超滤法测定冬凌草甲素的血浆蛋白结合率

2011年4月Vo.l 29No .4April 2011Chi n ese Journal of Chromatography358~361研究论文DOI :10.3724/SP .J .1123.2011.00358*通讯联系人:张秀莉,副研究员,主要研究天然小分子和多肽的分离分析.Te :l (0411)84379521,E m ai:l zhangx i uli @dicp .ac .cn .基金项目:重大新药创制专项(N o .2009ZX 09313 003)和国家自然科学基金面上项目(No .30801513).收稿日期:2010 12 08高效亲和色谱法测定2种中药成分与人血清白蛋白的结合率蔡晓明1, 张 岩2, 于 龙1, 郭志谋1, 张秀莉1*, 梁鑫淼1(1.中国科学院大连化学物理研究所,中国科学院分离分析重点实验室,辽宁大连116023;2.Un ivers ity of C alifon ia Irvi ne ,CA 92697 4625,USA )摘要:采用高效亲和色谱技术(HPAC )对中药成分与人血清白蛋白(HSA )的相互作用进行了研究。

首先采用点击化学的方法制备了表面键合有HSA 蛋白的硅胶固定相并装填成亲和色谱柱,根据药物在该色谱柱上与空白硅胶柱上的保留时间差计算得到药物与蛋白的结合率。

利用该方法测得模型化合物华法令与H SA 的结合率与文献中采用超滤法测得的结果基本一致,表明该方法可用于测定药物与HSA 的结合率。

在此基础上用该方法测定了葛根素和告依春两种中药成分与HSA 的相对结合率分别为10 26%和10 20%。

同时用超滤的方法测定了葛根素与H SA 的结合率为14 25%。

结果表明,HPAC 可以作为研究药物与蛋白相互作用的一种简便可行的方法,其测定结果与超滤方法一致。

关键词:高效亲和色谱法;人血清白蛋白;葛根素;告依春;结合率;超滤中图分类号:O 658 文献标识码:A 文章编号:1000 8713(2011)04 0358 04Detection of drug hu m an seru m albu m in b ind i ng ratios of t woCh i nese m edici nal ingred ients by h igh perfor m anceaffinity chro matographyCAI Xiao m i n g 1,Z HANG Yan 2,YU Long 1,GUO Zhi m ou 1,ZHANG X iuli 1*,LI ANG X in m iao1(1.CAS K ey L abora tory of Sepa ra tion Sc ien ce for An a ly tica l Che m istry ,D a lian In stitu te o fChe m ica l Phy sics,Chin ese Acade m y o f Scie n ces,Da lian 116023,Ch i n a;2.Un iver sity o f Ca lifon ia Ir vin e,CA 92697 4625,U SA )A bstract :The i n teraction of t wo Chinese m edici n al i n gredi e nts and hum an seru m al b u m in (HSA )has been investigat ed by high perf or m ance affi n it y chro m atography (HPAC ).HSA bounded silica based stati o nary phase w as prepared based on t he click chem istry strategy ,and packed in a colu m n (nam ed as HSA col u m n).The drug HSA binding rati o was calculated fro m t he diff erence of t he drug s ret enti o n ti m es on the H SA colu m n and silica col u m n (blank col u m n).T he warfari n HSA bindi n g rati o det er m ined by t his m ethod was s i m ilar to t he refer ence reported value by ultrafiltration m et hod .The results i n dicat ed that the new HSA colu m n and t he HPAC m et hod can be used for t he detection of binding ratio of drug and HSA .T he bi n di n g ratios of puerari n and goitri n deter m i n ed by the HPAC m ethod were 10 26%and 10 20%,respecti v e l y .And the binding rati o of puerarin deter m i n ed by ultrafiltrati o n was 14 25%.A ll t hese results showed t hat HPAC is a usef ul m et hod t o i n vestigate the interacti o n bet ween drugs and protein .K ey words :high perf or m ance affinity chro m atography (HPAC);hu m an seru m albu m i n ;puer ari n ;goitrin ;binding ratio ;ultrafiltration 人血清白蛋白(hu m an seru m albu m in ,HSA)是由585个氨基酸残基组成的一条单肽链,相对分子质量约为66500,是血浆中含量最丰富的重要载体蛋白[1]。

第51卷第4期 辽 宁 化 工 Vol.51，No. 4 2022年4月 Liaoning Chemical Industry April，2022样品前处理技术在药物分析中的研究进展唐郡遥（沈阳药科大学 药学院，辽宁 沈阳 110016）摘 要： 对于药物分析来说，良好的样品前处理技术可为后续分析带来保障。

近些年随着科学技术水平的提高，样品前处理出现了诸多新方法，如固相微萃取、液液微萃取等。

对最近几年药物分析中样品前处理技术进行了综述总结。

关 键 词：样品前处理；固相萃取；液相萃取中图分类号：TQ460.7 文献标识码： A 文章编号： 1004-0935（2022）04-0512-03对于药物分析来说，药物样品的前处理十分重要，而且这是一个必要的环节，现已成为一个具有挑战性在问题。

样品前处理将被测组分从复杂样品中分离出来，制成便于测定的形式，同时，如果被测组分选定的分析方法难以检测，还需要通过样品衍生化处理为另一种适合检测的化合物。

对于固相样品，常常采取传统样品的制备方法，比如固相萃取法、液相萃取法、液液微萃取法。

本文综述介绍了近几年来多种萃取方法在药物分析前处理中的应用。

1 固相萃取1.1 固相萃取（SPE）固相萃取技术是一种高效、方便的提取技术，可同时完成样品的集中与洗涤，且萃取速度快。

吴莹[1]等利用固相萃取方法测定腹膜透析液中1,2-己二胺含量，该方法以甲醇、0.1%甲酸为流动相，进行洗脱，该方法灵敏度高，回收率为97.8%~108.0%。

邓晓晴[2]等建立串联质谱-固相萃取液相色谱测定人体血浆中抗抑郁药物含量，回收率为90.0%~97.3%。

狄鑫[3]等将固相萃取-液相色谱萃取串联，测得水中诺氟沙星、罗红素等7种抗生素含量，加标回收率为68%~112%，可证明该回收方法回收率高、精密度好。

周瑞铮[4]等利用固相萃取结合液色谱-串联质谱法测定淡水鱼中残留的磺胺类和喹诺酮类药物。

在不同浓度下，测得平均回收率为84.4%~114.6%。

UHPLC法结合超滤法测定连钱草中3种成分的血浆蛋白结合率作者：陈伟康刘德鸿熊明朋袁惠周国平来源：《中国药房》2021年第22期中图分类号 R969.1;R927.2 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2021）22-2720-04DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2021.22.06摘要目的：建立测定连钱草中迷迭香酸、咖啡酸、绿原酸血浆蛋白结合率的方法。

方法：采用超高效液相色谱法结合超滤法测定连钱草中迷迭香酸、咖啡酸、绿原酸在新西兰兔体内的血浆蛋白结合率。

以Phenomenex Luna® C18为色谱柱，以乙腈（A）-0.1%甲酸溶液（B）为流动相进行梯度洗脱，流速为0.5 mL/min，柱温为45 ℃，检测波长为327 nm，进样量为3 μL。

结果：在低、中、高质量浓度下，迷迭香酸的血浆蛋白结合率分别为（97.78±1.67）%、（94.32±1.42）%、（95.12±1.51）%（n=3），咖啡酸的血浆蛋白结合率分别为（90.12±2.33）%、（89.53±1.98）%、（90.23±1.56）%（n=3），绿原酸的血浆蛋白结合率分别为（63.23±2.12）%、（67.87±1.06）%、（62.34±1.34）%（n=3）。

结论：所建方法操作简单、分析时间较短，可用于测定连钱草中迷迭香酸、咖啡酸、绿原酸的血浆蛋白结合率。

关键词连钱草;迷迭香酸;咖啡酸;绿原酸;血浆蛋白结合率;超高效液相色谱;超滤法;兔Determination of Plasma Protein Binding Rate of 3 Components from Glechoma longituba by UHPLC Combined with UltrafiltrationCHEN Weikang，LIU Dehong，XIONG Mingpeng，YUAN Hui，ZHOU Guoping（Jiangxi Institute for Drug Control/NMPA Key Laboratory of Quality Evaluation of Chinese Patent Medicine/Jiangxi Province Engineering Research Center of Drug and Medical Device Quality，Nanchang 330029， China）ABSTRACT OBJECTIVE： To establish a method for the determination of plasma protein binding rate of rosmarinic acid， caffeic acid and chlorogenic acid from Glechoma longituba. METHODS： UHPLC method combined with ultrafiltration method was adopted to determine the plasma protein binding rate of rosmarinic acid， caffeic acid and chlorogenic acid from G. longituba in the plasma of New Zealand rabbits. The determination was performed on a Phenomenex Luna®C18 column with mobile phase consisted of acetonitrile （A）-0.1% formic acid solution （B）（gradient elution） at the flow rate of 0.5 mL/min. The column temperature was set at 45 ℃， and the detection wavelength was 327 nm. The sample size was 3 μL. RESULTS： At low， medium and high concentrations， the plasma binding rates of rosmarinic acid were （97.78±1.67）%，（94.32±1.42）%，（95.12±1.51）%， respectively （n=3）; those of caffeic acid were（90.12±2.33） %，（89.53±1.98）%，（90.23±1.56）%， respectively （n=3）; those of chlorogenic acid were （63.23±2.12）%，（67.87±1.06）%，（62.34±1.34）%， respectively （n=3）. CONCLUSIONS： Established method is easy to operate and shorter time for analysis. It can be used to determine the plasma protein binding rate of rosmarinic acid， caffeic acid and chlorogenic acid in G. longituba.KEYWORDS Glechoma longituba; Chlorogenic acid; Caffeic acid; Rosmarinic acid; Plasma protein binding rate; UHPLC; Ultrafitration; Rabbit連钱草又名活血丹、钹儿草、佛耳草，为唇形科植物活血丹Glechoma longituba（Nakai）Kupr.的干燥地上部分[1]。

收稿日期:2003212217;　修订日期:2004202217作者简介:金　珠(19762),女(汉族),吉林长春人,现任吉林天药科技股份有限公司药学分项负责人,硕士学位,主要从事中药新药研发.(药理药化(高效液相色谱法测定冬凌草中冬凌草甲素及冬凌草乙素的含量金　珠1,周丽莉2(1.吉林天药科技股份有限公司,吉林长春　130012;2.沈阳药科大学制药工程学院,辽宁沈阳　110016)摘要:目的:建立冬凌草的质量控制方法。

方法:高效液相色谱法同时对冬凌草中冬凌草甲素、冬凌草乙素进行了含量测定。

采用C 18柱,以甲醇2水(55∶45)为流动相,检测波长238nm 。

结果:冬凌草甲素的浓度在0.152～1.52Λg m l ,冬凌草乙素的浓度在0.2～2Λg m l 范围内,线性关系良好(冬凌草甲素r =0.9998,n =5;冬凌草乙素r =0.9992,n =5),平均回收率冬凌草甲素为99.1%,R SD 为0.4%;冬凌草乙素为98.0%,R SD 为0.6%。

结论:该法准确、灵敏、可靠,可用于冬凌草的质量控制。

关键词:高效液相色谱法;　冬凌草;　冬凌草甲素;　冬凌草乙素中图分类号:R 284.2 文献标识码:A 文章编号:100820805(2004)0620321201D eterm i na tion of Or idon i n and Pon ic id i n i n R abdos ia rubescens by HPLCJ I N Z hu 1,ZHOU L i 2li2(1.J ilin T iany ao S cience and T echnology Co .L td .,Chang chun 130012,Ch ina ;　2.P ha r m acy E ng i 2neering Colleg e of S heny ang P ha r m aceu tica l U n iversity ,S heny ang 110016,Ch ina )Abstract :Objective :To establish a quality contro l m ethod fo r R abd osia rubescens .M ethods :H PL C analysis w as carriedout fo r the deter m inati on of o ridonin and ponicidin w ith C 18co lum n and m ethano l 2w ater (55∶45)as the mobile phase .T he detecti on w avelength w as 238nm .Results :T he liner range w as 0.152～1.52Λg m l (r =0.9998,n =5,o ridonin ),0.2～2Λg m l (r =0.9992,n =5,ponicidin ).T he average recovery w as 99.1%(R SD =0.4%,o ridonin ),98.0%(R SD =0.6%,ponicidin ).Conclusion :T he m ethod w as p roved to be p recise ,sensitive and reliable .It can be used fo r the quality contro l of R abd osia rubescens.Key words :H PL C ;　R abdo sia rubescens ;　O ridonin ;　Ponicidin 冬凌草为唇形科香茶菜属植物碎米亚R abd osia rubescens(H em sl )S .Y .W uet H suen .,又名冰凌草。

冬凌草甲素纳米粒中主药含量及包封率的测定郭波红;李晓芳;廖裕威;罗麒;张可擎【摘要】目的建立冬凌草甲素纳米粒中主药含量及包封率的测定方法.方法采用高效液相色谱法测定药物含量,Diamonsil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相为甲醇-水(60:40);流速1.0 mL· min-1;检测波长240nm;柱温30℃;采用葡聚糖凝胶法分离冬凌草甲素纳米粒游离药物以测定包封率.结果冬凌草甲素在2.0～200 μg·mL-1线性良好(γ=0.9999),低、中、高浓度的平均回收率分别102.5％(RSD 1.56％);97.8％ (RSD 1.37％);98.3％(RSD 0.22％),所测纳米粒的平均包封率为21.8％.结论该方法准确可靠,简单快速,重复性好,可用于冬凌草甲素纳米粒药物含量及包封率的测定.【期刊名称】《佛山科学技术学院学报（自然科学版）》【年(卷),期】2015(033)001【总页数】4页(P1-4)【关键词】冬凌草甲素;纳米粒;含量测定;包封率【作者】郭波红;李晓芳;廖裕威;罗麒;张可擎【作者单位】广东药学院药科学院,广东广州,510006;广东药学院药科学院,广东广州,510006;广东药学院药科学院,广东广州,510006;广东药学院药科学院,广东广州,510006;河南化工职业学院,河南郑州,450042【正文语种】中文【中图分类】R917冬凌草甲素（oridonin）为唇形科香茶菜属植物冬凌草的主要抗癌有效成分，抗癌谱较广，可通过多种途径诱导癌细胞凋亡，对人肝癌BEL—7402细胞、人白血病HL-60细胞、食管癌CaES—17细胞及结肠癌HCT8细胞等均有明显细胞毒作用［1-3］。

冬凌草甲素几乎不溶于水，常规注射剂多依靠加入表面活性剂或有机溶剂来提高其溶解性，长期静脉滴注易引起患者血管发炎和疼痛等副作用。

本文中，实验将冬凌草甲素用具有良好的生物可降解性和生物相容性的聚乳酸—羟基乙酸（PLGA）为材料制备纳米粒，以提高其溶解度和生物利用度，实现药物的缓慢释放，延长药物的作用时间，改变药物体内分布等。

临床医药文献杂志Journal of Clinical Medical 2017 年第 4 卷第 21 期2017 Vol.4 No.213972冬凌草甲素提纯与分离陈松（承德市食品药品检验检测中心，河北承德 067000）【摘要】冬凌草又称冰凌草，其中含有的冬凌草甲素的提纯与分离一直是业界较为关注的重点。

目前较为常用的冬凌草甲素的提纯法有实验室内常用的乙醇提取法，但由于提取中所使用的溶剂毒性较大，提取的纯度不高，因此未能大规模应用到工业化生产中。

而超临界CO2萃取工艺属于新工艺，该方法得出的结果提取效率高，适合大规模生产。

本文主要简述该两种提纯分离方式，进行对比并得出结论。

【关键词】冬凌草甲素；乙醇提取法；柱色谱法；超临界CO2萃取法【中图分类号】R284.2 【文献标识码】A 【文章编号】ISSN.2095-8242.2017.21.3972.01冬凌草是一种唇形科香茶菜属的植物，在过去的研究中发现从冬凌草中提取的冬凌草甲素是一种贝壳杉烯二萜类的化合物，这是一种有抗癌功效的成分，能有效地靶向杀死食管癌109细胞、肝癌细胞BEL-7402、胃腺癌MGc80-3细胞，阻止多种植物性动物肿瘤如ARS，ECA，P388等的扩散，同时还能抑制食管上皮细胞的恶性增生。

目前在临床上，也多用于肝癌、食管癌和胰腺癌的治疗，具有强抗癌活性的冬凌草甲素可以说是医学界研究重点，因此如何能高效省时地提取纯度高的冬凌草甲素，也是研究的重心。

本文主要简述乙醇提取法及超临界CO2萃取工艺与柱色谱技术分离法两种提纯分离方式，进行对比并得出结论。

1 仪器与试剂多能式提取机组;工业用95%乙醇；粉状活性炭；甲醇（分析纯、色谱纯）；石油醚、丙酮、氯仿（分析纯）；冬凌草购自山东某药厂；冬凌草甲素对照品（含量98.3%）；柱层析硅胶；柱色谱硅胶、薄层色谱硅胶G；CO2（山东某气体有限公司）SFE-2000型超临界流体萃取装置；Agilent1100型高效液相色谱仪。

冬凌草甲素对膀胱癌T24细胞增殖的抑制作用作者：赵冬刘红耀赵唤来源：《中国当代医药》2013年第14期[摘要] 目的探讨不同浓度的冬凌草甲素（ORI）在不同时间点对膀胱癌T24细胞增殖的抑制作用，为临床决策提供参考依据。

方法将冬凌草甲素作用于T24细胞，利用酶标仪在不同时间点（λ=570 nm）测定不同浓度的冬凌草甲素吸光度，同样方式用MTT法检测细胞的抑制率，流式细胞仪测定细胞凋亡率，其数值均以均数±标准差表示，每组结果由两位研究者重复测量2次校对。

结果随着培养时间的延长及浓度的增加，T24细胞的吸光度数值呈明显下降趋势，差异有统计学意义（P < 0.05）。

浓度为8 μmol/L时抑制率递增，16 μmol/L时抑制率已接近50%，而32 μmol/L时抑制率最高可达70%以上，变化显著，差异有统计学意义（P < 0.05）。

随时间、浓度梯度的变化，T24细胞凋亡率不断增加，最高可达60%以上，差异有统计学意义（P < 0.05）。

证明冬凌草甲素对膀胱癌T24细胞增殖的抑制具有明显的浓度-效应与时间-效应的关系。

结论冬凌草甲素可诱导膀胱癌T24细胞凋亡，有明显的抗肿瘤作用。

[关键词] 冬凌草甲素；T24细胞；吸光度；抑制；凋亡[中图分类号] R737 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2013）05（b）-0004-03冬凌草又称为冰凌草、雪花草，因形似蝶状冰凌片而得名，在冬凌草植被中提炼出的一种二萜类抗肿瘤天然有机化合物成分为冬凌草甲素（ORI）。

近年来有大量文献曾研究冬凌草具有抗肿瘤作用[1-2]，常用于食管癌、胃癌的治疗，其无明显毒副作用，效果较好[3]。

临床研究中曾报道，冬凌草有明显的抑制膀胱肿瘤的作用[4]，车宪平等[5]也曾研究过预防小鼠膀胱癌的复发，具体作用机制尚不明确。

基于此，本次实验试探讨ORI对膀胱癌T24细胞增殖的抑制作用及机制。

液质联用技术测定益母草碱的血浆蛋白结合率王建塔;糜玲;陈瑞;汤磊【摘要】测定益母草碱在大鼠血浆中的血浆蛋白结合率,为临床安全用药及血浆蛋白测试方法研究提供依据.以超高效液相色谱-质谱联用为检测手段,采用超滤法考察益母草碱与大鼠血浆蛋白的结合情况.当益母草碱在大鼠血浆中质量浓度为40~800μg/L时,大鼠血浆蛋白结合率较高且无浓度依赖性.结果证明建立的超滤法和超高效液相色谱-质谱联用的检测方法能够满足血浆蛋白结合率测定的要求.【期刊名称】《广州化工》【年(卷),期】2017(045)013【总页数】3页(P114-116)【关键词】益母草碱;血浆蛋白结合率;超滤法;液质联用【作者】王建塔;糜玲;陈瑞;汤磊【作者单位】贵州医科大学, 贵州贵阳 550004;贵州医科大学, 贵州贵阳 550004;贵州医科大学, 贵州贵阳 550004;贵州医科大学, 贵州贵阳 550004【正文语种】中文【中图分类】R917益母草是植物益母草的地上部分，益母草碱(Leonurine)是益母草的主要有效成分之一，具有广泛的生物学活性[1]。

近年来研究揭示了其治疗前列腺增生有较好的疗效，同时还具有抗炎镇痛、兴奋子宫、改善抗血小板聚集、改善血循环、保钾利尿和保护心肌等功效[2]。

药物的血浆蛋白结合率是药物药动学的重要参数，有助于解释药物在体内的过程，也是药物临床评价不可缺少的指标[3-6]，对于设计合理的给药方案和新药安全评价，药物血浆蛋白结合率具有重要指导意义。

药物吸收入血后，如果和血浆蛋白结合形成结合型药物，将不能被机体处置，只有未与血浆蛋白结合的游离型药物有药理活性，所以药物与血浆蛋白的结合率(游离型药物的浓度)与药物的药效学、毒理学过程密切相关[7-10]。

本实验采用超滤法测定益母草碱与大鼠血浆中的蛋白结合率[11-12]，为益母草碱的有效应用及测试方法的研究提供一定的理论依据。

1.1 仪器G2-XS QTof型UPLC-QTOF(包括四元梯度泵、真空脱气机、自动进样器、柱温箱、电喷雾四级杆串联飞行时间质谱仪、MassLynx V4.1质谱工作站)，美国沃特世公司；XH-B型漩涡混合器，江苏康健医疗用品有限公司；JN300-2氮气吹扫仪，苏州吉米诺仪器有限公司；X1高速离心机，Gene Company Limited；KH-600E 超声波清洗器，昆山禾创超声仪器有限公司；AE240十万分之一电子天平。

实验二药物血浆蛋白结合率测定前言：药物血浆蛋白结合率是药物与血浆蛋白结合的量占药物总浓度的百分率，是药物代谢动力学的重要参数之一。

它影响药物在体内的分布、代谢与排泄，从而影响其作用强度和时间，并往往与药物的相互作用及作用机制等密切相关。

研究药物血浆蛋白结合率的方法包括常规的平衡透析法、超滤法、超速离心法、凝胶过滤法、分配平衡法、稳定同位素-GC-MS法、光谱技术等。

本实验主要通过采用平衡透析法对药物血浆蛋白结合率进行测定，对于新药研究开发和指导临床合理用药都具有重要意义。

关键词：血浆蛋白结合率平衡透析法磺胺嘧啶【实验原理】平衡透析法的基本原理是将蛋白置于一个隔室内，用半透膜将此隔室与另一隔室隔开。

蛋白等大分子不能通过此半透膜，但系统中游离配基可自由通过。

当达到平衡时半透膜两侧自由配基的浓度相等。

若系统中自由配基的总量已知，测定不含蛋白隔室中自由配基的浓度，即可推算与蛋白结合的配基量。

再用重氮化偶合比色测定法对磺胺药的含量进行测定。

其测定原理是具有游离氨基的磺胺药在酸性介质中重氮化后，可与N-(1萘基）乙二胺产生偶合反应生成紫红色偶氮染料，再与同样处理的磺胺药标准液比较，即可求得剩余的亚硝酸影响测定，用氨基磺酸胺分解除去。

【材料与试剂】1. 药物10%磺胺嘧啶钠注射液2. 试剂15%三氯醋酸溶液0.1%亚硝酸钠溶液0.5%氨基磺酸胺溶液0.1%二盐酸N-（1萘基）-乙二胺溶液磺胺嘧啶钠贮存标准液磺胺嘧啶钠应用标准液(3.75ug/ml)3.透析液pH7.4的0.02M 磷酸盐缓冲液，内含0.15M NaCl4. 鸡、兔各3只5. 管状半透膜周长5cm，长约12cm【试剂的配制】1. 0.1%二盐酸N-（1萘基）-乙二胺溶液0.5 g溶于95 %乙醇约400 mL中，再用乙醇稀释至500ml，棕色瓶于冰箱中保存2.贮存标准液取标准品0.125g溶于蒸馏水中，并稀释至1000mL。

如不溶于水，可先溶于0.1 mol/L氢氧化钠25mL中，再加4mol/L硫酸175 mL，用蒸馏水稀释至1000mL。

2011年4月Vo.l 29No .4April 2011Chi n ese Journal of Chromatography358~361研究论文DOI :10.3724/SP .J .1123.2011.00358*通讯联系人:张秀莉,副研究员,主要研究天然小分子和多肽的分离分析.Te :l (0411)84379521,E m ai:l zhangx i uli @dicp .ac .cn .基金项目:重大新药创制专项(N o .2009ZX 09313 003)和国家自然科学基金面上项目(No .30801513).收稿日期:2010 12 08高效亲和色谱法测定2种中药成分与人血清白蛋白的结合率蔡晓明1, 张 岩2, 于 龙1, 郭志谋1, 张秀莉1*, 梁鑫淼1(1.中国科学院大连化学物理研究所,中国科学院分离分析重点实验室,辽宁大连116023;2.Un ivers ity of C alifon ia Irvi ne ,CA 92697 4625,USA )摘要:采用高效亲和色谱技术(HPAC )对中药成分与人血清白蛋白(HSA )的相互作用进行了研究。

首先采用点击化学的方法制备了表面键合有HSA 蛋白的硅胶固定相并装填成亲和色谱柱,根据药物在该色谱柱上与空白硅胶柱上的保留时间差计算得到药物与蛋白的结合率。

利用该方法测得模型化合物华法令与H SA 的结合率与文献中采用超滤法测得的结果基本一致,表明该方法可用于测定药物与HSA 的结合率。

在此基础上用该方法测定了葛根素和告依春两种中药成分与HSA 的相对结合率分别为10 26%和10 20%。

同时用超滤的方法测定了葛根素与H SA 的结合率为14 25%。

结果表明,HPAC 可以作为研究药物与蛋白相互作用的一种简便可行的方法,其测定结果与超滤方法一致。

关键词:高效亲和色谱法;人血清白蛋白;葛根素;告依春;结合率;超滤中图分类号:O 658 文献标识码:A 文章编号:1000 8713(2011)04 0358 04Detection of drug hu m an seru m albu m in b ind i ng ratios of t woCh i nese m edici nal ingred ients by h igh perfor m anceaffinity chro matographyCAI Xiao m i n g 1,Z HANG Yan 2,YU Long 1,GUO Zhi m ou 1,ZHANG X iuli 1*,LI ANG X in m iao1(1.CAS K ey L abora tory of Sepa ra tion Sc ien ce for An a ly tica l Che m istry ,D a lian In stitu te o fChe m ica l Phy sics,Chin ese Acade m y o f Scie n ces,Da lian 116023,Ch i n a;2.Un iver sity o f Ca lifon ia Ir vin e,CA 92697 4625,U SA )A bstract :The i n teraction of t wo Chinese m edici n al i n gredi e nts and hum an seru m al b u m in (HSA )has been investigat ed by high perf or m ance affi n it y chro m atography (HPAC ).HSA bounded silica based stati o nary phase w as prepared based on t he click chem istry strategy ,and packed in a colu m n (nam ed as HSA col u m n).The drug HSA binding rati o was calculated fro m t he diff erence of t he drug s ret enti o n ti m es on the H SA colu m n and silica col u m n (blank col u m n).T he warfari n HSA bindi n g rati o det er m ined by t his m ethod was s i m ilar to t he refer ence reported value by ultrafiltration m et hod .The results i n dicat ed that the new HSA colu m n and t he HPAC m et hod can be used for t he detection of binding ratio of drug and HSA .T he bi n di n g ratios of puerari n and goitri n deter m i n ed by the HPAC m ethod were 10 26%and 10 20%,respecti v e l y .And the binding rati o of puerarin deter m i n ed by ultrafiltrati o n was 14 25%.A ll t hese results showed t hat HPAC is a usef ul m et hod t o i n vestigate the interacti o n bet ween drugs and protein .K ey words :high perf or m ance affinity chro m atography (HPAC);hu m an seru m albu m i n ;puer ari n ;goitrin ;binding ratio ;ultrafiltration 人血清白蛋白(hu m an seru m albu m in ,HSA)是由585个氨基酸残基组成的一条单肽链,相对分子质量约为66500,是血浆中含量最丰富的重要载体蛋白[1]。

2018Vol.19No.4高效液相色谱法测定冬凌草甲素脂质体的含量王知平（山西卫生健康职业学院，山西太原030012）摘要目的：建立高效液相色谱法（HPLC ）测定冬凌草甲素脂质体的含量。

方法：色谱柱：Agilent Zorbax C 18柱（250mm ×4.6mm ，5μm ），流动相：甲醇-水（55∶45），检测波长：241nm ，柱温：30℃，流速：1mL/min ；进样量：20μL 。

结果：冬凌草甲素在10~100μg/mL 之间线性关系良好，r =0.9995。

日内、日间RSD 为0.8%和1.2%，重复性RSD 为1.92%，方法回收率平均为99.9%，RSD 为0.77%，样品的平均包封率为95.0%。

结论：该法简便，准确度高，可用于冬凌草甲素脂质体的含量测定。

关键词冬凌草甲素；高效液相色谱；含量测定中图分类号：R285文献标识码：Ａ文章编号：1671-0258（2018）04-0034-03［作者简介］王知平，讲师，E-mail ：wzp7931@Determination of oridonin in oridonin Liposome by HPLCWang Zhiping（Shanxi Health Vocational College ，Taiyuan Shanxi 030012）Abstract Objective ：A high performance liquid chromatography （HPLC ）method was established for the determination oforidonin in ozagrel hydrochloride liposome.Methods ：A C 18column （250mm ×4.6mm ，5μm ）was used with the mobile phase of methanol -H 2O （55∶45）at the detection wavelength of 241nm.The flow rate was at 1.0mL/min.The column temperature was 30℃.20μL sample was injected.Result ：The linear range of oridonin was 10~100μg/mL （r =0.9995）.The inter-and intra-day RSD was 0.8%，1.2%.The method recoveries were 99.9%.The average entrapment efficiency of tartrate indoquinoline liposome was 99.9%（RSD =0.77%）.Conclusion ：This method is simple ，accurate and can be used to control the quality of oridonin Liposome.Key words oridonin ；HPLC ；content determination冬凌草甲素（oridonin ）属于贝壳杉烯二萜类化合物，是从唇形科（Labiatae ）香茶菜属（Isodon ）植物冬凌草中提取出的主要成分，该物质具有抗癌活性[1-2]。

1149［基金项目］辽宁省自然基金（20092055）；辽宁省教育厅科学研究一般项目（L2012150）［作者简介］关瑾，女，博士，副教授，研究方向：药物分离分析的新方法新技术。

联系电话：（024）89383299，E-mail ：yinghua_401@163．com 。

药物-血浆蛋白结合率测定方法的研究进展关瑾，丁爽，刘芷含，董西鑫，阎峰，石爽（沈阳化工大学应用化学学院，沈阳110142）［摘要］药物与血浆蛋白的结合作用影响药物在体内的吸收、分布、代谢与排泄，从而影响药理效应强度和时间。

药物进入人体，只有游离的药物分子能够跨膜运转并与受体结合发生药理效应，因此测定药物与血浆蛋白结合率在新药研发及临床研究中非常重要。

本文主要评述了近年来相关研究的技术和方法，包括平衡透析法、微透析法、超滤法、超速离心法，以及以光谱学为基础的方法（如紫外-可见吸收光谱法，荧光光谱法和表面等离子体子共振技术法等）和以色谱法为基础的方法（如高效亲和色谱法、高效前沿分析法等）。

此外，对各种方法的原理、优缺点进行了概括总结，并对其发展前景进行了展望。

［关键词］药物；血浆蛋白结合率；测定方法；毛细管电泳法；应用［中图分类号］Ｒ914．1［文献标志码］A ［文章编号］1003－3734（2014）10－1149－05Ｒecent advances in determination methods of drug protein bindingGUAN Jin ，DING Shuang ，LIU Zhi-han ，DONG Xi-xin ，YAN Feng ，SHI Shuang（Institute of Applied Chemistry ，Shenyang University of Chemical Technology ，Shenyang 110142，China ）［Abstract ］Binding of drugs to plasma protein is critically involved in drug pharmacokinetics （i．e．，ab-sorption ，distribution ，metabolism ，and elimination ）and pharmacodynamics （pharmacological effects ）．Generally the free drug fraction is available for diffusion and transport across cell membranes．It is therefore highly important to estimate drug-binding ability to these macromolecules in the early stages of drug discovery and in clinical prac-tice．This review focuses on the most important approaches used to characterize drug-protein binding sciences inclu-ding equilibrium dialysis ，micro-dialysis ，ultrafiltration ，ultracentrifugation ，spectroscopy methods （e．g．，ultravio-let-visible absorption spectrum ，fluorescence spectrum and surface plasmon resonance ，etc．）and chromatography methods （e．g．，high performance affinity chromatography ，high performance frontal analysis ，etc ）．A description of the principle of each method with its inherent strengths and weaknesses is outlined．Finally ，the future prospects in this field are also discussed．［Key words ］drug ；protein binding ；determination methods ；capillary electrophoresis ；applications 药物血浆蛋白结合率是药物与血浆蛋白结合的量占药物总浓度的百分率，是药物代谢动力学的重要参数之一［1］。

冬凌草甲素抗乳腺癌作用及机理研究一、内容概述具有多种药理活性。

近年来研究发现冬凌草甲素具有抗乳腺癌的作用，并对其作用机制进行了初步探讨。

本文旨在系统地分析冬凌草甲素对乳腺癌细胞株的抑制作用及其可能的分子机制，为进一步研究其在乳腺癌治疗中的应用提供理论依据。

首先本文通过实验验证了冬凌草甲素对乳腺癌细胞株的抑制作用。

采用MTT法测定了不同浓度冬凌草甲素对乳腺癌细胞株A549和MCF7的生长抑制率，结果显示冬凌草甲素可显著抑制乳腺癌细胞株的生长，且随着药物浓度的增加，抑制作用逐渐增强。

这一实验结果为后续研究提供了有力支持。

其次本文探讨了冬凌草甲素抗乳腺癌的作用机制，通过免疫组化、Western blot等技术，观察了冬凌草甲素对乳腺癌细胞株中相关信号通路的影响。

研究发现冬凌草甲素可以下调乳腺癌细胞株中ER、PR和Ki67等蛋白表达水平，同时上调BRCA1和BRCA2基因的表达，从而影响乳腺癌细胞的增殖、侵袭和转移过程。

此外本文还对冬凌草甲素抗乳腺癌的可能靶点进行了初步筛选，发现了多个与肿瘤发生发展密切相关的靶点。

本文总结了冬凌草甲素抗乳腺癌的作用及机理研究的主要成果，并展望了未来的研究方向。

通过对冬凌草甲素抗乳腺癌作用及机理的研究，有助于揭示其作为一种新型抗乳腺癌药物的潜在优势，为乳腺癌的治疗提供新的思路和方法。

1. 研究背景和意义乳腺癌是全球女性最常见的恶性肿瘤之一，严重威胁着女性的生命健康。

根据世界卫生组织统计数据显示，2020年全球约有241万例乳腺癌病例，占所有癌症死亡的近四分之一。

乳腺癌的发生与多种因素有关，如遗传、环境、生活方式等。

其中荷尔蒙水平异常是乳腺癌的重要诱因之一，冬凌草甲素(Vitex agnuscastus extract,简称VAE)作为一种传统的中草药，具有调节内分泌功能的作用，已被证实对乳腺癌具有一定的抗肿瘤作用。

因此研究冬凌草甲素抗乳腺癌的作用及机理，对于揭示其在乳腺癌防治中的应用价值具有重要的理论和实践意义。

2418［基金项目］郑州大学研究生科学研究基金（11Y03105）［作者简介］李晓天，男，副教授，硕士生导师，主要从事药动学研究。

联系电话：（0371）67781889，E-mail ：lixt@zzu．edu．cn 。

·实验研究·超滤法测定冬凌草乙素的血浆蛋白结合率李晓天1，褚延乐1，吴凤娟2，王琳茜1，于彤1，郝连起1，郭茂文1（1郑州大学药学院，郑州450001；2郑州大学第一附属医院，郑州450001）［摘要］目的：建立大鼠血浆中冬凌草乙素的高效液相色谱（HPLC ）分析方法，测定冬凌草乙素的血浆蛋白结合率，为临床安全用药提供参考。

方法：采用超滤法结合HPLC 法测定冬凌草乙素与大鼠血浆蛋白的结合率。

结果：当冬凌草乙素在大鼠血浆中浓度为100，600，3200ng ·mL －1时，冬凌草乙素与大鼠血浆的蛋白结合率分别为（70．9ʃ3．4）%，（71．0ʃ3．0）%，（69．6ʃ2．9）%。

结论：冬凌草乙素与大鼠血浆蛋白具有中等强度的结合，并且在考察浓度范围内血浆蛋白结合率无浓度依赖性。

［关键词］冬凌草乙素；超滤法；高效液相色谱法；血浆蛋白结合率［中图分类号］Ｒ969．1［文献标志码］A［文章编号］1003－3734（2013）20－2418－05Determination of plasma protein binding of ponicidin by ultrafiltrationLI Xiao-tian 1，CHU Yan-le 1，WU Feng-juan 2，WANG Lin-xi 1，YU Tong 1，HAO Lian-qi 1，GUO Mao-wen 1（1School of Pharmacy ，Zhengzhou University ，Zhengzhou 450001，China ；2The First Afflicated Hospital of Zhengzhou University ，Zhengzhou 450001，China ）［Abstract ］Objective ：To establish an HPLC analysis method for determination of ponicidin in rat plasma and to determine the plasma protein binding rates of ponicidin for providing information on the safe use of medica-tion．Methods ：The protein binding rates of ponicidin in rat plasma samples were determined by ultrafiltration and HPLC．Ｒesults ：The plasma protein binding rate of ponicidin with rat plasma were （70．9ʃ3．4）%，（71．0ʃ3.0）%，and （69．6ʃ2．9）%at the concentration of 100，600，and 3200ng ·mL －1，respectively．Conclusion ：Ponicidin has medium binding ability to plasma protein．The method has good repeatability ，sensitivity ，specificity ，and simpleness ，thus fulfills the requirement．The plasma protein binding of ponicidin was independent of the in-vestigated concentrations．［Key words ］ponicidin ；ultrafiltration ；HPLC ；plasma protein binding rate 冬凌草［Ｒabdosia rubescens （Hemsl．）Hara ］系唇形科香茶菜属植物冬凌草的地上部分，学名碎米亚，广泛分布于我国黄河流域。

冬凌草甲素对HL-60细胞p53表达及细胞周期的影响赵国英;赵铭锋;郭金将;张海鸿;王晖【摘要】目的探讨冬凌草甲素对HL-60 细胞p53表达及细胞周期的影响.方法通过PI染色,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡峰,并以RT-PCR检测p53基因的表达.结果流式细胞仪分析显示,冬凌草甲素处理后使细胞周期发生变化:G1期、S期细胞的比例减少,G2/M期细胞的比例增加, 凋亡的细胞数比例增多,且随着药物浓度的增加而逐渐增加.RT-PCR检测结果显示, 20 μmol/L冬凌草甲素作用后,与对照组相比,HL-60细胞p53 mRNA水平显著升高,且随时间延长表现得更为明显.结论冬凌草甲素能使细胞周期发生变化和p53基因的上调,从而诱导细胞发生凋亡.【期刊名称】《滨州医学院学报》【年(卷),期】2010(033)001【总页数】4页(P12-14,17)【关键词】HL-60细胞;冬凌草甲素;细胞周期;p53【作者】赵国英;赵铭锋;郭金将;张海鸿;王晖【作者单位】滨州医学院附属医院儿科,滨州市,256603;滨州医学院附属医院病理科;滨州医学院附属医院儿科,滨州市,256603;滨州医学院附属医院儿科,滨州市,256603;滨州医学院附属医院儿科,滨州市,256603【正文语种】中文【中图分类】R562.2白血病是儿童最常见的恶性肿瘤,近年来其疗效有很大提高,但仍有部分患儿对化疗不敏感和耐药,寻找新型治疗白血病的药物成为临床研究热点之一。

研究证明,冬凌草甲素具有广泛的抗肿瘤作用,并对白血病细胞生长具有明显抑制作用[1～3],但其诱导白血病细胞凋亡的相关机制目前尚未明确。

研究冬凌草甲素对白血病细胞的细胞周期变化及其对 p53基因表达的影响,对进一步探索冬凌草甲素促进白血病细胞凋亡相关机制具有重要意义。

1.1 实验材料人白血病细胞株 HL-60细胞为山东大学血液病中心实验室冻存。

冬凌草甲素 (Oridonin)购自上海卓康生物科技有限公司,规格 20 mg/支(C≥98%);RPMI-1640为美国 Hyclone公司产品;小牛血清为杭州四季青生物制品厂产品;二甲基亚砜(DMSO)、四甲基偶氮唑蓝(MTT)为 AMRESCO产品;膜联蛋白V(Annexin V)凋亡检测试剂盒购于 Biovision公司,coll细胞分离液、磷酸盐(PBS)缓冲液、PI(碘化丙啶)、Hoechst染液为 Sigma公司产品。

超滤法测定冬凌草甲素的血浆蛋白结合率目的测定冬凌草甲素在健康人血浆、大鼠血浆和家兔血浆中的蛋白结合率，为设计合理的给药方案提供依据。

方法采用超滤法结合高效液相色谱法（HPLC）对冬凌草甲素与大鼠、家兔和健康人血浆的蛋白结合率进行测定。

结果冬凌草甲素在覆盖临床给药范围的5.4，21.6和108.0 μg/mL下与健康人血浆的血浆蛋白结合率分别为80.6%，78.3%，76.2%，与大鼠的血浆蛋白结合率分别为69.3%，67.5%，68.1%，与家兔的血浆蛋白结合率分别为65.2%，66.7%，64.3%。

覆盖临床给药浓度的3个浓度的冬凌草甲素在同种血浆中血浆蛋白结合率差异无统计学意义（P > 0.05）。

结论结果表明本法简便快速、灵敏度高、专属性好，能够满足测试生物样品的要求，超滤法结合高效液相色谱法可用于冬凌草甲素血浆蛋白结合率的检测。

在本研究试验浓度范围内，冬凌草甲素的血浆蛋白结合率与药物浓度无显著相关性，不同种血浆的蛋白结合率试验结果表明，冬凌草甲素与健康人血浆、大鼠血浆和家兔血浆蛋白均具有中等强度的结合。

标签：冬凌草甲素；血浆蛋白结合率；超滤法；HPLC冬凌草甲素（oridonin）是唇型科香茶菜属植物冬凌草Rabdosia rubescens （Hemsl.）Hara.中提取的一种贝壳杉烯二萜类化合物，具有较强的抗肿瘤活性，对人胃癌SGC-7901细胞、食道癌109细胞、肝癌BEL-7402细胞等多种肿瘤细胞均呈现较好的抑制作用，而对正常细胞毒性较低[1]。

目前临床多用于食管癌、贲门癌、肝癌、食道癌和胰腺癌的治疗[2]。

虽然冬凌草甲素抗肿瘤作用显著，但由于冬凌草甲素的水溶性差[3]、半衰期短、生物利用度低和在水溶液中稳定性不好[4]等原因，其临床应用受到限制，目前临床上使用较广的仅有“癌得宁注射液”，癌得宁注射液通过使用表面活性剂和有机溶剂来增大冬凌草甲素的溶解度，达到临床给药浓度，但制剂刺激性大，长期使用容易引发静脉炎等不良反应[5]。