小鼠淋巴瘤细胞（L5178Y）TK基因突变试验
1.目的：在正式试验开始之前需要确定供试品的溶解性并确定适宜的供
试品剂量范围。
2.剂量：剂量设计试验通常不考虑供试品的溶解性，分别在有和无S9
的情况下接受3小时处理，最高浓度可达5mg/ml（即使其溶解度大于5mg/ml，也就是说这是最大的剂量）；以2倍稀释度向下设6－10个剂量。
3.溶剂：溶剂的选择按其优先顺序依次是RPMI-0、生理盐水、蒸馏水和
DMSO，要尽量避免悬浮液，如果供试品不可溶，应用RPMI-0将其制成悬浮液。
4.方法：
4.1 收集细胞。细胞总量应达到6×107个，用RPMI-10培养基悬浮备用。
（收集过程中每天应调整细胞的细胞量为2×105/ml，）。
4.2 将10ml RPMI-10培养基（约含107个细胞）分别置于一系列50ml一次
性消毒离心管中。为使处理用培养基中血清含量降至5％（V/V），
RPMI-0、溶剂、供试品、1mlS9混合物（代谢活化系统时）或150mM
KCL（非代谢活化系统时）加入离心管的总体积应达到20ml（如表
所示）。
表处理时培养基的组成成分
成分体积
无活化系统有活化系统细胞悬液（106/ml RPMI-10）10ml(107个细胞) 10ml(107个细胞)
RPMI-0 8.8ml 8.8ml
S9混合物－1ml
150 mM KCL 1ml --
供试品0.2ml 0.2ml
将离心管塞紧并置于振荡器上，37℃水浴3小时。然后低速离心（1000r.p.m）5分钟，弃去上清液，用PBS(PH7.4)洗涤细胞两次。重新悬浮细胞于50ml
RPMI-10之中，并调整细胞密度为2×105/ml，,转移至培养瓶中。培养2 天。每天计数细胞生长（DCG），并调细胞密度为2×105/ml左右。
5. 结果
按第1d、第2d的DCG计算相对悬浮生长（RSG）.
选择10％－20％RSG作为诱变试验的最高剂量，并以2倍稀释度向下设2－5个剂量。
6. 计算方法
RSG＝〔DCG1×DCG2(供试品组)/ DCG1×DCG2(对照组)〕
DCG1为第一天的生长率，DCG2为第二天的生长率。
DCG为：次日细胞密度/ 配制或稀释后的细胞密度。
