实验 细菌菌落总数 CFU 的测定

《环境工程微生物学实验》实验指导书鲍立宁编写适用专业：环境工程安徽建筑大学环境与能源工程学院2017年9 月前言《环境工程微生物学实验》是环境工程专业的必修课。

本课程是培养学生基本技能、训练实践技能的一个重要教学环节，通过实验使学生对环境工程中的微生物学原理有一个深入的认识，从而更深刻地理解和掌握专业基本理论和基本知识，并且为日后深入研究污水监测、处理技术提供一种实践技能。

通过本课程学习使学生掌握微生物学实验的基本原理、基本知识和基本实验技能；掌握显微镜的使用、保养，饮用水的卫生细菌学检查，微生物的基本形态认识及微生物的培养、分离、染色、计数等基本技能，培养学生独立操作能力；树立理论联系实际的基本思想，养成良好的动手能力，增强创新能力。

本课程共设十三个实验，其中显微镜的使用及放线菌、真菌、藻类等微生物形态的观察活性、污泥中原生及微型后生动物的观察和数量的测定、培养基的制备及灭菌、细菌淀粉酶和过氧化氢酶的定性测定、大肠杆菌生长曲线的测定为验证性试验；空气中微生物的检测、水中细菌菌落总数（CFU）的测定、水源水中粪便污染指示菌的检测—多管发酵法为综合性实验；环境中特殊微生物的分离、筛选及鉴定为研究性试验。

本指导书适合于环境工程专业本科教学，也适用于环境工程辅修专业的学习。

目录目录 (3)实验一显微镜的使用及微生物形态的观察 (1)实验二活性污泥中原生及微型后生动物的观察和数量的测定 (3)实验三培养基的制备及灭菌 (4)实验四大肠杆菌生长曲线的测定 (7)实验五细菌淀粉酶和过氧化氢酶的定性测定 (8)实验六空气中微生物的检测 (9)实验七水中细菌菌落总数（CFU）的测定 (10)实验八水源水中粪便污染指示菌的检测—多管发酵法 (13)实验九环境中絮凝菌的分离、筛选及鉴定 (16)附录一微生物纯种分离、培养及接种技术 (17)附录二微生物的染色 (19)附录三纯培养菌种的菌体、菌落形态观察 (21)实验一显微镜的使用及微生物形态的观察实验学时：2学时实验类型：验证实验要求：必修一、实验目的1．学习普通光学显微镜的使用方法（本实验学习低倍镜和高倍镜的使用）。

南昌大学实验报告学生姓名：学号：专业班级：实验类型：√验证□综合□设计□创新实验日期：实验成绩：实验十细菌菌落总数（CFU）的测定一、实验目的：1．学习水样的采取方法和水样细菌总数测定的方法。

2．了解培养基平板菌落计数原则二、实验基本原理：细菌菌落总数（CFU）是指1ml水样在营养琼脂培养基中，于37℃培养24h后所生长的腐生性细菌菌落总数。

它是有机污染程度的指标，也是卫生指标。

在饮用水中所测得的细菌菌落总数除说明水有机污染的程度外，还指示该饮用水能否饮用。

但还应当指出的是，水源水中的细菌菌落总数不能说明污染的来源。

因此，结合大肠菌群数以判断水的污染的安全程度就更全面。

我国现行生活饮用水的卫生标准（GB5749－2006）规定：细菌菌落总数在1ml自来水中不得超过80个。

细菌种类很多，有各自的生理特性，必须用适合它们的培养基才能将它们培养出来。

然而在实验工作中不易做到，通常用一种适合大多数细菌生长的培养基培养腐生性细菌，以它的菌落总数表明有机污染程度。

三、主要仪器设备及耗材：电热干燥箱，高压蒸汽灭菌锅，电热培养箱，恒温水浴，冰箱，菌落计数器，放大镜，肉膏蛋白胨脂培养基，灭菌水，灭菌三角烧瓶，灭菌的带玻璃塞瓶，灭菌培养皿，灭菌吸管，灭菌试管等。

四、实验步骤：1．水样的采取供细菌学检验用的水样，必须按无菌操作的基本要求进行采样，并保证在运送，贮存过程中不受污染。

为了要正确反映水质在采样时的真实情况，水样在采取后应立即送检，一般从取样到检验不应超过4小时。

条件不允许立即检验时，应存于冰箱，但也不应超过24小时，并应在检验报告单上注明。

（1）生活饮用水（自来水）先将自来水龙头用火焰烧灼3分钟灭菌，再开放水龙头使水流5分钟后，用灭菌三角烧瓶接取水样，以待分析。

（2）池水、河水或湖水应取距水面10—15㎝的深层水样，先将灭菌的带玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻转过来，除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛满后，将瓶塞盖好，再从水中取出，立即返回实验室检查，否则需放入冰箱中保存。

一、实验目的1. 掌握细菌菌落总数测定的原理和方法。

2. 学会使用细菌菌落计数器，并正确操作。

3. 通过实验了解不同样品中细菌菌落的生长情况，评估样品的卫生质量。

二、实验原理细菌菌落总数（Colony Forming Units, CFU）是指在一定条件下，一个细菌在固体培养基上生长繁殖所形成的可见菌落数量。

通过测定样品中的细菌菌落总数，可以评估样品的卫生质量。

实验原理基于以下步骤：1. 样品处理：将样品进行适当的稀释，以便在平板上形成单菌落。

2. 平板培养：将稀释后的样品涂布在含有营养物质的平板上。

3. 培养与计数：在一定温度下培养平板，待菌落生长成熟后，使用菌落计数器进行计数。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 样品：食品、水、土壤等。

- 培养基：营养琼脂平板。

- 稀释剂：生理盐水、无菌水等。

- 菌落计数器。

- 无菌操作台、无菌棉签、镊子等。

2. 实验仪器：- 电热恒温培养箱。

- 电子天平。

- 移液器。

- 烧杯。

- 移液管。

四、实验步骤1. 样品处理：- 称取适量样品，用无菌水进行10倍递增稀释。

- 将稀释后的样品分别取1mL，涂布在营养琼脂平板上。

2. 平板培养：- 将涂布好的平板倒置放入电热恒温培养箱中，培养温度为37℃，培养时间为24小时。

3. 菌落计数：- 使用菌落计数器，在显微镜下观察菌落，记录每个平板上的菌落数。

- 计算每个样品的细菌菌落总数。

五、实验结果与分析1. 实验结果：- 样品A：细菌菌落总数为2.5×10^6 CFU/g。

- 样品B：细菌菌落总数为1.2×10^5 CFU/g。

- 样品C：细菌菌落总数为8.0×10^3 CFU/g。

2. 分析：- 样品A的细菌菌落总数较高，可能存在一定的卫生问题。

- 样品B的细菌菌落总数较低，卫生质量较好。

- 样品C的细菌菌落总数最低，卫生质量最佳。

六、实验结论通过本次实验，我们成功掌握了细菌菌落总数测定的原理和方法。

细菌cfu测定实验报告通过测定细菌菌落形成单位（colony forming units, CFU）的数量，评估并计算细菌的浓度。

实验原理：细菌CFU测定是一种常用的方法，通过将细菌溶液均匀涂布在培养基上，待其在适宜条件下生长形成菌落后，统计菌落的数量来评估细菌的浓度。

每个菌落均代表一个细菌，由于一开始的细菌数目未知，因此我们无法直接计算浓度，只能通过统计菌落数量来估计。

实验步骤：1. 准备细菌样品：如需测定不同浓度的细菌，可以进行稀释操作来制备细菌样品。

2. 准备培养基：选择适当的培养基，如营养琼脂培养基，然后按照说明书制备并消毒培养基。

3. 均匀涂布样品：将细菌样品用吸管或移液器等方法滴在培养基表面上，然后用铁环、玻璃棒等均匀涂布样品，确保细菌均匀分布。

4. 培养：将培养基孵育于适当的温度和湿度条件下，通常是在恒温培养箱中，在细菌培养周期结束后，菌落开始生长。

5. 计数：在适当的时间点，观察培养皿上的菌落，使用放大镜或显微镜进行计数。

一般情况下，菌落直径超过2mm才能被肉眼准确观察到，因此，需要计数的菌落直径要达到一定的大小。

6. 计算：根据菌落数量和稀释倍数，可以计算出每毫升细菌溶液中的菌落数目，从而估计出浓度。

实验结果及分析：对于一个能够被肉眼观察到的培养皿，假设我们进行了10倍稀释操作，经过培养后发现有100个菌落，那么每毫升的细菌溶液中就有1000个CFU（100菌落×10稀释倍数）。

如果我们在另一个能肉眼观察到的培养皿上进行了100倍稀释操作，经过培养后发现有50个菌落，那么每毫升的细菌溶液中就有5000个CFU（50菌落×100稀释倍数）。

通过CFU测定，我们可以对细菌的浓度进行估计。

然而，这种方法存在一定的局限性。

首先，细菌必须具有适宜的生长条件，包括培养基的组成、温度、湿度等。

其次，由于某些细菌形成菌落的速度较慢，可能需要较长时间才能生长足够大的菌落被观察到。

南昌大学实验报告学生姓名：学号：专业班级：实验类型：√验证□综合□设计□创新实验日期：实验成绩：实验十细菌菌落总数（CFU）的测定一、实验目的：1．学习水样的采取方法和水样细菌总数测定的方法。

2．了解培养基平板菌落计数原则二、实验基本原理：细菌菌落总数（CFU）是指1ml水样在营养琼脂培养基中，于37℃培养24h后所生长的腐生性细菌菌落总数。

它是有机污染程度的指标，也是卫生指标。

在饮用水中所测得的细菌菌落总数除说明水有机污染的程度外，还指示该饮用水能否饮用。

但还应当指出的是，水源水中的细菌菌落总数不能说明污染的来源。

因此，结合大肠菌群数以判断水的污染的安全程度就更全面。

我国现行生活饮用水的卫生标准（GB5749－2006）规定：细菌菌落总数在1ml自来水中不得超过80个。

细菌种类很多，有各自的生理特性，必须用适合它们的培养基才能将它们培养出来。

然而在实验工作中不易做到，通常用一种适合大多数细菌生长的培养基培养腐生性细菌，以它的菌落总数表明有机污染程度。

三、主要仪器设备及耗材：电热干燥箱，高压蒸汽灭菌锅，电热培养箱，恒温水浴，冰箱，菌落计数器，放大镜，肉膏蛋白胨脂培养基，灭菌水，灭菌三角烧瓶，灭菌的带玻璃塞瓶，灭菌培养皿，灭菌吸管，灭菌试管等。

四、实验步骤：1．水样的采取供细菌学检验用的水样，必须按无菌操作的基本要求进行采样，并保证在运送，贮存过程中不受污染。

为了要正确反映水质在采样时的真实情况，水样在采取后应立即送检，一般从取样到检验不应超过4小时。

条件不允许立即检验时，应存于冰箱，但也不应超过24小时，并应在检验报告单上注明。

（1）生活饮用水（自来水）先将自来水龙头用火焰烧灼3分钟灭菌，再开放水龙头使水流5分钟后，用灭菌三角烧瓶接取水样，以待分析。

（2）池水、河水或湖水应取距水面10—15㎝的深层水样，先将灭菌的带玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻转过来，除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛满后，将瓶塞盖好，再从水中取出，立即返回实验室检查，否则需放入冰箱中保存。

一、实验目的1. 了解细菌菌落总数的测定方法。

2. 掌握细菌菌落总数的计数技巧。

3. 分析实验数据，探讨影响细菌菌落数的因素。

二、实验原理细菌菌落总数（Colony-Forming Units，CFU）是指在一定条件下，一个细菌在固体培养基上生长繁殖所形成的肉眼可见的菌落。

通过测定一定量样品中的细菌菌落数，可以评估样品的卫生状况和微生物污染程度。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：肉膏蛋白胨脂培养基、无菌水、无菌试管、无菌吸管、无菌培养皿、细菌样品等。

2. 实验仪器：高压蒸汽灭菌锅、电热培养箱、恒温箱、电子天平、移液器、显微镜等。

四、实验步骤1. 样品处理：取一定量的细菌样品，加入适量的无菌水，进行10倍递增稀释。

2. 制备平板：将肉膏蛋白胨脂培养基加热融化，待冷却至45-50℃时，用无菌吸管吸取适量稀释液，均匀涂布在培养皿上。

3. 培养与观察：将涂布好的培养皿倒置放入恒温箱中，37℃培养24小时。

4. 菌落计数：观察培养皿上的菌落，按照菌落形态、大小、颜色等特征进行计数。

5. 数据分析：根据实验数据，计算样品中的细菌菌落数。

五、实验结果与分析1. 实验结果本次实验中，样品A的细菌菌落数为3.2×10^6 CFU/g，样品B的细菌菌落数为1.5×10^5 CFU/g。

2. 结果分析（1）样品A的细菌菌落数明显高于样品B，说明样品A的微生物污染程度较重。

（2）实验过程中，操作人员的无菌操作对实验结果有一定影响。

无菌操作不规范可能导致样品受到污染，从而影响细菌菌落数的准确性。

（3）培养温度和时间对细菌菌落数也有一定影响。

本次实验采用37℃培养24小时，适用于大多数细菌的生长。

若培养温度过低或过高，或者培养时间不足，可能导致细菌菌落数偏低。

六、实验结论本次实验成功测定了样品中的细菌菌落数，结果表明样品A的微生物污染程度较重。

实验过程中，应注意无菌操作，严格控制培养温度和时间，以保证实验结果的准确性。

实验10 细菌菌落总数(cfu)的测定实验目的：本实验的目的是学习菌落计数法，掌握在实验室中应用菌落计数法计算微生物群落密度的方法，并能够用测定结果进行稀释和百分率计算。

实验原理：菌落计数法是微生物计数的主要方法之一。

在菌落计数法中，必须用营养物质富含的培养基将待测物分散在培养物表面。

每个菌落表示一种单个细胞的后代，即在定期时间内营养物质经历漂浮、摇摆、分散和吸附过程之后，从单个细胞开始增殖的一系列后代。

菌落计数法要求在限定培养条件下进行培养，以便所有细菌都具有相似的生长速度。

通过计数所发现的菌落，可以确定样品中微生物的细胞数。

样本中存在多少个细胞需要明确。

这需要将样品稀释和分布在培养基表面，以便在计算菌落数量时可以获得数百个甚至数千个菌落。

在选择样品中细菌数量的范围时，需要考虑样品的反应过程，包括性状，物理化学性质和体积等。

如果样品中细菌数量太多，培养物中细菌细胞数量可能会达到最大值，使得菌落计数法无法对细菌数量达到该数量的范围进行有效计算。

在这种情况下，需要对样品进行稀释处理，并重新进行菌落计数分析。

实验仪器及设备：1. 工作台2. 恒温恒湿箱3. 倍增器4. 显微镜5. 称量器6. 移液器及移液枪7. 长管灯实验试剂：1. 琼脂培养基2. 生理盐水或磷酸缓冲液3. 蒸馏水实验步骤：1. 测定样品的细菌数量a. 准备预先测定样品细菌数量的干净培养皿。

盛放约20~25mL琼脂培养基并再次蒸过。

视情况在琼脂培养基底部标记好适当的标记，以便计算后将菌落数量乘以相应的稀释因子。

b. 准备带未知菌的样品。

在准备样品之前，如果需要允许不同环境的微生物在病原细菌的控制下合理发展和生长，可以使用磷酸盐缓冲液或生理盐水来制备样品。

c. 稀释样品。

通过取样采集适量的细菌并将其均匀地分配到适量的适当稀释液中并混合。

通过连续稀释，可以在一定的时间内以极低的细胞计数测定样品的细菌数量。

d. 移植培养。

使用无菌工具取适量稀释样品混合液置于标记好的琼脂培养基中。

实验六菌落总数的检测一、实验目的1、掌握培养基配制、灭菌方法、无菌操作及接种等基本技术；2、掌握食品中菌落总数测定方法及菌落计数方法。

二、实验仪器与器材1、仪器：恒温箱、冰箱、恒温水浴锅、天平、微波炉、均质器。

2、材料：吸管（容量为0.1mL、1m和10mL）、广口瓶或三角烧瓶、灭菌平皿、试管、酒精灯、试管架、灭菌剪刀、灭菌镊子。

3、试剂：营养琼脂培养基、75%乙醇、0.85%生理盐水。

三、实验原理菌落（colony）是指细菌在某一种固体培养基上克隆增殖发育成肉眼可见的细菌集团。

菌落总数是指食品检样经过处理，在一定条件下培养后，所得1mL检样中所含菌落总数。

通常以cfu/g（mL，cm2)表示，cfu代表的是colony forning unit。

菌落总数是作为判定食品的清洁程度（被污染程度）的标记，通常越干净的食品，单位样品菌落总数越低。

反之，菌落总数就越高。

菌落总数的测定是以每个活细菌能克隆增殖形成一个可见的单独菌落为基础的，但是在实践中除了单个细胞形成菌落外，二个或两个以上相连的同种细胞也同样可形成菌落，所以现在均以菌落总数（而不是活细菌数）或菌落形成单位数表达。

由于菌落总数的测定是在37℃有氧条件下培养的结果，对于厌氧菌、微需氧菌、嗜冷菌和嗜热菌在此条件下不生长，有特殊营养要求的细菌也受到限制。

因此，这种方法所得到的结果，实际上只包括一群在普通营养琼脂中发育、嗜中温的需氧和兼性厌氧的细菌菌落的总数。

但由于在自然界这类细菌占大多数，其数量的多少能反映出样品中细菌的总数，正因为如此，用该方法来测定食品中含有的细菌总数已得到了广泛的认可。

四、实验内容1、平板计数琼脂（plate count agar，PCA）培养基的配制及灭菌（1）培养基配方胰蛋白胨酵母浸膏葡萄糖琼脂蒸馏水pH5.0 g 2.5 g 1.0 g 15.0 g 1000 mL 7.0±0.2 （2）计算每组配制200ml平板计数琼脂培养基，计算出各组分用量。

实验三洗涤剂中细菌菌落总数（CFU）的测定一、实验目的1、掌握化妆品样品的采集、保存以及供检样品的制备。

2、掌握化妆品细菌总数的测定方法。

3、掌握平板菌落计数原则。

二、实验原理菌落总数是指化妆品检样经过处理，在一定条件下培养后(如培养基成分、培养温度、培养时间、pH值、需氧性质等)，1g(1mL)检样中所含菌落的总数，所得结果只包括一群本方法规定的条件下生长的嗜中温的需氧性菌落总数。

测定菌落总数便于判明样品被细菌污染的程度,是对样品进行卫生学总评价的综合依据。

三、试剂和仪器灭菌生理盐水、灭菌培养基、灭菌培养皿、灭菌刻度吸管（1mL、10mL）、洗耳球、酒精灯、1L烧杯、恒温培养箱、放大镜。

四、实验步骤1、用灭菌吸管吸取10mL液体洗涤剂于90mL生理盐水中，溶解。

用刻度吸管吸取按1:10稀释的被检样品1mL，注入灭菌培养皿中，注意要在酒精灯旁操作。

2、将熔化并冷却至45~50℃的培养基倾注于培养皿内，每皿约15mL，随即转动培养皿，使样品与培养基充分混合均匀，待琼脂凝固后，翻转平皿，置37℃培养箱内培养48h。

3、菌落计数法：先用肉眼观察,点数菌落数,然后再用放大5～10倍的放大镜检查，以防遗漏.记下各平皿的菌落数后，求出同一稀释度各平皿生长的平均菌落数。

若平皿中有连成片状的菌落或花点样菌落蔓延生长时，该平皿不宜计数。

若片状菌落不到平皿中的一半，而其余一半中菌落数分布又很均匀，则可将此半个平皿菌落计数后乘以2，以代表全皿菌落数。

五、结果记录-------------中细菌计数结果及报告方法细菌总数不得大于500个/mL或500个/g。

（2）其他化妆品细菌总数不得大于1000个/mL或1000个/g。

实验六水中细菌总数与大肠菌群的检测摘要:本实验以测定公园河流水的细菌总数与大肠菌群的数量,来测定特定地点的水质情况。

初步介绍了一种通用的方法来检测水源的健康指标,判定水体的质量。

对该实验点的水源作出了定性的评价,以及关于试验中如何提高梯度重复的精度的分析。

关键字:河流水;细菌总数测定;大肠菌群;EMB培养前言各种天然水中常含有一定数量的微生物。

水中细菌总数往往同水体受有机污染程度呈正相关,因而就是评价水质污染程度的重要指标之一。

细菌总数就是指1mL水样中所含细菌菌落的总数[cfu/g(mL)],可用稀释平板计数法检测。

水中大肠菌群的数量可用来判断水源就是否被粪便污染,并可间接推测水源受肠道病原菌污染的可能。

特征:G-无芽孢杆菌,兼性厌氧、在37℃24h内能发酵乳糖产酸、产气。

多管发酵法初发酵:适当稀释样品,乳糖发酵培养,产酸产气;分离培养:伊红美蓝(EMB)平板上划线分离,出现紫色、粉红色特征性菌落;复发酵验证:挑取特征性菌落进行乳酸复发酵验证。

材料与方法牛肉膏蛋白胨琼脂培养基:用于水中细菌总数测定牛肉膏5g,蛋白胨10g, NaCl 5.0 g,琼脂8g, 蒸馏水1000ml; pH 7、0乳糖胆盐蛋白胨培养基:用于初发酵1×:蛋白胨20g、牛胆盐5g、乳糖10g、0、04%溴甲酚紫水溶液25mL(调pH值后加)、水1000mL、pH 7、2－7、4三倍浓缩液(3×):除水以外,其余成分取三倍用量分装:1×的培养基分装9ml/管, 3×的培养基分装5ml/管或50ml/瓶,均装上德汉氏小管。

灭菌条件:115℃,15min。

EMB培养基:用于大肠菌群菌落鉴定脱水培养基,按说明书操作,水用量为90%。

水源:紫竹院河水仪器:高压灭菌锅、无菌培养皿、试管、吸管、接种环、德汉氏小管、温箱、载玻片、酒精灯、显微镜等。

试剂:牛肉膏,蛋白胨,NaCl,琼脂粉,伊红美兰琼脂培养基、水、乳糖、0、04%溴甲酚紫水溶液、胆盐、革蓝氏染色试剂具体实验步骤:1),相关器械的灭菌操作,以及前往紫竹院取少量的样品水。

竭诚为您提供优质文档/双击可除菌落总数测定实验报告篇一：食品中菌落总数的测定蛋糕中菌落总数的测定【说明】蛋糕具有松软香甜，携带方便、食用简单等特点，因此成为人们居家生活特别是旅途中不可或缺的一种美食，深受人们的喜爱。

测定蛋糕中的菌落总数可以用来判定其被微生物污染的程度及卫生质量，它反映蛋糕在生产过程中是否符合卫生要求，以便对被检样品做出适当的卫生学评价，菌落总数的多少在一定程度上标志着蛋糕产品质量的优劣，因此，测定蛋糕中的菌落总数具有重要意义。

目前应用于测定食品中菌落总数的方法有:纸片法、电阻抗法等。

本实验采用国标法(gb\T4789.2-20XX)对独立包装小蛋糕中菌落总数进行测定。

并与gb7099-20XX糕点、面包卫生标准中规定的冷加工糕点中菌落总数≤10000（cfu/g）的数据对比初步判断样品是否符合卫生要求。

一、实验目的1、学习并掌握测定蛋糕中菌落总数的方法及原理。

2、通过对比实验验证冷藏对蛋糕的保鲜及抑菌作用。

3、了解菌落总数测定在食品卫生学评价中的意义。

二、实验原理菌落总数即为食品检样经过处理，在一定条件下（如培养基、培养温度和培养时间等）培养后，所得每g（mL）检样中形成的微生物菌落总数。

菌落总数主要作为判定食品被污染程度的标志，也可以应用这一方法观察细菌在食品中繁殖动态，以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。

每种细菌都有它一定的生理特性，培养时应用不同的营养条件及其他生理条件（如温度、培养时间、ph、需氧性质等）去满足其要求才能将各种细菌都培养出来。

但在实际工作中，一般都只用一种常用的方法。

细菌菌落总数的测定，所得结果，只包括一群能在营养琼脂上发育的嗜中温性需氧菌的菌落总数。

菌落总数并不表示样品中实际存在的所有细菌总数，菌落总数并不能区分其中细菌的种类，所以有时被称为杂菌数，需氧菌数等。

三、实验设备与材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：3.1恒温培养箱：36℃±1℃，30℃±1℃。

食品中菌落总数测定操作步骤一、器皿、药品试剂准备1、检查高压灭菌锅水水位（完全淹没发热管且与锅底支架相平），通电预热，检查恒温水浴锅水位，通电，设定为46度，加热恒温；2、取8套直径90毫米的培养皿用报纸包裹严密或用布袋封装，放入高压灭菌锅；3、称量4.3克氯化钠于500毫升三角瓶中，用500毫升量桶量取500毫升水加入其中，溶解；4、取一250或300毫升的三角瓶、三支试管，用量桶量取225毫升上述（第3步所培溶液）生理盐水于三角瓶中，用10毫升刻度吸管分别量取9毫升上述（第3步所培溶液）生理盐水于三支试管中，用透气塞或棉塞封口，放入高压灭菌锅；5、称取4.7克平板计数琼脂培养基于250毫升三角瓶中，加200毫升水，溶解，用透气塞或纸封口，放入高压灭菌锅；6、取6支1毫升刻度吸管，用报纸包裹严密或用布袋封装，放入高压灭菌锅；7、盖好锅盖（双手对角拧紧），使密闭步漏气，打开排气阀，排尽冷空气，关闭排气阀，观察压力表指针变化，从压力表指针达121度时开始计时，使温度保持121度15分钟（根据不同的型号需手动或自动控制），15分钟后断电，自然冷却使压力表指针回到零位。

二、样品稀释和培养1、打开超净工作台风机；2、打开压力锅盖，取出包裹严密的8套直径90毫米的培养皿，放入超净工作台；3、取出装有225毫升生理盐水和200毫升培养基的三角瓶（保持封口密闭）、编号-1，放入恒温在46度的水浴锅中；4、取出装有9毫升生理盐水的支试管（置于试管架上），分别编号-2、-3、K，放入超净工作台；5、取出包裹严密的6支刻度吸管，放入超净工作台；6、无菌操作称取25克样品，于超净工作台中放入装有225毫升无菌生理盐水的三角瓶中，用均质器处理1至2分钟，配成-1的阳平均液；7、用1毫升灭菌刻度吸管从-1样品均液中量取1毫升放入-2试管，混匀，制成1：100的样品均液；8、用1毫升灭菌刻度吸管从-2样品均液中量取1毫升放入-3试管，混匀，制成1：1000的样品均液；9、打开培养皿包裹物，培养皿分别编号1：100、1：1000、1：10000、空白（各2皿）；10、对应试管和培养皿的编号，用刻度吸管分别吸取1毫升样液于对应的培养皿中；11、将46度恒温的培养基均匀倒入上述8个培养中，每皿20至25毫升；12、静置，冷凝后翻转培养皿，放入36度培养箱培养48小时，计数。

细菌比色法公式计算法
定量移取待测溶液（同时配置标准系列溶液），加入显色液充分显色，上分光光度计测量吸光度（标准系列L以吸光度和浓度／含量为坐标绘制标准曲线得到斜率和截距，样品吸光度代入曲线公式可以得到样品浓度／含量）或者用目视比色法比色定量。

细菌菌落总数（CFU）=腐生性细菌菌落总数×体积。

细菌菌落总数（CFU）是指1mL水样在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基中，于37℃培养24h后所生长的腐生性细菌菌落总数。

它是有机物污染程度的指标，也是卫生指标。

在饮用水中所测得的细菌菌落总数除说明水被生活废物污染的程度外，还指示该饮用水能否饮用。

但水源水中的细菌菌落总数不能说明污染的来源。

因此，结合大肠菌群数以判断水的污染源的安全程度就更全面。

目视比色法的主要缺点是准确度不高，如果待测液中存在第二种有色物质，就无法进行测定。

另外.由于许多有色溶液颜色不稳定，标准系列不能久存，经常需在测定时配制，比较麻烦。

虽然可采用某些稳定的有色物质(如重铬酸钾、硫酸铜和硫酸钴等)配制永久性标准系列，或利用有色塑料、有色玻璃制成永久色阶，但由于它们的颜色与试液的颜色往往有差异，也需要进行校正。

X=NX100*100（个／m3空气）πr²
N-5min降落在平板上，经37摄氏度培养24h后所生长的平均菌落数r-平皿底半径。

细菌菌落总数（CFU）的测定大连理工大学环境与生命学院实验目的1.学习并掌握细菌分离的原理与方法2.掌握细菌菌落总数的测定实验仪器高压灭菌锅实验仪器洁净工作台培养箱实验原理细菌总数主要作为判定被检水样污染程度的标志。

在水质卫生学检验中，细菌菌落总数(CFU)是指lmL水样在营养琼脂培养基(LB培养基)中，于37℃培养24h后所生长的腐生性细菌菌落总数。

它是有机物污染程度的指标，也是卫生指标。

实验步骤11.取样用无菌锥形瓶到现场取一定量的活性污泥或土壤或湖水，迅速带回实验室。

实验步骤2.稀样水样实验步骤33.接种如上图,从试管中分别吸取1mL菌液于相应编号的培养皿内。

加热融化培养基，当培养基冷至45℃左右时，向培养皿中倒入培养基，然后将其平放在桌上，顺时针和反时针来回转动培养皿，使培养基和菌液充分混匀，冷凝后即成平板，倒置于37℃培养箱内培养24h。

实验步骤4.计菌落数将培养24h的平板取出计菌落数。

菌落计数及报告方法用肉眼观察，计平板上的细菌菌落数。

记下同一浓度的三个平板的菌落总数，计算平均值，再乘以稀释倍数即lmL水样中的细菌菌落总数。

菌落计数及报告方法各种不同情况的计算方法如下：1.首先选择平均菌落数在30－300之间者进行计算，当只有一个稀释度的平均菌落符合此范围时，则以该平均菌落数乘其稀释倍数报告之（例1）。

菌落计数及报告方法2.若有两个稀释度的平均菌落数均在30－300之间，则按两者之菌落总数之比值来决定，若其比值小于2应报告两者之平均数，若大于2则报告其中较小的菌落总数（例2及例3）。

3.若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（例4）。

菌落计数及报告方法4.若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（例5）。

5.若所有稀释度的平均菌落数均不在30-300之间，则以最接近300或30的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（例6）。