实验名称：
蛙类离体心脏灌流
课程名称：生理学实验
指导教师：龙天澄张碧鱼陈笑霞
实验人：叶永锋08344031
学院：海洋学院
实验时间：2009年12月09日
一、【目的要求】
1、学习斯氏离体蛙心灌流法。
2、了解心肌的生理特性。
3、观察Na+,K+,Ca2+及肾上腺素(Adr),乙酰胆碱(ACh)等对离体心脏活动的影响。
二、【原理】
将离体蛙心（失去神经支配的蛙心）保持在适宜的环境中，在一定的时间内仍然能够保持节律性收缩，心脏正常的节律性活动需要一个适宜的理化环境，离体心脏也是如此，离体心脏脱离了机体的神经支配和全身体液因素的直接影响，可以通过改变灌流液的某些成分，观察其对心脏活动的作用。心肌细胞的自律性、兴奋性、传导性及收缩性，都与钠、钾及钙等离子有关。血钾浓度过高时（高于7.9mmol/L），心脏兴奋性、自律性、传导性及收缩性都下降，表现为收缩力减弱、心动过缓和传导阻滞，严重时心脏可停搏于舒张期。血钙浓度升高时，心脏收缩力增强，过高可使心室停搏于收缩期。血钙浓度降低，心肌收缩力减弱。血中钠离子浓度的轻微变化，对心肌影响不明显，只有发生明显变化时，才会影响心肌的生理特性。肾上腺素可使心率加快、传导加快及心肌收缩力增强，乙酰胆碱则与肾上腺素的作用相反。
三、【实验仪器】
青蛙、常用手术器械、蛙板(或蜡盘)、蛙心夹、计算机采集系统、张力传感器、支架、双凹夹、双针形露丝刺激电极、滴管、培养皿(或小烧杯)、纱布、棉线、橡皮泥、任氏液。蛙心套管(斯氏套管或八木氏套管)、套管夹、0．65％NaCl、5％NaCI、2％CaCl2、1％KCl、1：5 000肾上腺素、1：10 000乙酰肌碱、300U／mL肝素。
四、【方法与步骤】
1、斯氏蛙心插管法
（1）一只青蛙，双毁髓后背位置于蜡盘中，
按前面的方法暴露心脏。仔细识别心脏周围的大
血管(见右图)。在左主动脉下方穿一线，于动脉
圆锥处结扎(动物个体小时，结扎位置可靠上些)。
再从左右两主动脉下方穿一线，并打一活结备
用。左手提起主动脉上的结扎线，右手用眼科剪
在结扎线下方、沿向心方向将动脉上壁剪一斜
口。选择大小适宜的蛙心套管，然后将盛有少量
(套管内2～3 cm高度)任氏液(内加入一滴肝素溶
液)的斯氏蛙心套管，山开口处插入动脉圆锥(见右图)。当套管尖端到达动脉圆锥基部时，应将套管稍稍后退，使尖端向动脉圆锥的背部后下方及心尖方向推进，经主动脉瓣插入心室腔内(于心室收缩时插入，但不可插得过深，以免心室壁堵住套管下口)。此时可见套管中血液冲人套管，并使液面随心脏搏动而亡下移动，表明操作成功(否则需退回并重新插入)。用滴管吸去套管中的血液，更换新鲜任氏液。稳定住套管后，轻轻提起备用线，将左、右主动脉连同插入的套管用双结扎紧(不得漏液)，再将结线固定在套管的小玻璃钩上，然后剪断结扎线上方的血管。轻轻提起套管和心脏，看清静脉窦的位置，于静脉窦下方剪断有牵连的组织，仅保留静脉窦与心脏的联系，使心脏离体(切勿损伤静脉窦)。用任氏液反复冲洗心室内余血，
使套管内灌流液不再有残留血液。保持套管内
液面高度一致(1.5～2 cm)，即可进行实验。
（2）将插好离体心脏的套管固定在支架
上，用蛙心夹夹住少许心尖部肌肉(不可夹得
过多，以免因夹破心室而漏液)。再将蛙心夹上
的系线绕过一个滑轮与张力传感器相连（如右
图）。注意：勿使灌流液滴到传感器上。调节
显示器上心脏收缩曲线的幅度适中。
2、实验观察
(1)记录正常心搏曲线
(2)改用0．65％NaCI溶液灌流，并作好加药标记，观察心搏变化。待曲线氏插管装置出现明显变化时，立即吸去套管中的灌流液，同时做好冲洗标记，并用新鲜任氏液清洗2—3次，待心搏恢复正常。注意：换液时切勿碰套管，以免影响描记曲线的基线，同时保持灌流液面一致(以下同)。
观察可得，NaCI溶液会阻遏心脏搏动。
(3)向套管内加2～6滴5％NaCI(较细的套管需少加)溶液，作好加药记号，观察心搏曲线的频率及振幅变化。当曲线出现明显变化时，应立即吸去套管中的灌流液，并做好冲洗标※记，迅速用新鲜任氏液清洗2～3次，待心搏恢复正常。
(4)同法向套管内加入1～3滴2％CaCI：溶液，观察并记录心搏曲线的变化。当出现明显变化时，立即更换任氏液，待心搏恢复正常(如果恢复迟缓，可多次冲洗)。
(5)向套管中加1—2滴1％KCl溶液，记录心搏曲线的变化。当心搏曲线变化时，同法更换灌流液，待心搏恢复正常。
(6)同法记录套管中加入l～2滴的肾上腺素溶液(1：10 000)后心搏曲线的变化。
(7)同法记录套管中加入1—2滴乙酰胆碱溶液(1：10 000)后心搏曲线的变化。
3、实验结果与分析
将记录到的各段心搏曲线附在实验报告中，计算给药前后曲线的频率、振幅和基线变化。测量结果填入表中。
五、【实验结果】
1、正常博击曲线图
2、滴加0.65%NaCl溶液图
分析：滴加0.65%NaCl溶液后，心跳减弱，这是由于用0.65%NaCl溶液灌注蛙心时，由于灌注液中缺乏Ca2+，以致心肌细胞动作电位2期内流Ca2+减少，细胞质Ca2+浓度减少，心肌的收缩活动也随之减弱。
3、滴加5%NaCl溶液
分析：由于细胞外液中钠浓度差梯度的变化一般对心肌活动影响不明显。因此上图的心率变化与图2滴加0.65%NaCl溶液里变化并不是很大，两个不同浓度的相同溶液作用机理是一样的，在此一不作过多相同分析。但如果实验中滴加溶液顺序不一样，若先滴加5%NaCl.再滴加0.65%NaCl溶液，所得的心搏变化就不如图3那样明显了，收缩力仅出现很微弱的变化。
4、滴加2%CaCl溶液
分析：细胞外Ca2＋在细胞膜上对Na＋内流有竞争性抑制作用，称为膜屏障作用。[Ca2＋]
增高时，Na＋内流受抑制，细胞0期除极速度与幅度减小，使兴奋性及传导性均降低。[Ca2 0
＋] 0增高使Ca2＋内流增多，因此慢反应细胞0期去极化加快加强，传导性增高，而快反应细胞平台期缩短，有效不应期缩短，复极加速。Ca2＋内流增多，使心肌收缩能力增强。[Ca2＋]
降低时，所引起的变化与高钙时相反。因此加入CaCl2后，心率减少、振幅减少，基线上0
移。
5、滴加1%KCl溶液
分析：滴加1％KCl后的心搏曲线发现，曲线的频率逐渐减小，愈来愈疏，幅度逐渐下
降，最后停止在基线处，即心脏停博于舒张状态。因为当细胞K+浓度增高时，K+与Ca2+有
