硝酸盐氮的测定二磺酸酚分光光度法
1.1应用范围，
1.1.1本法适用测定生活饮用水及其水源水中硝酸盐氮的含量。
1.1.2水中常见的氯化物、亚硝酸盐和按等均可产生干扰，需对水样作预处理。
1.1.3 本法最低检测量为1μg硝酸盐氮。若取25ml水样测定，则最低检测浓度为0.04mg／L。
1.2 原理
利用二磺酸酚在无水情况下与硝酸根离子作用，生成硝基二磺酸酚，所得反应物在碱性溶液中发生分子重排，生成黄色化合物，在420 nm波长处测定吸光度。
1.3 仪器
1.3.1 50ml 具塞比色管。
1.3.2 100ml 蒸发皿。
1.3.3 250ml 三角瓶。
1.3.4 分光光度计。
1.4 试剂
1.4.1 硝酸盐氮标准贮备溶液：称取7.218g在105～110℃烘过1h 的硝酸钾（KNO
3
），溶于纯水中，并定容至1000ml。加2 ml氯仿作保存剂，至少可稳定
6个月。此贮备溶液1.00ml含1.00mg硝酸盐氮。
1.4.2 硝酸盐氮标准溶液：吸取5.00ml硝酸盐氮标准贮备溶液（1.4.1），置于瓷蒸发皿内，在水浴上加热蒸干，然后加入2ml二磺酸酚（1.4.4），迅速用玻璃棒摩擦蒸发皿内壁，使二磺酸酚与硝酸盐充分接触，静置30min，加入少量纯水，移入500ml容量瓶中，再用纯水冲洗蒸发皿，合并于容量瓶中，最后用纯水稀释至刻度。此溶液1.00ml含10.0μg硝酸盐氮。
1.4.3 苯酚：如苯酚不纯或有颜色，将盛苯酚（C
6H
5
OH）的容器隔水加热，融化
后倾出适量于具空气冷凝管的蒸馏瓶中，加热蒸馏，收集182～L84℃的馏分，置棕色瓶中，冷暗处保存。精制苯酚应为无色纯净的结晶。
1.4.4 二磺酸酚试剂，称取15g苯酚（1.4.3），置于250ml 三角瓶中，加入105ml 浓硫酸，瓶上放一小漏斗，置沸水浴内加热6h。试剂应为浅棕色稠液，保存于棕色瓶内。
1.4.5 硫酸银标准溶液：称取4.397g硫酸银（Ag
2SO
4
），溶于纯水中，并用纯水
定容至1000ml。此溶液1.00ml可与1.00mg氯离子作用。
1.4.6 0.5mol／L硫酸溶液：取
2.8ml浓硫酸，加入适量纯水中，并稀释至100ml。
1.4.7 1mol／L氢氧化钠溶液：称取40g氢氧化钠（NaOH），溶于适量纯水中，并稀释至1000ml。
1.4.8 0.02mol／L高锰酸钾溶液：称取0.316g高锰酸钾（KMnO4），溶于纯水中，并稀释至100ml。
1.4.9 乙二胺四乙酸二钠溶液：称取50g乙二胺四乙酸二钠（C
10H
14
N
2
O
8
Na
2
·2H
2
O，
简称EDTA2Na），用20ml纯水调成糊状，然后加入60ml浓氨水（1.4.10）充分搅动，使之溶解。
1.4.10 浓氨水。
1.4.11 氢氧化铝悬浮液：同18.1.3.4。
1.5 步骤
1.5.1 预处理
在计算水样体积时，应将预处理时所加各种溶液的体积扣除。
1.5.1.1 去除浊度：如水样中有悬浮物，可用0.45μM 孔径的滤膜过滤除去。
1.5.1.2 去除颜色：如水样的色度超过10度，可于100ml水样中加入2 ml氢氧化铝悬浮液(1.4.11），充分振摇后静置数分钟，再行过滤。弃去最初滤出的少量水样。
1.5.1.3 去除氯化物：将100ml水样置于250ml三角瓶中，根据事先已测出的氯离子含量，加入相当量的硫酸银溶液（1.4.5）。水样中氯化物含量很高（超过100mg／L）时，应该以1mg Cl-需加4.397mg Ag2SO4计算直接加入固体硫酸银（为了防止银离子的加入量多于水样中氯离子量给测定带来干扰，在计算银离子加入量时，可按保留水样中1mg／L氯离子的量计算）。将三角瓶放入80℃左右的热水中，用力振摇，使氯化银沉淀凝聚，冷却后用慢速滤纸过滤或离心，使水样澄清。
注：水中氯离子在强酸条件下与NO3-反应，生成NO或NOCl，使NO3-损失，结果偏低，因此必须除去Cl-。
用硫酸银除去氯离子时，如银离子过量，则在最后发色时生成的颜色不正常或变浑浊。
1.5.1.4 扣除亚硝酸盐氮影响：如水样中亚硝酸盐氮含量超过0.2mg／L，则需先向100ml水样中加入1.0ml 0.5mol／L硫酸溶液（1.4.6），混匀后滴加0.02mol ／L高锰酸钾溶液（1.4.8），至淡红色保持15min 不退为止，使亚硝酸盐转变为硝酸盐。在最后计算测定结果时，需减去这一部分亚硝酸盐氮(用重氮化偶合分光光度法测定）。
1.5.2 测定
1.5.
2.1 吸取25.0ml （或适量）原水样或经过预处理的澄清水样，置于100ml 蒸发皿内，用pH试纸检查，滴加氢氧化钠溶液(1.4.7)，调节溶液至近中性，置于水浴上蒸干。
1.5.
2.2 取下蒸发皿，加入1.0ml二磺酸酚试剂（1.4.4），用玻璃棒研磨，使试剂与蒸发皿内残渣充分接触，静置10min。
1.5.
2.3 向蒸发皿内加入10ml纯水，在搅拌下滴加浓氨水，使溶液显出的颜色最深。如有沉淀产生，可过滤，或者滴加乙二胺四乙酸二钠溶液(1. 4.9）至沉淀溶解。将溶液移入50ml比色管中，用纯水稀释至刻度，混合均匀。
1.5.
2.4 另取50ml比色管，分别加硝酸盐氮标准溶液（1.4.2）0、0.10、0.30、0.50、0.70、1.00、1.50或0、1.00、
3.00、5.00、7.00、10.00，各加1.0ml 二磺酸酚试剂（1.
4.4)再各加10ml纯水，在搅拌下滴加浓氨水至溶液的颜色最深，加纯水至刻度。
1.5.
2.5 于420nm波长，以纯水为参比，测定样品和标准系列溶液的吸光度。取标准溶液量为0～1.50ml的标准系列用3cm比色皿，0～10.00ml的用1cm 比色皿测定。
1.5.
2.6 绘制校准曲线，在曲线上查出样品管中硝酸盐氰的含量。
1.6 计算
C＝M/V
1×100/(100+V
2
) (65)
式中：C───水样中硝酸盐氮（N）的浓度，mg／L；
M───从校准曲线上查得的样品管中硝酸盐氮的含量，μg；
V
1
───水样体积，ml；
V2───除氯离子时加入硫酸银溶液的体积,ml。
1.7 精密度与准确度
有52个实验室用本法测定含硝酸盐氮1.59mg／L的合成水样，其他成分的浓度（mg／L）分别为：
氨氮，1.30；
正磷酸盐，0.159；
总氮，4.12；
总磷，0.93。
测定硝酸盐氮的相对标准差为11.0％，相对误差为8.8％。