ABO正反定型、RH血型鉴定及ABO血清效价滴定和亲和力试验

D抗原是Rh抗原中免疫性最强的抗原，通过输血和妊娠，50%～ 75%的Rh阴性的个体，可因D抗原阳性红细胞免疫而产生抗D，并 可导致严重的溶血反应。
受血者或孕妇血浆中如含有Rh抗体，在输入含相应抗原的血液后， 将引起严重的溶血性输血反应或新生儿溶血病，以抗D与D红细胞尤 为显著。IgG类的Rh抗体，由于能通过胎盘，从而破坏胎儿有相应 抗原的红细胞，引起新生儿溶血病。
用已知血型的试剂红细胞检查血清中的抗体 （reverse typing， 反向定型或血清定型）， 结合正反定型来判断红细胞的ABO血型
正向定型
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玻片法 1.标记玻片 将玻片分为两区分别标记抗A、抗B 2.在相应区域滴加抗A/抗B试剂1d 3.滴加血液各1d，不断轻摇玻片，充分混匀，2min内判
Rh血型鉴定
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原理
单克隆混合试剂检测法 用Rh各抗血清（IgM+IgG型）试剂通过凝集 反应对红细胞上Rh抗原进行鉴定。
试管法
1.试管内加1dRh抗血清试剂 2.加1d待测血 3.轻轻混合，离心。 4.观察试管底并轻摇重悬，观察有无凝集
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注意事项
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1. Rh血型系统的抗体多由后天免疫刺激（主要 是输血或妊娠）而产生，故不需做反定型
2.若为阴性反应，应进一步做Rh阴性确认试验。 用抗D、E、C、c、e（IgG+IgM）混合型血 清定型试剂鉴定待测红细胞上的全部Rh抗原
临床意义
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Rh血型系统是当前发现的红细胞血型系统中最复杂的一个，其重要 性仅次于ABO血型系统。
Testing result
O A B AB
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blood group A B O AB
ABO blood group
antigen in red blood cell A B —
A、B
antibody in serum anti-B anti-A
anti-A,anti-B —
亲和力试验是指该血清中抗体与相应红细胞发生 凝集的强度与速度
效价滴定
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试管号 生理盐水（ml） 抗A血清（ml）
1 2 3 4 5 6 7 8 9(空白)
0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2
++ 凝块更小，游离红细胞占1/2
+
细小凝块，游离更多
凝集程度++时对应稀释度的倒数为该抗体的效价
亲和力试验
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已知抗体待测血清1d于玻片上，10％相应红细 胞生理盐水悬液2d加于血清液滴旁（不相接触）
玻棒混合两者，同时开动秒表，轻转玻片，混匀 记录出现凝集时间和3min时凝块大小 （要求15s内开始凝集，3min时凝块>1mm2）
3.取两支试管分别标记A1、B，加入待检血浆各2d 4.将A1、B型标准红细胞生理盐水悬液1d加入相应标记的试管 混
匀 1000r/min 30sec
5.观察结果 观察上层有无溶血 管底有无凝集 再用低倍镜观察
reverse typing（serum typing） AC BC ++ —+ +— ——
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血型输血实验一
ABO正反定型 ABO血清效价滴定和亲和力试验 Rh血型鉴定
实验目的
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重点掌握ABO血型正反定型的原理、方法、 临床意义
熟悉效价滴定和亲和力实验 熟悉Rh血型鉴定的原理、方法、临床意义
ABO血型正反定型
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原理
用已知特异性的抗体检测试剂检查红细胞的抗原 （forward typing，正向定型或红细胞定型）
断结果ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
forward typing（cell typing） anti-A anti-B —— +— —+ ++
Testing result
O A B AB
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反向定型
试管法
1.制备2％标准红细胞生理盐水悬液
1d已知血型RBC+49d生理盐水 混匀
2.分离血浆 2500r/min 3min
临床意义
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ABO血型系统，是迄今为止发现的最具临床价值 的一个血型系统，它将人的红细胞分成A、B、O 和AB四种血型，是输血医学和器官移植中最重要 的血型系统之一。
ABO血清效价滴定和亲和力试验
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原理
将标准血清用生理盐水经最大倍数稀释与相应的 红细胞抗原发生一定强度以上的凝集即为该血清 的效价，也就是血清中所含抗体的浓度
弃去 2％A红细胞（ml） 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2
最后稀释度
1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:128 1:256 1:512
混匀 1000r/min 2min 观察结果
++++ 凝集成大块，几乎无游离红细胞
+++ 凝集块稍小，有少量游离红细胞
注意事项
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1.严格标记 摇动玻片动作要轻 2.所有器材干燥清洁、防止溶血，避免交叉污染 3.血型试剂平衡至室温再使用，用后尽快放回冰箱 4.玻片法注意防止干涸，以免误判为凝集 5.试管法 若溶血表明有补体激活（应区别标本采样等其它
因素引起的溶血），视为凝集 6.防止冷凝集素干扰，室温（20-24℃）下试验