关于蚕豆病PPT幻灯片
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1.根据上述患儿的临床表现和实验室检查，初步判断患儿是何种疾病？（必答） 2.请设计实验进一步明确诊断。（必答） 要求：实验名称，实验方法，主要试剂和仪器，实验操作流程及注意事项，结
果如何分析。 3. 从生化代谢解释患儿的临床表现和实验室检查结果。（必答） 4. 要想探讨该病发生的分子基础，可以用哪些技术检测什么目的基因？（选答） 5. 患者体型瘦小与该病症是否有关，为什么？（选答）
分子基础
• G6PD缺乏症的分子基础是基因突变，G6PD基因 位于Xq28，由13个外显子及12个内含子组成，全 长20114bp，是一典型的看家基因。
• G6PD基因在基因组的位置， 如
• G6PD基因突变具有以下特点：多为单个碱基置 换的错义突变；大多数基因突变属于转化型突变， 常发生在CpG二核苷酸内的C-T的转换。
抗凝剂的试管中，·混匀。吸取50ul,加入
1ml蒸馏水，制成溶血液备测。
5.取试管2支，标1、2号后分别加入溶血液 0.1ml。
6.取反应试剂A反应试剂B各0.1ml,分别加至 1、2号试管内，然后将试管置于37℃水浴 箱中准确保温30min。
7.取出试管，立即向各管内加入终止液 2.5ml。
8.以蒸馏水作空白对照，于650nm 波长处 读取1、2号管的光密度值（S1 和S2） 。
主要检测的目的基因
• 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症患者的基因突 变.方法:用聚合酶链反应、限制性内切酶筛 查葡萄糖-6-磷酸酶基因1 388G→A、1 376G→T、1 360C→T、1 024C→T、 592C→T、517T→C、493A→G,487G→A、 392G→T、95A→G突变,用单链构象多态性 筛查葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因的所有外显 子,用核苷酸序列测定确定基因突变.
初步Leabharlann Baidu断患儿是患蚕豆病
实验方案
G-6-PD/6PGD定量比值法检测红细胞G-6-PD 活性
原理：NADPH可使氢化硝基四氮唑蓝 （NBT）由浅黄色还原为紫色的甲膳。此法 另设一管，将底物改为6PGD，两管所测的 值相比，即可得出比值。正常值为＞1．0， ≤1.0为缺乏。
·
4.空腹抽取患儿静脉血2 ml置于含0.4mlACD
实验室检查的生化代谢解释
在单核-吞噬细胞系统产生胆红素过多，超过 肝细胞的摄取、转化和排泄能力，造成血 清游离胆红素浓度过高。此时，血中结合 胆红素的浓度变化不大，重氮反应实验 （凡登白）间接反应阳性，尿胆红素阴性。 由于肝对胆红素的摄取、转化和排泄增多， 从肠道吸收的胆色素原增多，造成尿胆色 素原增多。
• 目前基因检测的方法主要有：荧光定量 PCR、基因芯片、液态生物芯片与微流控 技术等。
较普遍的是运用PCR技术
• 采用DNA 序列测定法检测G6PD 基因突变 情况，针对G6PD 外显子区域设计引物， 然后通过PCR 技术获得目的区域并进行测 序，最后将测序结果与G6PD 突变数据库 进行对比分析，从而得到检测结果。
临床表现的解释
皮肤、巩膜等组织的黄染 胆红素对含有弹性硬蛋白 的组织具有较大的亲和力，所以含有该组织的巩 膜、皮肤和粘膜最易出现黄疸。
黄疸加深时，尿、痰、泪液及汗液也被黄染，唾液 一般不变色。尿中出现血红蛋白尿而使尿液呈酱 油色。
精神萎靡似与胆盐对中枢神经系统的毒性作用有关。 呼吸急促与胆盐刺激迷走神经和抑制心脏传导有关
阅读下列案例，根据要求回答问题并设计实验进一步明确诊断。
案例： 患儿，男性，3岁，因面色苍白伴血尿1天入院。1天前食用新鲜蚕豆后，
今日出现恶心、呕吐、排尿呈酱油样色，面色苍白。据家长反映，患者的姐 姐也曾发生过类似情况。
体格检查：体温38℃，脉搏150次/分，呼吸40次/分，血压80/60mmHg， 呼吸急促，神清，萎靡，面色苍白，皮肤及巩膜黄染，体型较同龄人瘦小。 心、肺未及异常，肝、脾未触及，双肾区无叩击痛，神经系统检查未及异常。 实验室检查：红细胞 1.98×1012/L，血红蛋白53g/L，血清总胆红素 85.5µmol/L，结合胆红素13.7µmol/L，未结合胆红素71.8µmol/L，尿蛋白 （++），潜血(+)，尿胆红素(－)，尿胆素原(+)，尿液镜下未见红细胞。
患者体型瘦小与该病症是否有关？ • 答：无关，
9.G-6-PD/6PGD=S1/S2，G-6-PD/6PGD ≤1.0，则为G-6-PD缺乏，判断为阳性； G-6-PD/6PGD＞1.0，则为G-6-PD正常 ，判断为阴性。
蚕豆病机制
G6PD的缺陷不能提供足够的NADPH以维 持还原型谷胱甘肽（GSH）的还原性（抗氧 化作用），在遇到蚕豆种某种因子后更诱发 了红细胞膜被氧化，红细胞膜上的磷脂分子 中的不饱和脂肪酸氧化生成过氧化脂质，损 害细胞膜，导致红细胞的大量破坏。
果如何分析。 3. 从生化代谢解释患儿的临床表现和实验室检查结果。（必答） 4. 要想探讨该病发生的分子基础，可以用哪些技术检测什么目的基因？（选答） 5. 患者体型瘦小与该病症是否有关，为什么？（选答）
分子基础
• G6PD缺乏症的分子基础是基因突变，G6PD基因 位于Xq28，由13个外显子及12个内含子组成，全 长20114bp，是一典型的看家基因。
• G6PD基因在基因组的位置， 如
• G6PD基因突变具有以下特点：多为单个碱基置 换的错义突变；大多数基因突变属于转化型突变， 常发生在CpG二核苷酸内的C-T的转换。
抗凝剂的试管中，·混匀。吸取50ul,加入
1ml蒸馏水，制成溶血液备测。
5.取试管2支，标1、2号后分别加入溶血液 0.1ml。
6.取反应试剂A反应试剂B各0.1ml,分别加至 1、2号试管内，然后将试管置于37℃水浴 箱中准确保温30min。
7.取出试管，立即向各管内加入终止液 2.5ml。
8.以蒸馏水作空白对照，于650nm 波长处 读取1、2号管的光密度值（S1 和S2） 。
主要检测的目的基因
• 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症患者的基因突 变.方法:用聚合酶链反应、限制性内切酶筛 查葡萄糖-6-磷酸酶基因1 388G→A、1 376G→T、1 360C→T、1 024C→T、 592C→T、517T→C、493A→G,487G→A、 392G→T、95A→G突变,用单链构象多态性 筛查葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因的所有外显 子,用核苷酸序列测定确定基因突变.
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实验方案
G-6-PD/6PGD定量比值法检测红细胞G-6-PD 活性
原理：NADPH可使氢化硝基四氮唑蓝 （NBT）由浅黄色还原为紫色的甲膳。此法 另设一管，将底物改为6PGD，两管所测的 值相比，即可得出比值。正常值为＞1．0， ≤1.0为缺乏。
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4.空腹抽取患儿静脉血2 ml置于含0.4mlACD
实验室检查的生化代谢解释
在单核-吞噬细胞系统产生胆红素过多，超过 肝细胞的摄取、转化和排泄能力，造成血 清游离胆红素浓度过高。此时，血中结合 胆红素的浓度变化不大，重氮反应实验 （凡登白）间接反应阳性，尿胆红素阴性。 由于肝对胆红素的摄取、转化和排泄增多， 从肠道吸收的胆色素原增多，造成尿胆色 素原增多。
• 目前基因检测的方法主要有：荧光定量 PCR、基因芯片、液态生物芯片与微流控 技术等。
较普遍的是运用PCR技术
• 采用DNA 序列测定法检测G6PD 基因突变 情况，针对G6PD 外显子区域设计引物， 然后通过PCR 技术获得目的区域并进行测 序，最后将测序结果与G6PD 突变数据库 进行对比分析，从而得到检测结果。
临床表现的解释
皮肤、巩膜等组织的黄染 胆红素对含有弹性硬蛋白 的组织具有较大的亲和力，所以含有该组织的巩 膜、皮肤和粘膜最易出现黄疸。
黄疸加深时，尿、痰、泪液及汗液也被黄染，唾液 一般不变色。尿中出现血红蛋白尿而使尿液呈酱 油色。
精神萎靡似与胆盐对中枢神经系统的毒性作用有关。 呼吸急促与胆盐刺激迷走神经和抑制心脏传导有关
阅读下列案例，根据要求回答问题并设计实验进一步明确诊断。
案例： 患儿，男性，3岁，因面色苍白伴血尿1天入院。1天前食用新鲜蚕豆后，
今日出现恶心、呕吐、排尿呈酱油样色，面色苍白。据家长反映，患者的姐 姐也曾发生过类似情况。
体格检查：体温38℃，脉搏150次/分，呼吸40次/分，血压80/60mmHg， 呼吸急促，神清，萎靡，面色苍白，皮肤及巩膜黄染，体型较同龄人瘦小。 心、肺未及异常，肝、脾未触及，双肾区无叩击痛，神经系统检查未及异常。 实验室检查：红细胞 1.98×1012/L，血红蛋白53g/L，血清总胆红素 85.5µmol/L，结合胆红素13.7µmol/L，未结合胆红素71.8µmol/L，尿蛋白 （++），潜血(+)，尿胆红素(－)，尿胆素原(+)，尿液镜下未见红细胞。
患者体型瘦小与该病症是否有关？ • 答：无关，
9.G-6-PD/6PGD=S1/S2，G-6-PD/6PGD ≤1.0，则为G-6-PD缺乏，判断为阳性； G-6-PD/6PGD＞1.0，则为G-6-PD正常 ，判断为阴性。
蚕豆病机制
G6PD的缺陷不能提供足够的NADPH以维 持还原型谷胱甘肽（GSH）的还原性（抗氧 化作用），在遇到蚕豆种某种因子后更诱发 了红细胞膜被氧化，红细胞膜上的磷脂分子 中的不饱和脂肪酸氧化生成过氧化脂质，损 害细胞膜，导致红细胞的大量破坏。