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第1篇一、实验目的1. 了解植物组织培养的基本原理和方法。
2. 掌握植物组织培养的实验操作技术。
3. 熟悉植物组织培养在植物繁殖、育种和基因工程等方面的应用。
二、实验原理植物组织培养是利用植物细胞的全能性，通过特定的培养基和培养条件，使植物细胞脱分化、再分化，最终形成完整的植株。
实验过程中，主要涉及以下几个环节：1. 脱分化：将植物器官或组织置于含有植物激素的培养基中，使其细胞逐渐失去原有功能，进入无性繁殖状态。
2. 再分化：在适宜的培养基和条件下，脱分化细胞重新分化成不同类型的细胞，进而形成完整的植株。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：小麦种子、马铃薯块茎、胡萝卜块根等。
2. 实验仪器：超净工作台、高压蒸汽灭菌锅、移液器、培养皿、显微镜、恒温培养箱等。
四、实验步骤1. 材料预处理：将实验材料表面消毒，然后用无菌手术刀切成小块。
2. 培养基制备：按照实验要求配制培养基，包括MS培养基、1/2MS培养基等。
3. 接种：将处理好的实验材料接种到培养基中。
4. 培养与观察：将接种后的培养皿放入恒温培养箱中，定期观察植物组织的生长状况。
5. 数据记录与分析：记录实验过程中植物组织的生长情况，分析实验结果。
五、实验结果与分析1. 小麦种子组织培养（1）实验结果：接种后，小麦种子在培养基中逐渐生长，形成愈伤组织。
（2）分析：小麦种子在培养基中脱分化，形成了愈伤组织，说明植物组织培养技术在小麦繁殖方面具有可行性。
2. 马铃薯块茎组织培养（1）实验结果：接种后，马铃薯块茎在培养基中逐渐生长，形成愈伤组织，进而分化出芽苗。
（2）分析：马铃薯块茎在培养基中脱分化，形成了愈伤组织，并分化出芽苗，说明植物组织培养技术在马铃薯繁殖方面具有可行性。
3. 胡萝卜块根组织培养（1）实验结果：接种后，胡萝卜块根在培养基中逐渐生长，形成愈伤组织，进而分化出芽苗。
（2）分析：胡萝卜块根在培养基中脱分化，形成了愈伤组织，并分化出芽苗，说明植物组织培养技术在胡萝卜繁殖方面具有可行性。
第1篇一、实验目的1. 了解植物组织培养的基本原理和方法。
2. 掌握植物组织培养实验操作技能。
3. 通过实验，学习植物组织培养技术在植物繁殖、育种和基因工程等领域的应用。
二、实验原理植物组织培养是利用植物体细胞的全能性，通过无菌操作，将植物组织、器官或细胞在适宜的培养基上进行培养，使其生长发育成为完整的植株。
实验过程中，培养基的营养成分、激素配比、光照、温度等条件对植物组织培养的成功至关重要。
三、实验材料与仪器材料：1. 植物外植体：叶片、茎段等。
2. MS培养基：含有植物生长激素、维生素、微量元素等。
3. 营养液：用于补充培养基中的营养成分。
4. 灭菌剂：如氯化汞、酒精等。
5. 灭菌器械：高压灭菌锅、无菌操作台、剪刀、镊子等。
仪器：1. 高压灭菌锅2. 灭菌操作台3. 镜头4. 移液器5. 培养箱6. 热水浴锅四、实验步骤1. 外植体消毒：将外植体用70%酒精消毒30秒，再用氯化汞消毒10分钟，最后用无菌水冲洗3-5次。
2. 切割外植体：用无菌剪刀将消毒后的外植体切割成适宜大小的片段。
3. 制备培养基：将MS培养基和营养液按比例混合，加入适量的植物生长激素，搅拌均匀。
4. 接种：将切割好的外植体接种到制备好的培养基上。
5. 培养：将接种好的培养基放入培养箱中，控制适宜的温度、光照等条件进行培养。
6. 观察与记录：定期观察外植体的生长状况，记录其生长过程。
五、实验结果与分析1. 外植体生长情况：在适宜的培养基和培养条件下，外植体能够生长出愈伤组织、芽和根。
2. 愈伤组织形成：愈伤组织是植物组织培养过程中的重要阶段，它为芽和根的形成提供了物质基础。
3. 芽和根的形成：在适宜的培养基和培养条件下，愈伤组织能够分化出芽和根，形成完整的植株。
4. 实验结果分析：通过本实验，我们掌握了植物组织培养的基本原理和操作技能，了解了植物组织培养技术在植物繁殖、育种和基因工程等领域的应用。
六、实验总结1. 本实验成功地进行了植物组织培养，掌握了植物组织培养的基本原理和操作技能。
植物组织培养实验报告学院：生命科学技术学院班级：11生物技术(制品)学号：**********姓名：**植物组织培养实验报告实验一植物组织培养母液的配制一、实验目的1.了解植物组织培养基本培养基的组分及其作用。
2.学习掌握植物组织培养MS培养基的配制方法。
二、实验原理培养基是植物组织培养中离体组织赖以生存和发育的条件。
大多数培养基的成分是有无机盐、有机化合物（碳源、维生素、肌醇、氨基酸等）、生长调节物质、水分和其他附加物等五大类物质组成。
无机盐类由大量元素和微量元素组成。
大量元素中，氮类化合物主要以硝酸类和铵类化合物的形式存在，但在培养基中多用硝酸类，也可以将硝酸类和铵类混合使用；磷和硫常用磷酸盐和硫酸盐来提供；钾是培养基中主要的阳离子；钙、钠、镁的需要量较少。
微量元素包括碘、锰、铜、锌、钴、铁。
培养基中的铁离子，大多数以螯合物的形式存在，即硫酸亚铁与乙二胺四乙酸二钠的混合。
有机化合物包括碳源、维生素、肌醇、氨基酸等。
培养中的植物组织和细胞的光合作用较弱，因此，需要在培养基中附加一些碳水化合物物来提供营养需要。
培养基中的碳水化合物通常为蔗糖。
蔗糖除了作为培养基的碳源和能源外，对维持培养基的渗透压也起着重要的作用。
在培养基中加入维生素有助于细胞的分裂和增长。
一般包括VB1、B6、烟酸、生物素、叶酸、泛酸钙、VC。
肌醇在糖类的相互转化、维生素和激素的利用等方面具有重要的催进作用。
常用的植物生长调节物质包括以下三类：①生长素类：吲哚乙酸（IAA）、萘乙酸（NAA）、二氯苯氧乙酸（2,4-D）②细胞分裂素：玉米素（ZT）6-苄基嘌呤（6-BA）和激动素（KT）。
③赤霉素：组织培养中使用的赤霉素只有一种，即赤霉酸（GA3）。
培养基中的其他附加物包括人工合成和天然的有机物附加物。
其中最为常见的为酵母提取物。
琼脂作为培养基的支持物，也是最常用的邮寄附加物，他可以是培养基呈固体状态，以利于组织和细胞的培养。
植物组织培养是否成功，在很大的程度上取决于培养基的选择之上。
组织培养实验报告组织培养实验报告植物是大自然中最美丽的艺术品之一，而植物的生长和发育过程则是一个奇妙而复杂的过程。
为了更好地了解植物的生长规律和培养技术，我们进行了一项组织培养实验。
实验的目的是通过体外培养的方式，研究植物的生长和发育过程，探索植物组织培养技术的应用前景。
我们选择了茄子作为实验材料，因为茄子生长迅速，易于培养，并且在组织培养方面有一定的研究基础。
实验开始前，我们准备了一些必要的材料和设备，包括茄子种子、无菌培养基、培养瓶、显微镜等。
首先，我们将茄子种子进行消毒处理，以确保实验的无菌条件。
然后，将种子放置在无菌培养基上，通过培养瓶的密封，保持培养环境的湿度和温度。
在实验过程中，我们观察到了茄子的生长和发育过程。
最初，种子在培养基中发芽，并逐渐长出幼苗。
随着时间的推移，茄子幼苗逐渐长高，叶片也逐渐展开。
通过显微镜的观察，我们可以清晰地看到茄子的细胞结构和组织构成，这为我们深入研究植物的生长机制提供了便利。
在实验的后期，我们进行了一些处理，以探索不同因素对茄子生长的影响。
我们调整了培养基中的营养成分浓度，观察茄子生长的差异。
结果显示，适当增加培养基中的营养成分浓度可以促进茄子的生长速度和根系发育。
此外，我们还尝试了不同的光照条件和温度条件对茄子生长的影响。
实验结果表明，适宜的光照和温度条件对茄子的生长和发育有着重要的影响。
通过这次实验，我们不仅了解了植物的生长和发育过程，还掌握了一些植物组织培养的基本技术。
植物组织培养技术在农业生产和科学研究中具有广阔的应用前景。
通过培养出大量的植物组织和细胞，我们可以进行基因工程、病毒检测、新品种选育等研究工作，为农业生产的发展和改进提供有力的支持。
然而，植物组织培养技术也存在一些挑战和限制。
首先，培养过程中需要严格控制无菌条件，以防止细菌和真菌的污染。
其次，培养基的配方和培养条件的调整需要一定的经验和技巧。
最后，植物组织培养的成本较高，需要大量的设备和耗材支持。
摘要：以大豆子叶为外植体，在MS 培养基上附加不同浓度、不同种类的植物激素，以研究不同激素组合和不同浓度对大豆子叶愈伤诱导率的影响，并练习无菌操作。
实验结果显示第 2 组即 MS+6-BA〔2.0mg/L)+NAA(1.0mg/L)和第 3 组即 MS+KT〔0.5mg/L)+2,4-D(1.0mg/L) 培养基中愈伤组织诱导率较高，为较佳的愈伤组织诱导组合。
关键词：大豆；植物组织培养；无菌操作；愈伤组织1.1 实验材料：大豆子叶1.2 实验试剂与仪器〔1〕试剂： 75%酒精、MS 干粉、蔗糖、琼脂、植物生长调节剂〔NAA、2，4-D、KT、6-BA〕、无菌水、升汞、 NaOH 溶液〔2〕仪器：超菌净工作台、圆纸片、培养皿、封口膜、称量纸、千分之一天平、不锈钢杯子、移液枪、试管、高压灭菌锅、注射器、酒精灯、镊子、手术刀、搁置架、烧杯、电炉。
1.3 实验方法培养基的配制与灭菌1.3.1.1 配制培养基的准备阶段〔1〕准备 80 个培养试管及封口膜， 2 个小培养皿、 1 个大培养皿，用洗衣粉、自来水洗净，再用蒸馏水把每一个培养试管、润洗一下。
带晾干后将试管编号 1-80；〔2〕在称量纸上用百分之一天平分别称取 1.5g 琼脂 4 份， 7.5g 蔗糖 4 份，在烧杯里用千分之一天平上称取 1.185g MS 干粉 4 份〔烧杯不要清洗〕；〔3〕剪小圆纸片 40，均分在两个小培养皿小能从中自由取出为宜；剪大圆纸片10，均分在两个大培养皿中。
然后分别用报纸包好。
〔4〕把接种工具手术刀、镊子、剪刀等用报纸包好。
1.3.1.2 配制培养基〔1〕在装有 MS 干粉的烧杯中按下表参加植物生长调节剂实验所用的所有激素浓度均为 0.5mg/mL编号培养基配置激素的加样量(ml)6-BA N A A K T2,4-D1 23 4 MS+6-BA〔1.0mg/L)+NAA(0.5mg/L)MS+6-BA〔2.0mg/L)+NAA(1.0mg/L)MS+KT〔0.5mg/L)+2,4-D(1.0mg/L)MS+KT〔1.0mg/L)+2,4-D(2.0mg/L)0.51.00.250.50.250.50.51.0〔2〕用量筒量取250ml 〔稍多〕蒸馏水，取一个不锈钢杯子参加150ml 蒸馏水和称量好的琼脂，在电炉子加热沸腾 2min，再参加混合好的 MS 培养基 1 号和蔗糖，混合沸腾 2min，用剩余的蒸馏水定容至 250ml；〔3〕当温度降到 60℃摆布时，将溶液 pH 调至 5.8，普通加 4 滴 NaOH 溶液即可；〔4〕取编号 1-20 的培养试管，用大量注射器以每瓶 12.5ml 摆布培养基分装在培养试管中，用封口膜封口， 4 支一捆捆扎好。
第1篇一、实验目的1. 了解根部组织培养的基本原理和方法。
2. 掌握植物组织培养技术在植物繁殖中的应用。
3. 通过实验，观察并分析根部组织培养过程中各阶段的变化。
二、实验材料与设备1. 实验材料：- 植物材料：选取健康、生长旺盛的植物根段。
- 培养基：MS培养基、1/2MS培养基等。
- 植物激素：生长素、细胞分裂素等。
2. 实验设备：- 恒温培养箱- 超净工作台- 显微镜- 剪刀、镊子等实验工具三、实验方法1. 材料处理：- 将植物根段洗净，用70%酒精消毒30秒，再用无菌水冲洗3次。
- 将根段切成约1-2cm的段，置于无菌滤纸上晾干。
2. 培养基制备：- 配制MS培养基，加入适量的植物激素，调节pH值至5.8。
- 将培养基分装于培养皿中，高压灭菌。
3. 培养过程：- 将处理好的根段接种于培养基中。
- 将培养皿放入恒温培养箱中，保持适宜的温度和光照条件。
- 定期观察根段生长情况，记录实验数据。
4. 观察与分析：- 观察根段在培养过程中的生长、分化情况。
- 分析不同培养基、植物激素对根段生长的影响。
四、实验结果与分析1. 根部生长情况：- 经过一段时间培养，根段开始生长，出现白色芽点。
- 随着培养时间的延长，芽点逐渐增多，形成幼苗。
2. 植物激素对根部生长的影响：- 生长素对根段生长有促进作用，但过量使用会导致根段生长缓慢。
- 细胞分裂素对根段生长有抑制作用，但适量使用可以促进芽点的形成。
3. 不同培养基对根部生长的影响：- MS培养基对根段生长有较好的促进作用。
- 1/2MS培养基对根段生长的促进作用略低于MS培养基。
五、结论1. 本实验成功实现了植物根部组织培养，为植物繁殖提供了新的途径。
2. 植物激素和培养基对根段生长有显著影响，合理调节植物激素和培养基的组成，可以提高根部组织培养的成功率。
3. 本实验为植物组织培养技术在植物繁殖中的应用提供了有益的参考。
六、实验体会通过本次实验，我深刻认识到植物组织培养技术在植物繁殖中的重要作用。
一、实验目的1. 掌握无菌操作的植物组织培养方法。
2. 通过配置MS培养基母液，掌握母液的配置和保存方法。
3. 通过诱导植物细胞形成愈伤组织，学习愈伤组织的建立方法。
4. 了解植物细胞通过分裂、增殖、分化、发育，最终长成完整再生植株的过程，加深对植物细胞全能性的理解。
二、实验原理植物组织培养是一种利用植物细胞的全能性，在人工条件下实现植物器官、组织或细胞再生为完整植株的技术。
其基本原理包括：1. 脱分化作用：原本已经分化停止生长的细胞，在人工培养基的诱导下，重新进入分裂状态，形成没有特定组织结构的细胞团，即愈伤组织。
2. 再分化作用：愈伤组织在一定条件下，可以分化为具有特定结构和功能的组织，如根、茎、叶等，最终形成完整的植株。
3. 植物激素：在组织培养过程中，植物激素如生长素（IAA）、细胞分裂素（CK）等起着关键作用，调节细胞分裂、分化和器官形成。
三、实验材料与仪器材料：1. 植物外植体：如叶片、茎段、芽等。
2. MS培养基母液：包括大量元素、微量元素、有机物、维生素和植物激素等。
3. 灭菌剂：如乙醇、HgCl2（或次氯酸钠）等。
仪器：1. 培养室2. 高压灭菌锅3. 水浴锅4. 解剖刀5. 三角烧瓶（100mL）6. 烧杯7. 量筒8. 培养皿9. 超净工作台10. 分析天平11. 镊子12. 剪刀13. 橡皮筋四、实验步骤1. 外植体消毒：将外植体放入含有乙醇、HgCl2（或次氯酸钠）的消毒液中浸泡5-10分钟，然后用无菌水冲洗干净。
2. 愈伤组织诱导：将消毒后的外植体接种到含有不同激素浓度和比例的MS培养基中，置于培养室内培养。
3. 愈伤组织继代培养：待愈伤组织形成后，将其转移到新的培养基中进行继代培养，以扩大愈伤组织数量。
4. 再分化培养：将愈伤组织转移到含有不同激素浓度和比例的培养基中，诱导其分化为根、茎、叶等器官。
5. 生根与移栽：待植物分化出根、茎、叶等器官后，将其移栽到土壤中，进行正常生长。
石榴的组织植物培养实验报告(一)石榴的组织植物培养实验报告实验目的•理解组织培养的基本原理；•掌握石榴的组织培养技术；•研究石榴不同组织的培养条件和生长发育情况。
实验步骤1.组织分离：将石榴果实表皮剥离，去掉果皮和种子，获取果肉组织。
2.组织处理：将果肉组织切成小块，使用PBS等缓冲液清洗组织。
3.原代培养：将处理好的组织块接种到含有基本营养物质和生长素的MS培养基上。
4.次级培养：将原代培养成功的组织块转移到新的培养基中继续培养。
5.观察生长情况：观察不同培养基中石榴组织的生长发育情况，记录相关数据。
实验结果通过实验，我们发现：•石榴果肉组织在MS培养基上可以成功生长和繁殖；•不同的生长素浓度和培养基配方对组织生长发育有显著影响；•石榴愈伤组织的形成和生长需要较高的生长素浓度，而且不同品种石榴组织对生长素的需求不同。
实验结论通过本次实验，我们成功掌握了石榴的组织培养技术，并且研究了其生长发育的规律。
这对于深入研究石榴生长发育、杂交育种等方面具有重要意义。
参考文献1.孙全华. 植物组织培养[M]. 北京:中国林业出版社, 1998.2.刘纪清.植物组织培养实验指导[M]．北京: 高等教育出版社,2006.实验难点及解决办法在实验过程中，可能会出现以下难点：1.组织分离困难：石榴果实表皮和果肉紧密结合，分离困难。
解决办法：使用适当力度的手术刀或剪刀分开果实表皮和果肉，注意不要将果肉切碎。
2.培养基配方选择：不同组织需要的生长因子和营养物质有所差异，需要合理选择培养基配方。
解决办法：根据石榴组织的类型和所需生长条件，选择合适的培养基配方。
在实验过程中可以尝试不同配方的培养基，寻找最适合石榴组织生长的配方。
3.组织污染：组织培养容易受到细菌、真菌等污染。
解决办法：准备工作时，应对器皿、培养基和操作台进行消毒处理，培养过程中注意卫生。
如果出现污染现象，应及时清除受污染的培养物。
实验注意事项1.实验前应进行充分的准备工作，消毒操作台、器皿和培养基等；2.实验操作过程中应保持清洁和卫生，避免污染；3.实验过程中需要细心耐心，尤其是组织的分离和接种操作；4.实验后应及时进行记录和分析数据，做好实验报告。
一、实验目的1. 掌握植物组织培养的基本原理和方法。
2. 熟悉植物组织培养中培养基的配制、消毒和接种技术。
3. 学习植物组织培养过程中愈伤组织的诱导、继代培养和器官分化等关键技术。
4. 了解植物组织培养在植物育种、种质资源保存等方面的应用。
二、实验原理植物组织培养是指将植物的器官、组织或细胞在人工控制的条件下，通过脱分化、再分化等过程，使其生长、发育成完整植株的技术。
植物组织培养技术具有操作简便、繁殖速度快、不受季节限制等优点，在植物育种、种质资源保存、生物工程等领域具有广泛的应用。
三、实验材料1. 植物材料：小麦种子、胡萝卜切块、番茄叶片等。
2. 培养基：MS培养基、1/2 MS培养基、1/4 MS培养基等。
3. 试剂：氯化钙、氯化钠、磷酸二氢钾、硫酸镁、琼脂、蔗糖、吲哚乙酸（IAA）、6-苄基氨基腺嘌呤（6-BA）等。
4. 仪器设备：超净工作台、高压灭菌锅、电炉、移液管、培养皿、剪刀、镊子等。
四、实验步骤1. 培养基的配制（1）称取适量氯化钙、氯化钠、磷酸二氢钾、硫酸镁等试剂，加入少量蒸馏水溶解。
（2）将溶解后的试剂溶液加入适量琼脂，搅拌至溶解。
（3）将溶解后的琼脂溶液加入蔗糖，搅拌均匀。
（4）将溶液加热至沸腾，持续搅拌，使琼脂完全溶解。
（5）待溶液冷却至50℃左右，加入适量IAA和6-BA，搅拌均匀。
（6）将溶液分装至培养皿中，待凝固后，置于高压灭菌锅中灭菌30分钟。
2. 植物材料的消毒（1）将植物材料用流水冲洗干净。
（2）用75%乙醇消毒30秒。
（3）用无菌水冲洗3-5次。
3. 植物材料的接种（1）将消毒后的植物材料切成小块或叶片。
（2）将植物材料接种至培养基中。
4. 培养与观察（1）将接种后的培养皿置于培养箱中，温度控制在25℃左右，光照时间为12小时/天。
（2）定期观察愈伤组织的形成、生长和分化情况。
五、实验结果与分析1. 愈伤组织的形成经过一段时间培养，小麦种子、胡萝卜切块、番茄叶片等植物材料在培养基上形成了愈伤组织。
院(系、部) 化学与生物工程学院 专业 生物技术（师范） 年级13级 学号 姓名 组别 第二组 课程名称 植物细胞工程学 实验日期 指导老师 实验名称 植物组织培养综合实验 一、 实验目的 1. 熟悉MS培养基的组成，掌握贮备液的配制方法 2. 学习、掌握植物组织固体培养基的配制和灭菌方法； 3. 掌握超净工作台上的接种方法与注意事项，了解接种室的灭菌方法； 4. 了解组织培养的基本程序； 5. 掌握接种的方法和材料的培养过程； 6. 掌握无菌操作技术，包括外植体除菌和接种技术； 7. 观察外植体的生长状况、染菌状况，剔除染菌外植体； 8. 了解MS培养基和1/2MS培养基的区别 二、 实验原理 1. 植物细胞的全能性 一切植物都由细胞构成，细胞是构成植物体的基本结构与功能单位。植物细胞含有全套遗传信息，具有形成完整植物的潜能。 2. 植物细胞表现出全能性的条件 1. 离体状态； 2. 有一定的营养物质，激素和其他外界条件（无菌、温度、pH）； 3. 选择性能优良、细胞全能性表达充分的基因型 3. 无菌条件 把植物的组织、器官等，使其在人工控制的无菌条件下，使植物在人工培养基上繁殖。用于进行组织培养的组织、器官和细胞称为外植体。在组培中外植体都死带菌的，在接种前必须进行表面消毒，这时取得培养成功的最基本和重要的前体。组织培养的主要过程都是在无菌条件下进行的，所以所有的器材、植物体、接种室都应是无菌的。 4. 脱分化与愈伤组织 已有特定结构与功能的植物组织，在一定条件下，其细胞被诱导改变原来的发育途径，逐步逆转其原有的分化形态，转变为具有分生能力的胚细胞的过程称为脱分化。脱分化所用的化学物质与MS培养基的区别是需要激素诱导。所以脱分化培养需在MS培养基上添加激素进行愈伤组织诱导。 5. 培养基 植物组织培养常用的培养基为MS培养基。常用的凝固剂是琼脂,它的主要作用是使液体培养基凝固，琼脂本身并不提供任何营养，它只是一种高分予的碳水物从海藻中提取出来，仅溶解于热水，成为溶胶，冷却后(40℃以下)即凝固为固体状凝胶。琼脂的用量一般在4—10克／升之间。琼脂的凝固能力除与原料、厂家的加工方式等有关外，还与高压灭菌时的温度、时间、pH值等因素有关，长时间的高温会使凝固能力下降，过酸过碱加之高温会使琼脂发生水解而丧失凝固能力，存放时间过久，琼脂变褐，也会逐失去凝固能力。MS培养基属于富盐平衡培养基，特点是：无机盐浓度较高，元素间的比例适当，离子平衡性好，具有较强的缓冲性，因而在培养的过程中可维持较好的稳定性；营养丰富，在一般培养中无须额外加入复杂的有机成分；微量元素种类全，浓度高。这类培养基是目前使用最广泛的培养基。 6. 生长调节物质 包括天然植物激素额人工激素类似物。植物激素是一类植物自身合成、同时对其生长发育具有重要调节作用的有机化合物。生长调节物质对于离题培养中的细胞分裂分化、器官形成和个体再生等均起着重要而明显的调节作用。一般来说，基本培养基只能保证培养物的生存，维持其最低的生理活动，而只有植物激素的配合使用，才能完成离体培养物中按照需要设计的各个调节环节。常用的植物组培激素种类主要有生长素类、细胞分裂素类、赤霉素。 1) 生长素的生理作用主要是促进细胞分裂和生长，有利于外植体脱分化并启动细胞分裂，有利于形成愈伤组织。同时生长素和细胞分裂素的协调作用，对于培养物的形态建立十分必要。在离体培养的分化调节中，生长素促进不定根的形成而抑制不定芽的发生。在液体培养中，生长素还有利于体细胞胚胎发生。常用的生长素有吲哚乙酸（IAA）、奈乙酸（NAA）、二氯苯氧乙酸（2，4-D）和吲哚丁酸（IBA）等。在使用2，4-D时，必须严格控制使用浓度和培养时期，因为高浓度的2，4-D常常抑制器官的发生，在分化培养时不能使用2，4-D代替其他生长素。 2) 细胞分裂素的主要作用是促进细胞的分裂，调节器官分化，延迟组织衰老，增强蛋白质合成等。此外，它还能显着改善其他激素。离体培养中，细胞分裂素能够促进不定芽的发生，与生长素协调使用能有效调控培养物的生长与分化。常用的细胞分裂素包括6-卞基嘌呤（6-BA）、激动素（KT）、异戊烯氨基嘌呤（2ip）、玉米素（ZT）等。 3) 赤霉素（GA）是一类广泛存在于植物体内的激素，目前已发现的天然赤霉素有20多种。自然界植物体内的赤霉素具有促进细胞伸长生长、诱导花芽形成、打破种子休眠及诱导单性结实等生理功能。在离体培养条件下，赤霉素的主要作用时促进细胞伸长生长，与生长素协同作用对形成层的分化具有一定影响，同时还能刺激体细胞胚进一步发育成植株。 三、 实验材料、试剂和仪器设备 1. 植物材料：马齿苋、番茄种子诱导的无菌苗、外植体（盘龙参、波斯菊、金叶女贞、黄花苜蓿、菊花、香樟、杜鹃、月季） 2. 实验药品（试剂）：甲醛、MS培养基母液（见表1）、蔗糖、琼脂、1%升汞、酒精（75%和90%）、NaOH、HCl、6-BA、NNA、无菌水； 3. 仪器设备和实验用具：高压灭菌锅、天平、pH计、超净工作台、电炉、酒精灯、镊子、解剖刀、剪刀、烧杯、培养瓶、量筒、烧杯、玻璃棒、广口试剂瓶、牛皮纸、滤纸、培养皿、药勺、支架、打火机等。 四、 实验步骤 (一) 培养基母液的配制(2016/3/4) 1. MS培养基贮备液配制 贮备液I(g)(20×) 贮备液III(mg) (100×) MgSO4·7H2O 500mL FeSO4·7H2O 278 100mL NH4NO3 Na2EDTA·2H2O 373 CaCl2·2H2O 生长调节剂 KNO3 6-BA 50mg 50mL KH2PO4 NAA 50mg
贮备液II(mg) )(100×) 贮备液IV(mg) )(100×) KI 100mL 肌醇 1000
100mL H3BO3 62 烟酸 5 MnSO4·4H2O 223 盐酸硫胺素 1 ZnSO4·7H2O 86 盐酸吡哆醇 5 Na2MoO4·2H2O 甘氨酸 20 CuSO4·5H2O 0. 25 称量 溶解 混合
定容 CoCl2·6H2O 0. 25
表1 1) 每种母液中的几种成分称量完毕后，分别用少量的蒸馏水彻底溶解，然后再将它们混溶，定容。 2) 贮备液III需加热溶解。混合后调至，定容，保存在棕色玻璃瓶内。 3) 6-BA：1 mg/mL(溶于少量1N盐酸后以蒸馏水定容）。 NAA：1 mg/mL（先用少量95%乙醇溶解后以蒸馏水定容）。 4) 各种母液配制完成后，分别用玻璃瓶贮存，贴上标签，注明母液号、配制倍数、日期等，放入冰箱冷藏室保存。一般无机物质的母液在冰箱中可保存半年以上，有机物质的母液保存时间在半年以内，但若发现有沉淀或霉变,应立即需重新配制。 2. 其他试剂的配置 1) 1 mol/L 的NaOH：1瓶 2) 1 mol/LHCL ：1瓶 3) %的升汞或2%次氯酸钠：每个超净工作台一瓶（用时处理5-30min) 4) 70~75%酒精：每个超净工作台一瓶 5) 95%酒精：每个超净工作台一瓶 6) 75%酒精棉球：每个超净工作台一瓶 (二) 培养基的配制与灭菌 1. 培养基配制 1) 配制培养液（MS培养液）：按每次配制500 mL培养基计，用量筒或者移液管从各种母液中分别取出贮备液I 25 mL、贮备液II、Ⅲ、Ⅳ各5 mL； 2) 溶化琼脂：用粗天平分别称取5g琼脂、15g蔗糖放入500 mL搪瓷缸中，加入蒸馏水400 mL，用用电炉加热，边加热边用玻璃棒搅拌，直到液体呈半透明状。然后再将配好的混合培养液加入到煮沸的琼脂中，最后加蒸馏水定容至500 mL，搅拌均匀。 3) 调pH：用滴管吸取物质的量浓度为1 mol/L的NaOH溶液，逐滴滴入溶化的培养基中，边滴边搅拌，并随时用精密的pH试纸（～）测培养基的pH，一直到培养基的pH为为止（培养基的pH必须严格控制在）。 4) 培养基的分装 溶化的培养基应该趁热分装。分装时，先将培养基倒入烧杯中，然后将烧杯中的培养基倒入组培瓶（50 mL或100 mL）中。注意不要让培养基沾到瓶口和瓶壁上。组培瓶中培养基的量约50 mL 。每500 mL培养基，可分装10～15瓶。 5) 培养基分装完毕后，应及时封盖瓶口。最后在组培瓶外壁贴上标签。 2. 培养基灭菌（高压灭菌） 1) 放培养瓶。将装有培养基的培养瓶直立于金属小筐中，再放入高压蒸气灭菌锅内。如果没有金属小筐，可以在两层锥形瓶之间放一块玻璃板隔开。 2) 放置其他需要灭菌的物品。将其他需要灭菌的物品也放入高压蒸气灭菌锅内，如装有蒸馏水的锥形瓶、带螺口盖的玻璃瓶、烧杯、广口瓶（以上物品都要用牛皮纸封口），用牛皮纸包裹的培养皿、剪刀、解剖刀、镊子、滤纸、铅笔等。 3) 待需要灭菌的物品码放完毕，盖上锅盖。在98 kPa、 ℃下，灭菌20 min。灭菌后取出培养瓶，让其中的培养基自然冷却凝固。最好放置1 d后再使用。 3. 其他灭菌 1) 不耐热的物质将采用过滤灭菌 如赤霉素、玉米素、脱落酸、尿素和某些维生素等。 过滤灭菌的原理：溶液通过滤膜后，细菌的细胞和孢子等因大于滤膜孔径而被阻。 2) 玻璃器皿及耐热用具等可采用干热灭菌 即利用烘箱加热到160-180℃ 的温度来杀灭微生物。 3) 用于无菌操作的器械采用灼烧灭菌 (三) 接种室和超净工作台的灭菌处理 1. 接种室熏蒸灭菌 长期不用的培养室或接种室要进行熏蒸。方法：甲醛、高锰酸钾熏蒸。 甲醛的用量通常按每立方米空间2-6毫升计算，高锰酸钾的用量是甲醛的一半。室内准备妥当后，把称好的高锰酸钾放在瓷碗或烧杯内(最好在碗或杯下面铺一张报纸，以利清洗)，然后将甲醛也倒入碗或杯内，立即出屋关门。几秒钟后，甲醛溶液即沸腾挥发。高锰酸钾是一种氧化剂，当它与一部分甲醛作用时，由氧化反应产生的热可使其余的甲醛挥发为气体。甲醛熏蒸接种室应至少在使用前24小时进行，熏蒸后密闭保持4小时以上再进入室内工作。甲醛对人的眼、鼻有强烈刺激作用。因此，可在使用前用氨进行中和。取与甲醛等量的氨水，倒在另一个烧杯里，迅速放入熏蒸室内，使甲醛和氨水发生中和反应，以消除甲醛味，减少对人体的刺激作用。使用氨水应在工作前2小时进行。 对有材料的培养室，也可以采用乙二醇加热熏蒸 2. 准备组培室
