ELISA基础知识和注意事项PPT课件

.
18
间接法的假阳性
抗人酶标 IgM抗体
麻疹IgG
01.04.2021
麻疹IgM
麻疹 抗原
.
类风湿因子
19
间接法的假阴性
麻疹IgG
酶标抗人 IgM抗体
麻疹IgM
麻疹 抗原
01.04.2021
.
20
ELISA的有关名词概念
质控血清：质控血清是为了对实验结果进行控制而 配制的血清。质控血清可以是定值也可以是不定值， 可以购置也可以自配。自己配制时要注意选用无脂 血的血清或血浆，不能用试剂盒内的阳性对照。若 用稀释的血清作为质控血清，应考虑稀释基质成分 对结果的影响。因质控血清与临床标本不一致，应 该注意对结果的分析，应该注意质控血清只能用于 质控活动，不可用于标定仪器或评价方法。用于室 内质控的质控血清一般选取CUTOFF值2-3倍的 质控品。
酶标二抗是针对一类免疫球蛋白分子 只需要变换包被抗原，就可用一种酶标二抗
检测各种与抗原结合的抗体
01.04.2021
.
13
间接法ELISA
1.加样
2.孵育
3.洗涤
4.加入二抗
5.孵育
6.显色
01.04.2021
.
14
捕获法
ELISA（Capture ELISA）——专门用 来检测IgM型抗体的方法。将抗人IgM抗 体包被于固相载体表面，与标本中所有人 IgM抗体结合，洗涤后加入特异性抗原与相 应的特异性IgM抗体结合，洗涤后再加入酶 标的抗原特异性抗体与之结合，洗涤后加入 底物显色。
Elisa结果的影响因素
试剂盒的选择 标本 加样与稀释 温育 洗版 显色 质控
01.04.2021
.
26
试剂盒的选择
同行的试剂使用情况
上级部门对试剂实际使用的综合评价
使用临界值质控血清进行实际检测比较,选 择林敏度和准确度高、特异性强试剂盒
01.04.2021
.
27
标本
应注意避免溶血
要用于小分子抗原或半抗原的定量测定，也 可对抗体进行测定。
01.04.2021
.
7
竞争法ELISA
1.加样
3.孵育
3.显色
A
B
检测抗原 包被特异性抗体
酶标抗原
加样
01.04.2021
孵育
.
洗涤后显色
8
双抗体夹心法
双抗体夹心法ELISA ——将特异性抗体包 被于固相载体表面，与标本中相应抗原相结 合，洗涤后再加入酶标的第二特异性抗体与 抗原结合，加入底物后显色。
测定方法及表示方法：灵敏度标准品、质控 血清、阳性标本稀释终点、血清盘 （pannel）及临床标本阳性率。
01.04.2021
.
24
特异性： 真阴性标本的检出能力。
相对特异性=真阴性/（真阴性+假阳性） ×100%
测定及表示方法：质控血清、血清盘、临床 标本阴性率。
01.04.2021
.
25
ELISA基础知识和注意事项
01.04.2021
.
1
类容
ELISA的基本原理和相关概念 特别说说捕获法 ELISA结果的影响因素 ELISA结果的处理
01.04.2021
.
2
ELISA的基本原理和相关概念
将抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或 抗体后，这种酶标抗原或抗体既能保留与相 应抗体或抗原结合的免疫活性，又同时保留 酶的活性。
01.04.2021
.
15
捕获法ELISA
1.加样
2.孵育
4.加入抗原 孵育
5.加入二抗 孵育
3.洗涤 6.显色
01.04.2021
.
16
区别理解
检测抗原？抗体？ 包被什么？ 标记什么？
01.04.2021
.
17
间接法和捕获法比较
间接法：假阴性，假阳性
捕获法：酶标抗体的要求较高
01.04.2021
检测测抗原要有至少具有2个抗原决定簇
01.04.2021
.
9
检测抗原
双抗体夹心法ELISA
1.加样
2.孵育
3.洗涤
4.加入二抗
5.孵育
6.显色
包被特异性抗体
酶标特异性抗体
01.04.2021
.
10
双抗原夹心法
双抗原夹心法ELISA——检测标本中的总 抗体（包括IgM和IgG型抗体） 。将特异 性抗原包被于固相载体表面，与标本中特异 性IgM和IgG型抗体结合，洗涤后加入酶标 的特异性抗原与相应的抗体结合，洗涤后加 入底物显色
本底：就是底色。如ELISA HBsAg，阳性 显色，阴性不显色，本底就是整个阴性显色 的情况。ELISA 抗–HBcAb，阳性不显色， 阴性显色，本底就是整个阳性显色的情况。
01.04.2021
.
23
灵敏度：能检测到的分析物的最小量，表示 检测下限的能力。
相对灵敏度=真阳性/（真阳性+假阴性） ×100%
01.04.2021
.
11
双抗原夹心法ELISA
1.加样
2.孵育
4.加入酶标 抗原
5.孵育
3.洗涤 6.显色
01.04.2021
.
12
间接法
间接法 ELISA（Indirect ELISA）—— 将特异性抗原包被于固相载体表面，与标本 中相应特异性抗体结合，洗涤后再加入酶标 的抗人IgG或IgM抗体与之结合，洗涤后加 入底物显色。
由于酶具有很高的催化效率，因此可放大抗 原抗体反应效果，从而使测定方法达到很高 的敏感性。
01.04.2021
.
3
ELISA的基本原理
➢ 抗原或抗体在体外结 合到某种固相载体表 面后，仍然能保持其 免疫学活性而能相互 特异性结合。
01.04.2021
.
4
wk.baidu.com 抗原抗体复合物与酶标的二抗结合，加入合适的底物在酶的作用下 显色，颜色的深浅与特异性抗体水平成比例关系，可进行定性和定 量分析。
01.04.2021
.
21
室内质控：实验室内部使用控制实验结果可 靠性的一种质量控制。
室间质评：用于考核各个实验室结果可靠性 的一种考核，可分为国家级和地方级的室间 质评。可以理解为 “各个实验室的质量评 比”。
01.04.2021
.
22
临界值（CUTOFF值）：临界值是判断阴阳 性或有临床意义水平的数值，临界值的确定 是测定大量数据后应用统计学方法确定的。 许多试剂都会给出临界值或临界值的计算方 法。
01.04.2021
.
5
ELISA的分类
测抗原：竞争法（也可用于测抗体）、双抗 体夹心法。
测抗体：间接法、捕获法、双抗原夹心法
01.04.2021
.
6
竞争法elisa
竞争法ELISA原理——标本中的抗原和一 定量的酶标抗原竞争与固相抗体结合，标本 中的抗原含量越多，结合在固相上的酶标抗 原越少，显色越浅。