实验一 血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳
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血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳一、实验目的1. 掌握醋酸薄膜电泳的原理及操作。
2. 定量测定人血清中各种蛋白质的相对百分含量。
二、原理采用醋酸纤维薄膜为支持物的电泳方法, 叫做醋酸纤维素薄膜电泳。
醋酸纤维素, 是纤维素的羟基乙酰化所形成的纤维素醋酸酯。
将它溶于有机溶剂(如: 丙酮、氯仿、氯乙烯、乙酸乙酯等)后, 涂抹成均匀的薄膜则成为醋酸纤维素薄膜。
该膜具有均一的泡沫状的结构, 有强渗透性, 厚度约为120μm。
醋酸纤维素薄膜电泳是近年来推广的一种新技术。
它具有微量、快速、简便、分辨力高、对样品无拖尾和吸附现象等优点。
该技术已广泛应用于血清蛋白、糖蛋白、脂蛋白、结合球蛋白、同功酶的分离和测定等方面。
目前, 醋酸纤维薄膜电泳趋向于代替纸电泳。
三、操作方法一、仪器和薄膜的准备1. 醋酸纤维素薄膜的润湿的选择: 将薄膜小心地放入盛有缓冲液的培养皿内, 使它漂浮在液面。
若迅速润湿, 整条薄膜色泽深浅一致, 则表明薄膜质地均匀;若润湿时, 薄膜上出现深浅不一的条纹或斑点等, 则为薄厚不匀的薄膜。
实验中应选用质地均匀的薄膜。
因为, 纤维素薄膜的质量对电泳的结果影响很大。
例如, 膜厚薄不均可以造成区带歪扭不齐、各区带界限不情、背景脱色困难、实验结果难于重复等现象。
将选用的薄膜用镊子轻压, 使它全部浸入缓冲液内, 待膜完全浸透(约半小时)后取出, 夹在清洁的滤纸中间, 轻轻吸去多余的缓冲液, 同时分辨出光泽面和无光泽面。
2.制作“滤纸桥”:剪裁尽寸合适的滤纸条。
取双层附着在电泳槽的支架上, 使它的一端与支架的前沿对齐, 而另一端浸入电泳槽的缓冲液内。
然后, 用缓冲液将滤纸全部润湿并驱除气泡, 使滤纸紧贴在支架上, 即为“滤纸桥”。
按照同样的方法, 在另一个电泳槽的支架上制作相同的“滤纸桥”。
二、点样在薄膜无光泽的一面点样。
点样区距负极端1.5㎝处。
点样时, 先用血色素吸管将2~3微升的血清均匀地涂在点样器表面, 再用点样器“印”在薄膜的点样区内(见图4-1)。
实验一血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳(doc)一、实验目的:了解蛋白质在醋酸纤维素薄膜电泳中的电泳特性,掌握电泳操作技能。
二、实验原理:血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳是一种基于电场作用对蛋白质进行分离的方法。
它是将样品蛋白质通过电泳方式在薄膜上进行分离,通过比较蛋白质的电泳迁移率来判断不同蛋白质的分子量大小。
血清蛋白质主要是血清白蛋白、球蛋白和纤维蛋白,分子量范围从14 kDa到850 kDa 不等。
在醋酸纤维素薄膜电泳中,蛋白质受到电场力的作用下,向电极方向迁移,带电的蛋白质分子在电场力和阻力的作用下进行不断运动,大分子运动缓慢,小分子运动快,不同分子量的蛋白质在电泳中迁移率不同,可以根据迁移率区分出不同的蛋白质成分并计算其分子量。
三、实验步骤:1.制备0.9%琼脂糖凝胶电泳缓冲液:取700ml去离子水,加入1.68g粉末琼脂糖,微弱的加热搅拌至完全溶解后添加1ml 1M Tris-HCl(pH6.8),0.2ml 10%(w/v)SDS,0.1 ml 10%(w/v)溴酚蓝溶液,搅拌均匀,得到电泳缓冲液。
2.制备凝胶:取0.9%琼脂糖凝胶电泳缓冲液120ml,加入3ml 10%(w/v)APS和0.2ml TEMED,充分混合,倒入成型板中,插入2个酯化的平板梳子,待凝胶完全固化后去除梳子。
3.制备血清样品:血清样品先离心5min,将上清离心液保存备用,调整浓度至3mg/ml,加入适量的样品缓冲液,并加入0.1%(w/v)溴酚蓝染料,离心去除蛋白质沉淀,取上清液。
4.醋酸纤维素薄膜电泳:将凝胶放入电泳槽中,加入电泳缓冲液至凝胶表面,将样品用枪头均匀加到凝胶的对侧。
将电泳槽封好,接上电源,电压保持在120 V,电泳时间约为1.5小时。
电泳完成后取出凝胶。
5.染色:将凝胶放入染色液中,室温下摇晃染色1h,去除染色液,在清水中冲洗几次,静置清水中至少30min。
6.成像:将凝胶放在扫描仪上进行成像,选择合适的波长进行成像。
血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳第一篇:血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳成绩:教师签名:生物化学实验设计姓名学号专业班级任课教师实验题目:血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳一、实验目的:学习醋酸纤维薄膜电泳的操作技术,了解电泳技术的基本原理,测定人血清中各种蛋白质的相对含量。
二、实验原理醋酸纤维薄膜电泳是以醋酸纤维薄膜作支持物的一种区带电泳技术。
醋酸纤维素薄膜是纤维素的羟基乙酰化形成的纤维素醋酸酯。
将它溶于有机溶剂(如:丙酮,氯仿、氯乙烯、乙酸乙酯等)后,涂抹成均匀的薄膜则成为醋酸纤维素薄膜。
该膜具有均一的泡沫状结构,渗透性强,对分子移动阻力小。
醋酸纤维素薄膜作为是电泳支持体有以下优点:①电泳后区带界限清晰;②通电时间较短(二十分钟至一小时);③它对各种蛋白质(包括血清白蛋白,溶菌酶及核糖核酸酶)都几乎完全不吸附,因此无拖尾现象;④对染料也没有吸附,因此不结合的染料能完全洗掉,无样品处几乎完全无色。
它的电渗作用虽高但很均一,不影响样品的分离效果,由于醋酸纤维素薄膜吸水量较低,因此必需在密闭的容器中进行电泳,并使用较低有电流避免蒸发。
本实验以醋酸纤维素薄膜为电泳支持物,分离人血清蛋白。
血清蛋白中含有清蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白和各种脂蛋白等。
各种蛋白质由于氨基酸组分、立体构象、分子量、等电点及行状不同,在电场中的迁移速度不同。
分子量小、等电点低的,在相同碱性PH 缓冲体系中,带负电荷多的蛋白质颗粒在电场中迁移速度快。
醋酸纤维薄膜电泳已经广泛用于血清蛋白,血红蛋白,球蛋白,脂蛋白,糖蛋白,甲胎蛋白,类固醇及同工酶等的分离分析中,尽管它的分辨力比聚丙酰胺凝胶电泳低,但它具有简单,快速等优点。
根据样品理化性质,从提高电泳速度和分辨力出发选择缓冲液的种类,pH 和离子强度。
选择好的缓冲液最好是挥发性强,对显色或紫外光等观察区带没有影响,若样品含盐量较高时,宜采用含盐缓冲液。
例如血清蛋白电泳可选用pH8.6的巴比妥缓冲液或硼酸缓冲液;氨基酸的分离则可选用pH7.2的磷酸盐缓冲液等。
血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳及定量实验报告实验报告:血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳及定量一、实验目的本实验旨在通过醋酸纤维薄膜电泳技术,对血清中的蛋白质进行分离和定性,同时利用扫描仪对电泳条带进行定量分析,加深对血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳及定量的理解。
二、实验原理醋酸纤维薄膜电泳是一种常用的蛋白质分离方法,主要是利用电泳的原理将血清中的蛋白质进行分离并定性地鉴定。
其原理是基于各种蛋白质在电场中的迁移率不同,大小不同的蛋白质在电场的作用下,向正极或负极移动的速度也不同,从而将血清中的蛋白质分成不同的区带。
三、实验步骤1.准备试剂和仪器:醋酸纤维薄膜电泳试剂盒、电泳仪、醋酸纤维薄膜、玻璃板、移液器、注射器等。
2.配制试剂:按照醋酸纤维薄膜电泳试剂盒的说明书配制分离液、浓缩液和电极液等。
3.加样:将血清样品用移液器加到醋酸纤维薄膜上,控制加样量为5μL。
4.浸泡:将加好样的醋酸纤维薄膜放入分离液中浸泡10分钟,使其完全湿润。
5.电泳:将湿润的醋酸纤维薄膜放在玻璃板上,再覆盖上另一块玻璃板,然后将电泳槽装配好,接通电源进行电泳。
电泳时间和电压根据具体实验条件进行调整。
6.染色:电泳结束后,将醋酸纤维薄膜取出,放入染色液中染色10分钟,以便更好地观察蛋白质条带。
7.脱色:将染色后的醋酸纤维薄膜放入脱色液中脱色,直到背景清晰,蛋白质条带颜色较浅为止。
8.扫描定量:利用扫描仪对脱色后的醋酸纤维薄膜进行扫描,获取各蛋白质条带的OD值(吸光度),计算各蛋白质的相对含量。
四、实验结果通过醋酸纤维薄膜电泳,我们可以成功地将血清中的蛋白质分离成不同的条带。
从扫描结果中我们可以得到各条带的OD值,通过这些数据可以进一步计算出各蛋白质的相对含量。
以下是本实验的部分实验数据:OD值(吸光度)数据分析表:通过本次实验,我们成功地利用醋酸纤维薄膜电泳对血清中的蛋白质进行了分离和定性分析。
同时通过扫描定量,我们得到了各蛋白质条带的OD值以及相对含量。
实验一血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳(共享)一、实验目的本实验旨在掌握醋酸纤维素薄膜电泳操作的技能,通过血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳分析,了解蛋白质电泳分析中常用的方法和技术,并且能够初步理解血清蛋白质电泳图谱的含义和影响因素。
二、实验原理1. 蛋白质分离原理蛋白质分离是利用蛋白质之间在电场中的运动迁移率的不同分离的。
蛋白质在电场中的运动迁移率取决于蛋白质分子的大小、形状、电荷性质等的不同。
2. 醋酸纤维素薄膜电泳原理醋酸纤维素薄膜电泳是一种以醋酸纤维素膜为电泳区间的蛋白质电泳方法。
其原理为,蛋白质在正常向电场中发生运动,随着蛋白质运动迁移,逐渐进入膜孔中,受到膜孔的限制,蛋白质停止迁移。
大分子的蛋白质分子无法进入膜孔,小分子的蛋白质可以进入膜孔,分子大小的差异导致了蛋白质的分离。
醋酸纤维素膜孔的大小通常小于3纳米,蛋白质要进入膜孔需要满足一定的条件,如形状、电荷、大小等,因此通过醋酸纤维素膜孔的筛选效果,可以将蛋白质分离出不同性质和大小的蛋白质组分。
三、实验步骤1. 操作前准备:① 气泡清除:取适量蒸馏水,通入空气,将水搅动形成气泡,并将其排出,重复多次,以去除气泡。
② 涂膜:取新的醋酸纤维素膜,利用毛刷刷上适量真空脱泡机中的真空润湿液,边刷边使薄膜平铺,直至全部涂膜结束。
2. 样品制备① 取0.5 mL 的实验样品,放入1.5 mL 的离心管中,室温下放置5 min,使蛋白质沉淀和分散。
② 在超净工作台或洁净室内操作,将样品香磨匀,取样板,向上转移液体吸头轻轻吸取一下,将液体加入样品槽中。
3. 电泳操作① 将准备好的醋酸纤维素膜,贴在电泳仪的隔板上,并将隔板安装在电泳槽内。
② 将电泳槽中的电泳缓冲液(TGE)加热并耗尽气泡之后,轻轻将样品槽放入电泳槽中,注意不能与电泳膜接触,最后慢慢加入样品针头的样品。
③ 大致运行5-10min 后,可观察到样品在膜上积累。
④ 电泳完成后,将电泳槽内的醋酸纤维素膜取出,将其在甲醇以及蒸馏水中洗涤3次,最后在蒸馏水中洗涤一次。
血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验报告
标题:血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳
一、实验目的:
1.掌握醋酸纤维素薄膜电泳的原理和方法。
2.了解血清蛋白质的组成和分布。
二、实验原理:
醋酸纤维素薄膜电泳是一种常用的分离和鉴定蛋白质的方法。
其原理基于不同蛋白质分子在电场中的迁移率不同,从而实现对蛋白质的分离。
这种电泳方法具有快速、简便、分辨率高等优点。
三、实验步骤:
1.准备试剂和器材:醋酸纤维素薄膜、电极缓冲液、血清样
品、水浴锅、电泳仪、计时器、移液管、剪刀、镊子等。
2.加样:将适量血清样品用移液管加到醋酸纤维素薄膜上,
注意不要形成气泡。
3.电泳:将加好样的醋酸纤维素薄膜放入电泳仪中,接通电
源,开始电泳。
记录电泳时间和电流强度。
4.染色:电泳结束后,将醋酸纤维素薄膜取出,放入染色液
中染色。
5.观察和拍照:观察染色后的醋酸纤维素薄膜,记录各蛋白
带的颜色和位置。
用相机拍摄结果。
四、实验结果:
五、实验结论:
通过本次实验,我们成功地分离了血清中的各种蛋白质,并观察到了它们在醋酸纤维素薄膜上的分布情况。
实验结果表明,血清中含有白蛋白、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白和γ-球蛋白等多种蛋白质。
这种方法有助于我们进一步了解血清蛋白质的组成和分布,为临床诊断和治疗提供参考。
同时,本实验也锻炼了我们实际操作的能力和对醋酸纤维素薄膜电泳原理的理解。
血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳实验报告一、实验目的1、掌握血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳的基本原理。
2、熟悉电泳操作的基本技术和方法。
3、了解血清蛋白质的组成和相对含量。
二、实验原理血清中含有多种蛋白质,它们在 pH 值为 86 的缓冲液中均带负电荷,在电场中会向正极移动。
由于各种蛋白质分子大小、形状及所带电荷量不同,在电场中的迁移速度也就不同,从而可将血清蛋白质分离成不同的区带。
醋酸纤维薄膜具有均一的泡沫样结构,渗透性强,对蛋白质吸附极少,因此适合用于电泳。
三、实验材料1、器材电泳仪、电泳槽、醋酸纤维薄膜(2×8cm)、点样器、镊子、培养皿、滤纸、铅笔、直尺。
2、试剂巴比妥缓冲液(pH 86,离子强度 006)、染色液(氨基黑 10B)、漂洗液。
3、样本新鲜血清四、实验步骤1、准备醋酸纤维薄膜将醋酸纤维薄膜浸泡于巴比妥缓冲液中,浸泡时间约为 30 分钟,直至薄膜完全浸透。
2、点样取出浸透的薄膜,用滤纸吸去多余的缓冲液,在无光泽面距一端15cm 处,用铅笔轻轻划一条横线作为点样线。
然后,用点样器蘸取血清,均匀地点在点样线上,使血清形成一条细窄的直线。
点样量要适中,过多会导致蛋白质区带扩散,过少则不易观察到清晰的区带。
3、电泳将点样后的薄膜小心地放入电泳槽中,点样端靠近负极,使薄膜平整地贴在电泳槽的支架上。
盖上电泳槽盖,接通电源,调节电压为120V,电泳时间约为 50 60 分钟。
4、染色电泳结束后,取出薄膜,直接放入染色液中浸泡 5 10 分钟,使蛋白质区带染上颜色。
5、漂洗将染色后的薄膜取出,放入漂洗液中漂洗数次,直至背景无色,蛋白质区带清晰可见。
五、实验结果经过染色和漂洗后,在醋酸纤维薄膜上可以观察到清晰的血清蛋白质区带。
从正极到负极依次为清蛋白、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β球蛋白和γ球蛋白。
通过与标准图谱对比,可以大致估算出各蛋白质组分的相对含量。
六、结果分析1、影响电泳结果的因素(1)点样不均匀或点样量过多过少都会导致区带不清晰或不完整。
血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验报告引言:血清蛋白质是构成血浆中主要蛋白质的一类物质,对于人体的健康状况具有重要的指示作用。
醋酸纤维素薄膜电泳技术是一种常用的分离和检测血清蛋白质的方法。
本实验旨在探究血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳的原理、操作步骤以及实验结果的分析和讨论。
一、实验原理血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳是一种基于电荷和大小的分离技术。
首先,将血清样品与醋酸盐缓冲液混合,并加载到预制的醋酸纤维素薄膜中。
然后,将电泳槽中的电源接通,利用电场作用使蛋白质在薄膜上移动。
不同的蛋白质根据其分子量和电荷大小的不同,在电场作用下向阳极或阴极方向移动,从而实现蛋白质的分离。
二、实验步骤1. 准备工作:将醋酸纤维素薄膜剪成适当的大小,并在电泳槽中放置好阳极和阴极。
2. 样品制备:取适量的血清样品,加入醋酸盐缓冲液,并充分混合。
3. 样品加载:将样品缓冲液混合物加载到醋酸纤维素薄膜中,并确保完全覆盖薄膜表面。
4. 电泳条件设置:根据实验需要,设置适当的电场强度和电泳时间。
5. 开始电泳:将电泳槽连接电源,开启电源使电泳进行。
6. 实验结束:根据设定的电泳时间,关闭电源,取出醋酸纤维素薄膜。
三、实验结果分析和讨论通过血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验,可以观察到不同蛋白质在薄膜上的迁移情况。
根据迁移距离和迁移速度,可以初步判断不同蛋白质的分子量和电荷大小。
在实验中,我们可以根据薄膜上不同蛋白质的迁移位置,进行进一步的分析和鉴定。
血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳还可以用于检测某些疾病的诊断。
例如,肝功能异常时,血清中白蛋白和球蛋白的比例会发生变化,通过血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳可以明确出现异常的蛋白质成分,为临床诊断提供重要依据。
实验中需要注意的是,样品的制备和加载过程要尽量避免氧化、污染和杂质的引入,以保证实验结果的准确性。
此外,在设置电泳条件时,应根据样品特性和实验目的进行合理选择,以获得最佳的分离效果。
结论:血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳是一种常用的分离和检测血清蛋白质的方法。
综合性实验实验报告实验名称: 血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳姓名:指导教师:专业: 生物技术实验班级:实验时间:实验地点: 实验楼生物化学实验室成绩: _________________________________一、实验目的1、掌握醋酸纤维薄膜电泳的原理和操作方法。
2、作出清晰合格的人血清蛋白的电泳图谱。
二、实验原理1.带电颗粒在电场的作用下, 向着与其电性相反的方向移动, 这种现象称为电泳, 采用醋酸纤维薄膜为支持物的电泳方法称为醋酸纤维薄膜电泳。
影响泳动速度的重要因素: ①电场强度E ②溶液的pH ③溶液的离子强度④电渗现象⑤其他影响因素正常人血清蛋白的相对含量: 清蛋白 54.0~73.0%α₁-球蛋白 2.8~5.1%α₂-球蛋白 6.3~10.6%β-球蛋白 5.2~11.0%γ-球蛋白 12.5~20.0%三、实验仪器与试剂3.1实验仪器: 醋酸纤维薄膜(2×8㎝)常压电泳仪点样器培养皿粗滤纸玻璃板竹镊白瓷反应板3.2.实验试剂: 巴比妥缓冲液1000ml 染色液300ml 漂洗液2000ml透明液300ml四、实验步骤与方法①醋酸薄膜的浸泡(30min左右)②制作滤纸桥③平衡: 用平衡装置使三个电泳槽内的缓冲液面处于同一水平④点样: 在毛面距边界1~1.5cm处点样⑤电泳: 110V电泳60min⑥染色 5~10min⑦漂洗四次五、实验结果5.1实验结果醋酸纤维薄膜血清蛋白电泳图谱显示在滤纸条上从点样处开始依次为γ-球蛋白、β-球蛋白、α₂-球蛋白、α₁-球蛋白、清蛋白5.2注意问题:六. 1, 薄膜本身的质量问题(涂层不均匀等),2, 点样技术问题,3, 电压电流控制问题,4, 样品本身是否有降解、污染;5, 实验过程其他可能影响结果的问题, 如平衡时间、浸泡时间、染脱色透明时间等。
七.参考文献1.王秀奇秦淑媛高天慧等基础生物化学实验(第二版)2011年12月2.王镜岩朱圣庚徐长法等生物化学(第三版) 2012年5月2.芦晓红宁夏医学杂志维普资讯网 2002。
实验一血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳【实验目的】(1)了解电泳的一般原理,掌握醋酸纤维素薄膜电泳操作技术。
(2)测定人血清中各种蛋白质的相对百分含量。
【实验原理】带电荷的胶体粒子在电场中移动的现象称电泳。
醋酸纤维素薄膜电泳法是以醋酸纤维素薄膜作为支持物。
血清中含多种蛋白质,当在pH这8.6时,这些蛋白质均带负电,它们在电场中向阳极移动,由于各种蛋白质所带负电荷多少及颗粒大小不同,所以在同一电场,同一pH环境中涌动速度不同。
本实验以醋酸纤维素为电泳支持物,分离各种血清蛋白。
血清中含有清蛋白,α~球蛋白,β~球蛋白,γ~球蛋白和各种脂蛋白等。
各种蛋白质由于氨基酸组分,立体构象,分子量,等电点及形状不同,在电场中迁移速度不同。
分子量小,等电点低,相同碱性pH。
表1 人血清中12种蛋白质的等电点及分子量缓冲体系中,带负电喝多的蛋白质颗粒在电场中移动速度快。
例如,以醋酸纤维素薄膜为支持物,正常人血清中pH=8.6的缓冲体系中电泳1h左右,染色后可显示5条区带。
清蛋白泳动最快,其余依次为α1~,α2~,β~及γ~球蛋白。
这些区带经洗脱后可用分光光度法定量,也可直接进行光吸收扫描自动绘出区带吸收峰及相对百分比。
临床医学常利用它们异常区带的出现作为临床鉴别诊断的依据。
此法由于操作简单,快速。
图1 正常人血清醋酸纤维素薄膜电泳示意图为清蛋白,2,3,4,5分别为α1,α2,β~及γ~球蛋白,6为点样原点(3)优点。
目前,已成为临床生化检验的常规操作之一。
【临床意义】清蛋白62-72% α1—球蛋白3-4% α2—球蛋白6-10% β~—球蛋白7-11% γ~—球蛋白9-18%血清蛋白电泳的病理改变多半是清蛋白降低和一种或二种以上球蛋白增加。
表2 血清蛋白的临床意义【试剂】1.巴比妥缓冲液(pH=8.6离子强度为0.06):称取巴比妥纳12.76克,巴比妥1.66克,置于盛有200ml蒸馏水的烧杯中稍加热溶解后,移置100ml容量瓶中,加蒸馏水稀释至刻度。
血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳及其定量实验报
告
血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳是一种常用的蛋白质分离和定量技术。
本实验旨在通过电泳分离血清样品中的蛋白质,并利用醋酸纤维薄膜定量测定其含量。
以下是实验的具体步骤和结果。
实验步骤:
1. 样品制备:将血清样品离心并取上清液。
2. 样品混合:将取得的血清样品与等体积的缓冲液混合。
3. 样品加载:将混合样品加在聚丙烯酰胺凝胶电泳板上。
4. 电泳分离:通电使蛋白质沿着凝胶板移动,根据分子大小进行分离。
5. 醋酸纤维薄膜染色:将凝胶板放在染色缸中进行染色。
6. 图像采集:使用分析软件采集凝胶板图像。
7. 定量分析:利用染色蛋白质的光密度值进行定量分析。
实验结果:
经过电泳分离和醋酸纤维薄膜染色后,我们成功地分离出血清样品中的主要蛋白质,并通过定量分析得出各蛋白质的相对含量。
在实验中,我们发现血清蛋白主要包括白蛋白、球蛋白和纤维蛋白等。
结论:
血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳是一种有效的蛋白质分离和定量技术,能够帮助我们了解血清样品中的蛋白质组成及含量。
通过实验,我们成功地完成了蛋白质的分离和定量分析,为后续的研究奠定了基础。
以上就是本次实验的全部内容及结果,希望对您有所帮助。
感谢您的阅读!。
实验一血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳1.实验目的1)掌握血清蛋白质样品制备方法。
2)学习醋酸纤维素薄膜电泳的原理和操作方法。
3)探究血清蛋白质在不同醋酸浓度下的迁移率及其带电属性。
2.实验原理醋酸纤维素 (CA) 薄膜电泳是一种灵敏、快速、简单和易用的蛋白质分离技术。
其原理是基于蛋白质在电场下根据其电荷大小和分子量不同的迁移速度不同,从而达到分离目的。
血清蛋白质样品的制备是实验中的重点。
先将样品经过加热凝固除去浑浊物质,然后用一定浓度的甲醛处理,以防止其后的污染和自我降解。
实验过程中,将蛋白质样品上样至醋酸纤维素薄膜上,然后通电迁移分离,最后用明胶染色观察蛋白质带出现。
3.实验材料1)高分子纯度醋酸纤维素膜。
2)二氧化硅胶 G60 或 G100。
3)20% 三乙酸铝。
4)加热板和温度计。
5)梯度甲醛。
6)牛血清。
7)1,500V 恒流源。
8)1% 明胶染色液。
9)电泳槽。
10)电泳移液缸。
11)电泳经纸。
12)X 射线胶片。
4.实验步骤1)样品的准备将 5 mL 牛血清放在 100 度加热板上,热至样品凝固、表面水分完全蒸发。
将其冷却至4℃,切成 1 cm×1 cm 的长方形块,用 10% 甲醛处理 30 分钟。
然后取出,用蒸馏水清洗 3 次,并将其储存在4℃中备用。
2)制备 CA 薄膜电泳板在一个干净的玻璃板上,用无尘室将醋酸纤维素溶液均匀分布到一块的面积。
然后在干燥器中干燥,直到其成为透明、薄如纸的膜。
此外,还需要准备好用与电泳方式相同方向的两个黑色橡皮条,在薄膜电泳板两侧压缩电泳板的大小。
3)样品加样将 CA 薄膜电泳板放入电泳槽中,然后将准备好的血清蛋白质样品加到电泳板的另一端。
如果需要,可按照不同浓度的醋酸和水混合物将样品分成几个。
样品加完后,轻轻敲打电泳槽,使电泳板与样品协调。
4)电泳条件设置设置 1,500V 恒流源,移动至恒定电场距离,恒定距离器应被 5 mm 纸铤覆盖同侧,以确保距离一致稳定。
醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验结果引言醋酸纤维薄膜电泳是一种常用于生物分离和分析的技术,可以通过电场作用将带电粒子在纤维薄膜上移动,实现对混合物的分离。
本实验旨在利用醋酸纤维薄膜电泳技术对血清蛋白进行分离,以便进一步研究其组成和功能。
实验方法1.准备醋酸纤维薄膜:将醋酸纤维薄膜切割成所需尺寸,并在实验室条件下保持干燥。
2.准备电泳槽:将醋酸纤维薄膜放置在电泳槽中,确保其与电极接触良好。
3.准备样品:采集血清样品,并将其稀释至适当浓度。
4.进行电泳分离:将稀释后的血清样品均匀地涂抹在醋酸纤维薄膜上,然后施加适当电场使样品在薄膜上移动。
5.停止电泳:根据需要的分离程度,适时停止电泳过程。
6.分析结果:观察血清蛋白在醋酸纤维薄膜上的分离情况,并记录相关数据。
实验结果血清蛋白分离图谱根据实验结果,我们观察到在醋酸纤维薄膜上成功地分离了血清蛋白。
下图展示了血清蛋白分离图谱,其中纵轴表示电迁移率,横轴表示时间。
1.血清蛋白A的电迁移率为X,迁移时间为Y。
2.血清蛋白B的电迁移率为X,迁移时间为Y。
3.血清蛋白C的电迁移率为X,迁移时间为Y。
4.…血清蛋白组成分析根据血清蛋白分离图谱,我们可以进一步分析血清蛋白的组成。
通过与已知标准品进行比对,我们确定了以下血清蛋白的组成及相对含量:1.血清蛋白A占总蛋白的X%。
2.血清蛋白B占总蛋白的X%。
3.血清蛋白C占总蛋白的X%。
4.…血清蛋白功能研究根据血清蛋白的组成分析结果,我们可以进一步研究血清蛋白的功能。
以下是我们对某些血清蛋白功能的初步研究结果:血清蛋白A的功能1.血清蛋白A在某种生理过程中起到重要的调节作用。
2.进一步研究表明血清蛋白A可能与X疾病的发生和发展有关。
血清蛋白B的功能1.血清蛋白B与免疫系统的调节密切相关。
2.研究发现血清蛋白B在X疾病的治疗中具有潜在的应用价值。
血清蛋白C的功能1.血清蛋白C参与了血液凝固过程的调控。
2.进一步研究表明血清蛋白C可能与X疾病的预后有关。
实验一血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳【实验目的】(1)了解电泳的一般原理,掌握醋酸纤维素薄膜电泳操作技术。
(2)测定人血清中各种蛋白质的相对百分含量。
【实验原理】带电荷的胶体粒子在电场中移动的现象称电泳。
醋酸纤维素薄膜电泳法是以醋酸纤维素薄膜作为支持物。
血清中含多种蛋白质,当在pH这8.6时,这些蛋白质均带负电,它们在电场中向阳极移动,由于各种蛋白质所带负电荷多少及颗粒大小不同,所以在同一电场,同一pH环境中涌动速度不同。
本实验以醋酸纤维素为电泳支持物,分离各种血清蛋白。
血清中含有清蛋白,α~球蛋白,β~球蛋白,γ~球蛋白和各种脂蛋白等。
各种蛋白质由于氨基酸组分,立体构象,分子量,等电点及形状不同,在电场中迁移速度不同。
分子量小,等电点低,相同碱性pH。
表1 人血清中12种蛋白质的等电点及分子量缓冲体系中,带负电喝多的蛋白质颗粒在电场中移动速度快。
例如,以醋酸纤维素薄膜为支持物,正常人血清中pH=8.6的缓冲体系中电泳1h左右,染色后可显示5条区带。
清蛋白泳动最快,其余依次为α1~,α2~,β~及γ~球蛋白。
这些区带经洗脱后可用分光光度法定量,也可直接进行光吸收扫描自动绘出区带吸收峰及相对百分比。
临床医学常利用它们异常区带的出现作为临床鉴别诊断的依据。
此法由于操作简单,快速。
图1 正常人血清醋酸纤维素薄膜电泳示意图为清蛋白,2,3,4,5分别为α1,α2,β~及γ~球蛋白,6为点样原点清蛋白球蛋白附注α1 α2 βγ妊娠↓↓↑↓中毒时更明显,产后2-3个月正常婴儿↑↑↑6个月时γ正常,其他成分6-10岁时正常糖尿病↓多发性骨髓瘤↑↑↑↑异常球蛋白,可在β和γ区带间出现M区带肝硬变↓↓↑↑↑↑在晚期失代偿时阻塞性黄疸↑无丙种球蛋白血症↓↓全身性红斑狼疮↓↑↑↑类风湿性关节炎↓↑风湿热↑↑淀粉样变性↓↓↑↑肾病↓↑↑↑↓(3)优点。
目前,已成为临床生化检验的常规操作之一。
【临床意义】清蛋白62-72% α1—球蛋白3-4% α2—球蛋白6-10% β~—球蛋白7-11% γ~—球蛋白9-18%血清蛋白电泳的病理改变多半是清蛋白降低和一种或二种以上球蛋白增加。
表2 血清蛋白的临床意义【试剂】1.巴比妥缓冲液(pH=8.6离子强度为0.06):称取巴比妥纳12.76克,巴比妥1.66克,置于盛有200ml蒸馏水的烧杯中稍加热溶解后,移置100ml容量瓶中,加蒸馏水稀释至刻度。
2.染色液:氨基酸B0.5克,加甲醇50ml,冰乙酸10ml,蒸馏水40ml,溶后备用。
3.漂洗液:甲醇或乙醇45ml,加冰乙酸5ml,蒸馏水50ml混匀即可。
4.洗脱液:0.4mlNaOH5.透明液:冰乙酸25ml,加95%乙醇75ml混匀。
【操作】1.准备点样:将薄膜条(8×2cm)侵入巴比妥缓冲液,再于薄膜的无光泽面的一端1.5cm处,用毛细管或玻片取血清呈直线状滴加,等渗入膜内后,将薄膜有样品的一面向下(以防蒸发干)贴在电泳槽架上,两端用浸湿的滤纸作桥贴紧。
盖严,平衡5分钟。
2.通电:一般电压为120-140V,电流约(0.4-0.6mA/cm)通电45-60分钟,待电泳区带展开约25-35mm后关闭电源。
3.染色:通电完毕,将薄膜直接浸于染色液中,2-3分钟后取出,用漂洗液清洗数次,脱色至背景为无色。
4.定量:将漂洗净的薄膜吸干,剪下各个蛋白质带,同时按各区带的平均宽度剪下一条空白区带,然后分别浸入0.4MNaOH5ml的试管中,振摇数次,使色泽浸出。
于620毫微米波长处比色,以空白带浸出液调整零点,测各部分光密度为:A,α1,α2,β,γ,按下列方法计算:光密度总和T=A+α1+α2+β+γ各部分蛋白百分含量为:清蛋白(%)=A/T×100%α1球蛋白(%)=α1/T×100%α2球蛋白(%)=α2/T×100%β球蛋白(%)=β/T×100%γ球蛋白(%)=γ/T×100%5.透明:待薄膜完全干燥后,浸入透明液约5-10分钟,取出平贴在玻璃板上,完全干燥后即成透明的膜,可于光密度计上测定密度,或作标本永远保存。
6.结果分析【作业与思考】根据人血清中血清蛋白各组分等电点,如何估计它们在pH=8.6的巴比妥缓冲液中移动的相对位置?实验二ALT测定标准曲线的制作【实验目的】了解标准曲线制作的基本过程及使用标准曲线的意义。
【波长及在光电地色中滤光法的选择】【ALT测定实验原理及标准曲线制作】血清中ALT在一定的反应条件下,作用于丙氨酸及α-酮戊二酸生成一定量的丙酮酸及谷氨酸。
2,4-二硝基苯肼能与反应产生的丙酮酸及剩余的基质α-酮戊二酸生成相应的2,4-二硝基苯腙,后者在碱性条件下呈棕色。
以相同克分子浓度计算,丙酮酸所形成的苯腙在505波长下的OD值为α-酮戊二酸的三倍,根据此特点可计算出ALT作用反生成的丙酮酸的量,从而推算出酶的活力。
其反应式如下:丙氨酸+α-酮戊二酸——丙酮酸+谷氨酸丙酮酸+2,4-二硝基苯肼——丙酮酸+2,4-二硝基苯腙+水【试剂】1.基质液(含适量防腐剂)2.2,4-二硝基苯肼溶液(1mmol/L)3.NaOH溶液(4M)使用前用蒸馏水稀释10倍成0.4MNaOH溶液4.丙酮酸标准液(2mol/L)【操作方法标准曲线的制作】2.在每一管中各加入2,4-二硝基苯肼溶液0.5ml混匀,于37°C水浴放置20分钟后加入0.4MNaOH溶液5.0ml再混匀。
3.室温放置10分钟后,于505nm波长比色,对0号管条零点,读取各管的吸光度,分别以各管吸光度值与对应的卡门氏酶活力单位作图,即成标准曲线。
血清ALT酶活力的测定【实验目的】掌握分光光度计的正确使用方法,了解使用标准曲线的意义。
【实验原理】同ALT标准曲线制作【实验操作】取试管2支按下表操作1.将各管分别混匀,置37°C水浴中30分钟后加入2,4-二硝基苯肼溶液0.5ml混匀。
2.再置37°C水浴中20分钟,然后各加入0.4MNaOH溶液5.0ml再混匀。
3.室温放置10分钟后比色,波长为505mm,以空白管调零点,读取测定管的吸光度。
4.计算:根据测定管的吸光度,从标准曲线上查出相应的酶活力单位。
5.正常值:5-25赖氏单位实验三纸层析分离,鉴定氨基酸【实验目的】掌握低层析的基本技术,了解分配层析在科研等方面的使用价值。
【实验原理】将各种氨基酸点在滤纸一端,使层析剂经过点样处,各种氨基酸迁移率不同,经过一段时间后,逐渐在滤纸上集中在不同位置通过测定各种氨基酸的R f值,与标准对照,即可知该成分,其中R f=展层后斑点中心与原点之间的距离/原点与溶剂前缘间距离在分离样品组分时,还会遇到单向展层分离不好的情况,此时可采用双向展层。
即第一相展层后,除去纸上的溶剂,将滤纸干燥,沿溶剂前沿裁去没有扩展到的部分,转动90度后再用第二相溶剂展层。
【实验操作】1.取一张剪好的滤纸(勿用手摸)2.分别用毛细管吸取各氨基酸溶液点在各处点样处(斑点直径不得超过0.5cm),边点边用吹风机吹干,反复3次。
3.取层析剂100ml于标本缸底,将滤纸悬于标本缸层析液中,点样端朝下(点样处不得浸入层析剂中),上端滤纸两解用线固定,并盖好盖子,以防滤纸受潮变软,堕入层析剂中。
4.层析剂展层至上端约1cm时停止,取出标本,用铅笔标出层析剂前沿,用吹风机吹干再将茚三酮均匀喷在滤纸上并吹干。
5.标出各斑点的中心点,泳尺量出点样处至溶剂前沿以及至斑点中心的距离。
6.计算R f值。
7.根据各已知氨基酸的R f值,确定混合标本中各氨基酸的成分。
8.结果分析。
实验四核酸的提取和鉴定【实验目的】通过此实验要求掌握成分分离的一般原理,并熟练掌握离心机的使用【实验原理】核酸是生物大分子,根据其分子中所含戊糖不同而分为DNA和RNA两大类。
根据RNA 能溶于0.14MNaCl溶液中,而将RNA与其它物质分开,又根据DNA 溶于1MNaCl溶液中,而将DNA与其它物质分开。
在加入蛋白质变形沉淀剂氯仿——异丙醇后,经离心可分成三层,上层为DNA或RNA溶液,中层为蛋白质凝胶,下层为氯仿。
所得DNA、RNA溶液分别用H2SO4在沸水中水解,可得其各种化学成分,再根据各化学成分特性分别予以鉴定。
【试剂】1. 0.14MNaCl2. 1MNaCl3. 氯仿——异丙醇4. 95%乙醇5. 5%H2SO46. 3,5-二羟基甲苯:称取3,5-二羟基甲苯1.5克,加入浓盐酸500ml,再加入10%氯化高铁20—30滴,贮于冰箱。
此试剂应在临用前配置。
7. 二苯胺:称取1.5克二苯胺,溶于100ml冰醋酸(A、R)中,在加入浓H2SO41.5ml摇匀贮在棕色瓶中放冰箱内保存。
8. 5%HgNO39. 浓氨水10. 钼酸铵:称取钼氨酸5克溶于100ml蒸馏水中,再加入浓硫酸15ml待冷却后加入蒸馏水1000ml。
此试剂可于冷处保存一月不变质。
11. 氨基萘磺酸:取195ml15%碳酸氢钠溶液,加入0.5克纯炼的氨基萘磺酸及20%硫酸钠溶液5ml。
并在热水浴中搅拌使固体溶解(如不能全部溶解,可再加20%硫酸钠溶液,但加入量以1ml为限)。
置冷处可保存2—3周。
如颜色变黄时,须重新配置。
测定时将上述溶液用蒸馏水稀释10倍。
【实验操作】(一)分离提取去肝组织3克,研磨成匀浆,加入0.14M氯化钠5ml,充分混匀,3500r/min离心10秒后分成两部分:(二)鉴定结果分析2.磷酸鉴定:H3PO4+12H2M0O4→H3PO4·12M0O3+12H2O 磷酸钼酸磷钼酸H2PO4·12M0O3→H3PO4·6M0O3·3M02O5结果分析3.核糖鉴定:核糖——→糠醛——→绿色化合物结果分析4.脱氧核糖鉴定脱氧核糖——→w-羟基γ-酮记戊醛——→蓝色化合物结果分析实验五环境因素对酶活性的影响【实验原理】唾液淀粉没能将淀粉水解,生成各种糊精,最后可生成麦芽糖。
淀粉与碘反应成蓝色,糊精根据分子大小,与碘反应呈紫、红等不等颜色。
麦芽糖不与碘呈色。
根据以上特征,可用来判断淀粉水解的过程,并判断在不同条件下(温度、pH、激动剂、抑制剂)对酶活性的影响。
【试剂】1.0.5%淀粉液(不含Cl)2.0.5%含Cl淀粉液:每100ml淀粉液中加NaCl0.3克3.pH6.8磷酸缓冲液:1/15M 磷酸一氢钠49.6ml加入1/15M 磷酸二氢钾50.4ml混匀即可。
4.2%在碘液5.pH5.0磷酸缓冲液:0.2M 磷酸一氢钠在pH计下以0.2M盐酸调节至pH5.06.pH8.0磷酸缓冲液:1/15M 磷酸一氢钠94.7ml加入1/15M磷酸二氢钾5.3ml7.1%硫酸钠溶液【实验操作】《温度对唾液淀粉酶活性的影响》1.收集唾液、并用蒸馏水稀释500—1000倍(依个人的酶活性而定)。