报告(实习时间、
内容、操作技术、体会等)等综合评定成绩。
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实验一 公、母畜生殖器官观察
一、目的要求
认识各种公母畜生殖器官的位置、形态、
大小及解剖结构特点;
了解生殖器官的结构与生理功能的关系。
为学习家畜繁殖学及更好地掌握和应用繁
殖技术奠定解剖学基础。
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二、材料和方法
2.麻醉、保定及开腹手术:
3.胚胎分装:
4.移植部位:
将胚胎移入排卵侧的生长道内。凡从供体输卵管内得到的胚胎应 移植到受体输卵管内。从输卵管伞部插入2~3cm深,轻轻地注入 胚胎,然后慢慢地抽出移卵管。一般一侧输卵管可移植5~10枚胚 胎。如从供体子宫内收集的胚胎也应移植到受体母兔相应的部位。
PMSG处理组:
母兔颈部皮肤消毒同上。于颈部皮下一次注射PMSG150IU。之 后48~72h时,同上述方法注射同量hCG。即同公兔交配。
对照组:
颈部皮下注射生理盐水。其它处理同上。
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四、手术冲胚方法
于注射hCG并与公兔交配后24、36或48h,进行冲胚。 1.应用乙醚、乌拉糖、846麻醉药(耳静脉注射0.3ml/ 只)等麻醉后,再按外科手术要求打开腹腔。 2.将母兔背朝下方固定于兔手术台上。 3.在兔腹部最后两对乳头的腹中线部剪毛,用沾满肥 皂液的纱布清洗局部,再用剃须刀片刮毛,先后用碘酒 和酒精棉球由内向外进行消毒。然后盖上创巾并固定。 4.用手术刀在腹部正中线处皮肤切开2~3cm长的术口, 再在腹壁肌白线上切一小口,用中指垫着以手术剪来扩 大剪口。 5.冲卵时,注意止血,随时用温生理盐水纱布保温术部。
官的形态、大小、相互关系和大体构造以及在
活体上的位置有何特点。
2.绘出任一种公、母畜生殖器官的标本图。
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实验二 睾丸、卵巢组织学 及精子发生、卵泡发育过程的观察
一、目的和要求
通过家畜睾丸、卵巢组织切片观察,了解家畜睾丸、卵 巢的组织结构及其形态。 了解精子的发生和卵子的发生、卵泡的发育过程及其形 态。
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三、内容、观察步骤
(一)公畜睾丸的组织学观察
1.低倍镜观察
(1)被膜 (2)睾丸纵隔和中隔 (3)睾丸小叶:
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2.高倍镜观察:
(1)睾丸小叶的结构 (2)间质细胞 (3)曲精细管的结构 (4)足细胞
(5)生精细胞(生殖细胞)
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3.精子发生过程(spermatogenesis)可分为两个明显
充分认识正常与异常胚胎的形态结构及等级划分标准, 为大家畜超数排卵和胚胎移植打下良好的基础。
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二、材料
1.实验动物:
5~6周龄昆明白系雌性小鼠为超数排卵的供体,成年同 系公鼠与之1:1配比。
2.药物与试剂:
PMSG、hCG、75%酒精、冲胚液(mPBS)、矿物油。
3.器材:
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三、供体兔超排分组及操作步骤
FSH处理组:
先用碘酒棉球消毒母兔颈部皮肤,每只颈部皮下注射FSH10~ 15IU或0.15mg(动物所产品)。连续注射6次,每次相隔10~ 14h。总量为0.9mg/只。最后一次注射FSH后12h,从耳静脉注 射hCG75IU(先用酒精棉球消毒耳朵边缘)。 随即放置于公兔笼中,观察是否配种。 超排处理后,母兔阴部表现出发情症状,能成功地配种。
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六、胚胎移植
1.受体的选择:
选择与供体发情时间一致(相差不超过一天)的受体(自然发情 或超排处理诱发发情)。 参照供体处理方法。 先向移卵管内吸进少量PBS,接着吸入一点空气,然后再将胚胎连 同少量PBS吸入,接着再吸入一点空气和PBS, 在移卵管尖端需保 留一端空隙。这样就可防止胚胎丢失。
5.按外科手术要求分别缝合肌层和皮肤。并进行消毒。注意术 后护理。
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七、作业
简述实验过程和结果,根据结果进行分析。
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实验四 小鼠超数排卵及早期胚胎的质量鉴定
一、目的和要求
通过实验及操作,使学生了解孕马血清促性腺激素 (PMSG)和人绒毛膜促性腺激素(hCG)对卵巢机能的
生理作用,掌握超数排卵方法和早期胚胎的质量鉴定。
目前对胚胎的质量鉴定基本上采用形态学的方法 将胚胎分为A级(1级)、B级(2级)、C级(3级)和D 级(4级)四个级别。 其中A级和B级胚胎为可移植胚胎。
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(二)异常胚胎
异常胚胎指胚胎体积过小、过大、呈椭圆形、扁形、带 有大型极体,细胞内有大空泡,透明带破裂、收缩,卵
裂球色泽发暗、界限不清、个别萎缩、边缘变得粗糙,
一、目的和要求
1.熟悉人工授精所用的采精和输精器材,了解其用途 及使用方法。
2.练习假阴道的安装方法。
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二、材料和仪器设备
1.采精器材:
各种公畜采精用假阴道,牛、羊电刺激采精棒,猪手握法采精 用的橡胶手套等。
2.输精器材:
各种母畜输精器、阴道开张器、额灯和手电筒。
3.辅助器材及药品:
2.药品:
FSH、PMSG、hCG、0.9%NaCl、75%酒精、碘酒、新洁而灭、 冲卵液、846麻醉药。
3.器材:
玻璃注射器(20ml、10ml、1ml),兔用手术台、创巾、止 血纱布、药棉、缝针、缝线、消炎粉、青霉素、链霉素、 剪毛剪、止血钳、镊子、手术刀、剪、塑料细管(冲卵 管)、表面皿、移卵管、连续变倍实体显微镜。
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2.高倍镜观察 (1)卵泡发育的观察 每个卵泡都由位于中央的卵母细胞和围绕在卵母细胞周围的卵 泡细胞所组成。有的卵泡在发育过程中可能退化而形成闭锁卵 泡。卵泡可根据发育程度不同而分成下列各期。 1)原始卵泡 2)初级卵泡 3)次级卵泡 4)三级卵泡 5)成熟卵泡 6)闭锁卵泡
一、目的和要求
通过实验了解促卵泡素(FSH),孕马血清促性腺激素 (PMSG),人绒毛膜促性腺激素(hCG)的作用。 了解卵子的正常和异常形态结构,认识受精卵和未受精 卵之区别。
初步掌握冲卵、检卵技术,为掌握胚胎移植技术打下基
础。
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二、材料和仪器设备
1.动物:
选择健康的成年未孕母兔。 分组后,用作超排处理的供体。 另外,准备两只母兔,作胚胎移植受体。 实验母兔最好用产过仔的母兔,效果较好。 需公兔2~3只。
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五、胚胎观察
将接有冲卵液的表面皿置于实体显微镜下,检查胚胎的 数量和发育形态。 正常兔受精卵为卵圆形,直径约140µm,在透明带外围 有一厚层粘蛋白层(为兔胚胎特有结构)。卵黄颗粒很 细,分布很均匀。容易看到核的变化。在卵黄周隙内可 见两个极体。 未受精的卵母细胞中,粗细不一的卵黄颗粒清楚可见, 且分布不均。不能看到细胞核。在卵黄周隙内只有一个 极体。 一般在交配后24h,受精卵已发育成2-细胞胚胎。48h即 发育成16-细胞胚胎(早期桑椹胚)。
在实体显微镜下,用含有mPBS液的1ml注射器将子宫置 于表面皿中冲洗3遍,以回收桑椹胚及早期囊胚。 操作液和胚胎置于37℃恒温台上保存。
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四、胚胎质量鉴定
将回收的胚胎用mPBS洗净后,移入新鲜的覆盖有矿物油 的100μ l mPBS液滴中,在4×10倍以上实体显微镜下进 行胚胎质量鉴定。 (一)胚胎的级别划分
空透明带,在透明带内无一定结构的变性胚胎等。
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(三)未受精卵
呈圆球形,外周有一圈折光性强且发亮的透明带,中央 为质地均匀色泽较暗的细胞质,透明带和卵黄膜之间的 空隙很小甚至看不到。
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五、作业
将观察到的不同发育阶段的正常胚胎、异常胚胎或未受
精卵绘图并加以说明。
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实验五 人工授精器材的认识和假阴道的安装
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6.打开腹腔后,沿着子宫轻轻引出输卵管及卵巢。与卵 巢下脂肪组织处,用长夹夹住以固定卵巢。仔细观察卵 巢的变化。记录排卵点(卵巢排过卵后的小红点)。 7.先在卵巢附近找到输卵管伞,从伞部插入冲卵管并用 手指或夹子固定,另一端接表面皿。另一人用10ml注射 器配上9号针头,吸一管冲卵液(也可用生理盐水代 替)。 8.从子宫向输卵管方向,于子宫角末端和输卵管交界的 无血管处插入针头,使针头伸入输卵管内并用手指固定。 然后慢慢的推动注射器,将冲卵液注入输卵管,使冲卵 液由伞部收集到表面皿内。一般每次5ml即可。注意冲 卵液不得流失。
成。 (1)粘膜
上皮 固有膜
(2)肌层 (3)浆膜
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4.子宫组织学
内膜 肌层
外膜
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四、作业:
1.绘出并注明睾丸曲精细管及其所含细胞的构造图。 2.绘出并注明卵巢组织结构及卵泡发育各阶段示意 图。
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实验三 兔的超数排卵、胚胎移植 及早期胚胎观察
①精囊腺:
②前列腺:
③尿道球腺:
3、阴茎和龟头
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(二)雌性动物生殖器官
雌性动物可以观察生殖器官的标本、模型及挂图,也可以采用 腹腔镜法进行活体观察。 1、生殖器官的组成及位置 2、卵巢 3、输卵管 4、子宫 5、阴道 6、外生殖器官
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四、作业
1.通过观察和比较,说明各种公、母畜生殖器
一次性1ml注射器、镊子、剪刀、表面皿、巴氏吸管、Ф 直径35mm培养皿、实体显微镜等。
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三、超数排卵方法及胚胎采集
取5~6周龄昆明白系雌性小鼠,间隔48h分别腹腔注射
10IU PMSG和hCG,hCG注射后与性成熟公鼠合笼,次日 检查阴道栓。
有栓雌鼠在注射hCG后78~84h处死、摘取子宫。
的时期。 第一时期:精细胞生成:精原细胞经一系列分裂形成精 子细胞。 第二时期:精子形成(spermiogenesis):精子细胞变
形成为精子。
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(二)母畜卵巢的组织学观察
1.低倍镜观察
在低倍镜下找出卵巢表面上皮和白膜,区分卵 巢的皮质部和髓质部。
(1)表面上皮 (2)白膜 (3)皮质部 (4)髓质部
动物繁殖学实验
山东农业大学动物科技学院 动物繁殖学教研室
1
实习目的
动物繁殖学实验是动物繁殖学实践教学的重
要组成部分;
为毕业后从事动物生产科学研究和应用、生
产服务管理打下基础。
2
实习要求
主要学习掌握精液品质分析、人工授精、发
情鉴定、直肠检查等繁殖基本技术;
掌握动物超数排卵、胚胎采集、胚胎移植等
技术的基本方法。
3
实习内容
1、生殖器官标本观察;
2、人工授精器械、胚胎移植器械的识别和使用; 3、理化因素对精液品质的影响; 4、精液冷冻、解冻与精液品质评价; 5、直肠检查; 6、超数排卵、胚胎采集、胚胎移植; 7、畜牧场畜群繁殖力调查与评价。
4
实习过程安排
与理论课在同学期,集中实习,分组进行。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ(一)材料
1.各种公、母畜生殖器官标本、模型及挂图 (或投影)。 2.大磁方盘、解剖刀、剪刀、镊子、金属探 针、投影仪。
(二)方法
用投影与标本观察相结合;比较各种家畜生殖 器官的异同。
7
三、内容
(一)雄性动物生殖器官
1、观察各种动物睾丸和附睾的形状、相对位置和 大体构造。
2、副性腺:比较各种动物副性腺的大小、形状、 位置及内部构造。
高压灭菌器、酒精灯、长柄钳、镊子、玻璃棒、棒状温度计、 漏斗、量杯、灭菌凡士林、70%和95%酒精棉球、滑石粉、来 苏儿、洗衣粉等。
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三、方法和步骤
先讲解人工授精器材的构造、各部名称和用途,并作假阴道安装 的示范。然后学生分组观察并作假阴道的安装练习。 (一)人工授精器材的认识: 1.假阴道:
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(2)黄体 是排卵后的卵泡转变成的富于血管的内分泌器官。 牛、羊、猪的黄体位于卵巢皮质浅层突出于表面。 马的黄体则完全埋藏在卵巢深部。 根据黄体发育阶段而分成下列各期。 1)血体期 2)血管增生期 3)成熟期 4)白体期
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3.输卵管组织学
输卵管从外向内由浆膜、肌层和粘膜三层不同细胞层构
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