药典微生物限度检查法及指导原则培训ppt课件

CP2005 具抑菌活性的供试品 当供试品有抑菌活性时，应消除供试 液的抑菌活性后。再依法检查。 CP2010 具抑菌活性的供试品 当供试品有抑菌活性时，采用下列 方法进行处理，以消除供试液的抑 菌活性。再依法检查。
离心沉淀法 取一定量的供试液，以500转/分 离心3分钟，取全部上清液混合， 用于检查。
膜剂为100cm2
要求检查沙门菌的供试品，其检 验量应增加20g或20ml（其中10g 用于阳性对照试验）。
此处还应增加 “或10ml” 即有沙门菌检查要 求的供试品其检验 量为30g或30ml
3、供试液的制备
CP2005 供试液制备若需水浴加温 时，温度应不超过45 ℃ CP2010 供试液制备若需加温时，应均匀加热，且温度不 应超过45 ℃
CP2005
无
CP2010
取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌各50-100cfu，分别 注入无菌平皿中，立即倾注营养琼脂培养基，每株试验菌平行制 备2个平皿，混匀，凝固，置30-35 ℃培养48小时，计数。 取白色念珠菌、黑曲霉各50-100cfu，分别注入无菌平皿中，立即倾 注玫瑰红钠琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝 固，置23-28℃培养72小时，计数。
药典微生物限度检查法及指导原 则培训
• 微生物限度检查法可用于判断非规定灭菌制剂及原 料、辅料是否符合药典的规定，
• 也可用于指导制剂、原料、辅料的微生物质量标准 的制定，及指导生产过程中间产品微生物质量的监 控。
• 本指导原则将对标准和方法中的特定内容及标准的 应用做进一步的说明。
细菌、霉菌酵母菌总数检查
取白色念珠菌50-100cfu，注入无菌平皿中，立即倾注酵母浸出粉胨
葡萄糖琼脂培养基，平行制备2个平皿，混匀，凝固，置23-28℃培
养72小时，计数。 用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。
4.对照培养基系指按培养基处方特别制备、质量优良的培养基，用于培养基 适用性检查。由中国药品生物制品检定所研制及分发。
4、细菌、霉菌及酵母菌计数
---计数培养基的适用性检查
CP2005 无 CP2010 结果判断 被检培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值大 于70%，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致，判该培养 基的适用性检查符合规定。
培养基的百度文库理使用，详见药品微生物实验室指导规范原则。
4、细菌、霉菌及酵母菌计数
CP2010
接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂 斜面培养基中，培养5～7天，加入3～ 5ml 含0.05％（v/v）聚山梨酯80的0.9% 无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，用 适宜方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用 含0.05％（v/v）聚山梨酯80的0.9%无菌 氯化钠溶液制成每1ml含孢子数50～100 cfu的孢子悬液。 菌悬液在室温下放置应在2小时内使用， 若保存在2～8℃可以在24小时内使用。 黑曲霉孢子悬液可保存在2～8℃，在验证 过的贮存期内使用。
---菌液的制备、保存
CP2005
接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马 丁琼脂斜面培养基中，培养5～7天 ，加入3～5ml 0.9%无菌氯化钠溶 液，将孢子洗脱。然后，吸出孢子 悬液（用管口带有薄的无菌棉花或 纱布能过滤菌丝的无菌毛细吸管） 至无菌试管内，用0.9%无菌氯化 钠溶液制成每1ml含孢子数50～ 100cfu的孢子悬液。 无 本版药典重大 变动之三
4、细菌、霉菌及酵母菌计数
---计数培养基的适用性检查
CP2005 无 CP2010 计数培养基的适用性检查 细菌、霉菌及酵母菌计数用的培养基应进行培养 基的适用性检查，成品培养基、由脱水培养基或 按培养基处方配制的培养基均应检查。 本版药典重大变动之二
4、细菌、霉菌及酵母菌计数
---计数培养基的适用性检查
改两次离心 为一次离心
离心沉淀集菌法 取一定量供试液，3000转/分离心 20分钟表（供试液如有沉淀，先以 500转/分离心5分钟后，取全部上 清液再离心）弃去上清液，留底部 集菌液约2ml，加稀释液补至原量
• 1.微生物限度检查过程中，如需要使用表面活性剂、灭 活剂及中和剂，在确定其能否适用于所检样品及其用量 时，除应证明该试剂对所检样品的处理有效外，还须确 认该试剂不影响样品中可能污染的微生物的检出（即无 毒性），因此无毒性确认试验的菌株不能仅局限于验证 试验菌株，而应当包括产品中可能污染的微生物。
• 2.供试液制备方法、抑菌成分的消除方法及细菌、霉菌 及酵母菌计数方法应尽量选择微生物限度检查法中操作 简便、快速的方法，且应避免损伤供试品中污染的微生 物。对于抑菌作用较强的供试品，在供试品溶液性状允 许的情况下，应尽量选用薄膜过滤法进行试验。
• 3. 微生物限度检查法（附录ⅪJ）收载的离心沉淀 法仅适用于制备细菌计数或控制菌（细菌）检查 用的供试液，规定的500 转/分钟、不超过3 分钟 只用于去除供试液中的沉淀物。采用该方法时， 供试液中的样品颗粒大小、粘稠度及污染的微生 物大小，转速等直接影响着样品中微生物的回收 ， 易造成检验结果不能真实反映供试品的污染情 况。因此，供试液制备时尽量避免使用该方法， 更不宜采用高速离心沉降集菌。
1、总则
CP2005 CP2010
供试品检查时，如果使用了表面活 供试品检查时，如果使用了表面 性剂中和剂或灭活剂，应证明其有 活性剂中和剂或灭活剂，应证明 效性及对微生物的生长和存活无影 其有效性及对微生物无毒性。 响。 除另有规定外，本法中细菌培养温 除另有规定外，本法中细菌及控 度为30-35℃，霉菌、酵母菌培养 制菌培养温度为30-35℃ ，霉菌 温度为23-28 ℃ ，控制菌培养温度 、酵母菌培养温度为23-28 ℃ 。 为35-37 ℃ 。
无
增加贴膏剂供试液制备 取规定量供试品，去掉贴剂的保护层，放置 在无菌玻璃或塑料片上，粘贴面朝上。用适 宜的无菌多孔材料（如无菌纱布）覆盖贴剂 的粘贴面以避免贴剂粘贴在一起。然后将其 置于适宜体积并含有灭活剂（如山梨酯80或 卵磷脂）的稀释剂中，用力振摇至少30分钟 ，或以其它方法制备成供试液。
3、供试液的制备
本版药典重大变动之一
检验结果以1g、1ml、10g、10ml或 检验结果以1g、1ml、10g、10ml 10cm2为单位报告、 、10cm2为单位报告，特殊品种 以最小包装单位报告。
2、检验量
CP2005 CP2010
化学膜剂为100cm2
要求检查沙门菌的供试品，其检 验量应增加10g或10ml。