PCR方法在ApoE基因敲除小鼠基因型鉴定中的应用

基因敲除⼩⿏的PCR鉴定基因敲除⼩⿏的 PCR 鉴定⼀、实验⽬的：通过PCR T增程序及琼脂糖凝胶电泳⽅法鉴定凝⾎因⼦IX基因敲除⼩⿏的基因型。

⼆、实验原理：真核⽣物的⼀切有核细胞（包括培养细胞）都能⽤来制备基因DNA真核⽣物的DNA是以染⾊体的形式存在于细胞核内，因此，制备DNA的原则是既要将DNA与蛋⽩质、脂类和糖类等分离，⼜要保持DNA分⼦的完整。

提取DNA勺⼀般过程是将分散好的组织细胞在含SDS（⼗⼆烷基硫酸钠）和蛋⽩酶K的溶液中消化分解蛋⽩质，再⽤酚和氯仿/异戊醇抽提分离蛋⽩质，得到的DNA溶液经⼄醇沉淀使DNA从溶液中析出。

1.PCR原理：PCF技术的基本原理类似于DNA勺天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。

PCF由变性-退⽕-延伸三个基本反应步骤构成：1）模板DNA的变性：模板DNA S加热⾄93C左右⼀定时间后，使模板DNA双链或经PCF T增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；2）模板DNA与引物的退⽕（复性）：模板DNA经加热变性成单链后，温度降⾄55C 左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；3）引物的延伸：DNA模板-引物结合物在TaqDNA聚合酶的作⽤下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成⼀条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链重复循环变性-退⽕-延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”，⽽且这种新链⼜可成为下次循环的模板。

每完成⼀个循环需2?4分钟，2?3⼩时就能将待扩⽬的基因扩增放⼤⼏百万倍2.琼脂糖凝胶电泳原理：在pH8.0~8.3 的缓冲液中，核酸分⼦带负电荷，向正极移动。

由于不同⼤⼩和构象的核酸分⼦电荷密度⼤致相同，因此在⾃由泳动时，各种核酸分⼦的迁移率相似，⽆法分开。

然⽽，在浓度适当的凝胶中，由于分⼦筛效应，使⼤⼩和构象不同的核酸迁移率出现差异，从⽽把它们分开。

湖北中医药大学本科生毕业论文题目：PCR方法在ApoE基因敲除小鼠基因型鉴定中的应用姓名：学号：专业：生物技术年级：2008级实习单位：武汉大学心血管病研究所指导老师：完成日期：2012 年5 月1 日PCR方法在ApoE基因敲除小鼠基因型鉴定中的应用作者肖明瑶指导者张艳摘要目的为ApoE基因敲除鼠探索快速、简单的基因型PCR检测方法。

方法设计两对引物扩增野生型ApoE基因和ApoE缺陷突变基因的DNA片段，用PCR仪梯度方案测试最佳退火温度，然后用PCR鉴定方案检测小鼠基因型并将所得基因型结果与已经过经典的Southern blot方法检测得到的基因型结果比较。

结果野生型仅在155 bp处有一条条带，突变纯舍子仅在245 bp处有一条条带，杂合子则在155和245bp处出现两条条带。

用PCR方法获得的ApoE基因分析结果与经典的Southern blot方法获得的结果完全一致。

结论用PCR方法分析ApoE基因敲除鼠的基因型具有快速、简单、廉价和适用的特点。

关键词聚合酶链反应基因型基因打靶载脂蛋白EGenotype identification of ApoE Gene Knockout Mice withPolymerase Chain ReactionObjective This study was to explore a simple and quick polymerase chain reaction（PCR）method for genotyping of ApoE knockout mice.Method Two pairs of primers were designed to amplify genomic DNA fragment of wild-type ApoE gene and the same region on ApoE targeting veceor respectively.A gradient PCR strategy was used to test the best annealing temperature. Results A 155bp band was found in wild-type ApoE mice,a 245 bp band in homozygous mutated ApoE mice and both bands in hetemzygous mice.The genotyping results were completely coincided with those from typical Southern blot. Conclusion PCR is a simple,fast and practical method for the genotyping of ApoE gene knockout mice.Key words Poiymerase Chain Reaction genotype gene targeting ApoE载脂蛋白(apolipoprotein，ApoE)是清除乳糜微粒和极低密度脂蛋白的受体的配体，因此，缺乏ApoE则会导致血液循环中富含胆同醇的物质积累而更加容易引起动脉粥样硬化(atl-rosclerosis，AS)病灶形成。

芳香物、卤化物和杀虫剂等，因此在污水的三级处理过程中也具有潜在应用价值。

研究显示，特氏杜氏藻中的金属结合肽和植物螯合肽可将无机砷代谢成砷聚合物，从而达到去除环境中重金属的目的。

6环境指示相对其他测试生物(如动物)而言，藻类对生活污水或工业废水有更高的敏感性。

利用藻类来指示环境毒性的研究，最近有很多报道。

Santin-Montanya等报道了7种微藻对海洋环境杀虫剂的测试方法，指出普氏杜氏藻是禾草灭、稀禾定、苯嗪草酮、二氯吡啶酸等杀虫剂的最佳指示剂。

黄小娟等［4］利用杜氏藻生长阻碍实验，测定排放到环境中特别是饮用水中的有机毒物，从而得知被测化合物的生物毒性。

这种行之有效的测试饮用水污染的方法，在水质污染监测和控制方面有着广阔的应用前景。

综上所述，杜氏藻是一种优越的经济藻类，具有独特的生理特性。

随着科技的发展以及消费者对天然产品的需求日益增加，杜氏藻的效能和应用价值将越来越广泛地被开发出来，进而在医药、食品、养殖业、化妆品等领域发挥越来越重要的作用。

主要参考文献1Leon R.,Vila M.,Hernanz D.et al.Production of phytoene by herbicide-treated microalgae Dunaliella bardawil in two-phase systems.Biotechnol Bioeng,2005,92:695—701.2尹鸿萍,盛玉青.盐藻多糖体内抑菌及抗炎作用的研究.中国生化药物杂志，2006,27(6):361—363.3朱红红,尹鸿萍.盐藻多糖抗病毒实验研究.南京中医药大学学报,2007,23(5):310—312.4黄小娟,沈洛夫,姜建国等.卤代物对盐藻生长抑制实验的联合效应的观察.癌变·畸变·突变,2005,17(1):27—28.（E-mail:chendefu@）基因敲除（gene knock-out）是指借助分子生物学、细胞生物学和动物胚胎学的方法，通过胚胎干细胞这一特殊的中间环节将模式生物正常的功能基因的编码区破坏，使特定基因失活，以研究该基因的功能，或者通过外源基因来替换宿主基因组中的相应部分，以便测定它们是否具有相同的功能，或者将正常基因引入宿主基因组中置换突变基因以达到靶向基因治疗的目的。

一、技术介绍与研究进展转基因、基因敲入/敲除动物技术已经成为现代生命科学基础研究和药物研发领域不可或缺的重要技术，该技术从上世纪七八十年代诞生以来，至今已有近四十年的历史，经典技术如DNA原核显微注射、胚胎干细胞显微注射技术一直以来经久不衰，在小鼠模型构建方面日趋完善，并且如同剪切酶和抗体等常规分子生物学试剂的制备技术一样，逐渐从基础研究实验室转向商业模式，成为一项高度标准化的新兴产业，催生了数以百计的创新药物和数以千计的优秀文章。

尽管如此，传统技术仍然存在一些难以克服的缺陷，如步骤繁琐、周期漫长、成功率低、费用高昂等，而ZFN和TALEN 等新技术的出现，或有可能将这一局面彻底改变。

二、同源重组技术原理基因敲除鼠技术是上世纪80年代中后期基于DNA同源重组的原理发展起来的，Capecchi和Smithies在1987年根据同源重组（homologous recombination）的原理，首次实现了ES的外源基因的定点整合（targeted integration），这一技术称为"基因打靶"（gene targeting）或"基因敲除"（gene knockout），利用这种ES的显微注射就可以制作出基因敲出小鼠（KO Mice: knockout mice）;由于这一工作，Capecchi和Smithies于2007年与Evans分享了诺贝尔医学奖。

同源重组（homologous recombination）定义：是指发生在姐妹染色单体（sister chromatin) 之间或同一染色体上含有同源序列的DNA分子之间或分子之内的重新组合。

在基因敲除小鼠制作过程中，需要针对目的基因两端特异性片段设计带有相同片段的重组载体，将重组载体导入到胚胎干细胞后外源的重组载体与胚胎干细胞中相同的片段会发生同源重组，如图1所示：图1.基因敲除鼠制作同源重组原理示意图三、制作流程图2.基因敲除鼠制作过程示意图1. Knockout载体设计与构建根据研究项目具体情况和要求把目的基因和与细胞内靶基因特异片段同源的DNA 片段都重组到带有标记基因(如neo 基因，TK 基因等)的载体上，成为重组的Knockout载体。

全基因敲除小鼠基因型鉴定原理及方法下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。

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Apoe和Ldlr基因敲除对大鼠巨噬细胞炎症，免疫功能及脂质溶出功能的影响Apo和Lddlr基因敲除小鼠均是研究动脉粥样硬化症常用模型,任一基因的敲除均能使小鼠表现出血管斑块形成,高胆固醇血症以及严重的慢性炎症反应。

大鼠相比小鼠具有脂代谢和基因组同源性更接近人类,取样简便,易长期实时监控等优势,并且有关Apoe,Ldlr基因敲除大鼠模型中免疫调控功能的系统评价并未报道。

本实验室前期已经利用CRISPR技术成功建立了Apoe,Ldlr单基因敲除以及双基因敲除大鼠模型。

由于在人类动脉粥样硬化炎症反应中内皮下巨噬细胞在起着关键作用,且在小鼠研究中发现Apoe,Ldlr影响巨噬细胞及前体单核细胞不同方面的功能,因此本课题旨在不同的喂养条件下,研究基因敲除对大鼠巨噬细胞功能造成的影响,进一步理清这两个基因对巨噬细胞的调节作用及其在动脉粥样硬化发生发展的功能,为针对性研究参与动脉粥样硬化疾病复杂炎症反应中选择最佳动脉粥样硬化症大鼠模型提供理论依据。

实验结果显示无论是普通饲料还是高胆固醇饲料喂养条件下,相比于野生型大鼠,Apoe^-/-,L lr^-/-和Apoe^-/-Ldlr^-/-大鼠血液中总胆固醇及低密度脂蛋白（LDL）明显上调,而氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）则并无差异。

脾脏脏器系数则显示只有在高胆固醇饲料喂养组中Ldlr^-/-大鼠相比野生型明显上调,但此时Apoe^-/-和LdLdr/-/脾脏中巨噬细胞比例均有下调,外周血中的巨噬细胞比例则没有明显变化。

随后我们进一步检测了动脉粥样硬化病程密切相关的巨噬细胞功能,发现Apoe^-/-大鼠单核细胞迁移能力明显强于野生型和Ldlr^-/-及Apoe^-/-Ldlr^-/-。

【摘要】目的探讨载脂蛋白E（apoE）基因多态性与轻度认知障碍（MCI）的关系。

方法应用限制性片段长度多态分析-聚合酶链反应（RFLP-PCR）方法，测定56例MCI患者和89例同龄对照组apoE基因型和等位基因频率。

结果 MCI组ε2、ε3、ε4等位基因频率分别为7.14%、71.38%和21.48%，而同龄对照组分别为7.30%、84.83%和7.87%。

apoEε4等位基因在MCI患者中出现的频率明显高于对照组，统计学分析说明差异具有非常显著性（P<0.01）。

结论 apoEε4等位基因是MCI的危险因素。

【关键词】轻度认知障碍；多态性；载脂蛋白E；基因型【Abstract】 Objective To analyse the association of apolipoprotein E(apoE) genotypes with mild cognitive impairment(MCI).Methods RFLP-PCR technology is applied to analyse the apoE allele frequency of 56 MCI patients and 89 controls.Results Among the 56 cases of MCI，the frequency of apoEε2，ε3，ε 4 are 7.14%，71.38%，21.48% respectively，while in the 89 controls they are 7.30%，84.83%，7.87% respectively.The frequencies of the two groups have significant difference(P<0.01)and the frequency of apoEε 4 allele is higher in MCI than that in the controls and the statistical treatment suggest that there is significant difference（P<0.01）.Conclusion The apoEε 4 allele is a genetic risk factor of MCI. 【Key words】mild cognitive impairment;polymorphism;apolipoprotein E;genotypes 轻度认知障碍（mild cognitive impairment，MCI）特指有轻度记忆或认知损害、但无痴呆的老年人，其病因不能由已知的医学或神经精神病状况解释。

apoa5基因敲除仓鼠模型的构建方法
ApoA5基因是人体中一个重要的脂质代谢相关基因，它编码的蛋白质可以调节血浆三酰甘油水平。

因此，研究ApoA5基因的功能和作用对于了解脂质代谢的机制以及相关疾病的发生发展具有重要意义。

为了更好地研究ApoA5基因的功能，科学家们利用基因敲除技术构建了ApoA5基因敲除仓鼠模型。

ApoA5基因敲除仓鼠模型的构建方法主要包括以下几个步骤：
1.设计ApoA5基因敲除的引物
首先，科学家们需要设计一对特异性引物，用于扩增ApoA5基因的外显子序列。

引物的设计需要考虑到引物的长度、GC含量、Tm值等因素，以确保引物的特异性和扩增效率。

2.构建ApoA5基因敲除载体
将引物扩增得到的ApoA5基因外显子序列克隆到敲除载体中，构建ApoA5基因敲除载体。

敲除载体通常包括两个同向的荧光蛋白基因，用于筛选敲除细胞株。

3.转染和筛选
将ApoA5基因敲除载体转染到仓鼠胚胎干细胞中，利用荧光蛋白筛选出ApoA5基因敲除细胞株。

筛选出的细胞株需要进行PCR验证和Southern blotting确认。

4.建立ApoA5基因敲除仓鼠模型
将ApoA5基因敲除细胞株注射到野生型仓鼠的受精卵中，通过胚胎移植技术建立ApoA5基因敲除仓鼠模型。

建立的仓鼠模型需要进行PCR验证和Southern blotting确认。

通过以上步骤，科学家们成功地构建了ApoA5基因敲除仓鼠模型。

这个模型可以用于研究ApoA5基因的功能和作用，以及与脂质代谢相关的疾病的发生发展机制。

同时，这个模型也为开发相关疾病的治疗方法提供了新的思路和途径。

湖北中医药大学本科生毕业论文题目：PCR方法在ApoE基因敲除小鼠基因型鉴定中的应用姓名：肖明瑶学号： 20080403022 专业：生物技术年级： 2008级实习单位：武汉大学心血管病研究所指导老师：张艳完成日期： 2012 年 5 月 1 日PCR方法在ApoE基因敲除小鼠基因型鉴定中的应用作者肖明瑶指导者张艳摘要目的为ApoE基因敲除鼠探索快速、简单的基因型PCR检测方法。

方法设计两对引物扩增野生型 ApoE基因和ApoE缺陷突变基因的DNA片段，用PCR仪梯度方案测试最佳退火温度，然后用PCR鉴定方案检测小鼠基因型并将所得基因型结果与已经过经典的Southern blot方法检测得到的基因型结果比较。

结果野生型仅在155 bp处有一条条带，突变纯舍子仅在245 bp处有一条条带，杂合子则在155和245bp处出现两条条带。

用PCR 方法获得的ApoE基因分析结果与经典的Southern blot方法获得的结果完全一致。

结论用PCR方法分析ApoE基因敲除鼠的基因型具有快速、简单、廉价和适用的特点。

关键词聚合酶链反应基因型基因打靶载脂蛋白EGenotype identification of ApoE Gene Knockout Mice withPolymerase Chain ReactionObjective This study was to explore a simple and quick polymerase chain reaction（PCR）method for genotyping of ApoE knockout mice.Method Two pairs of primers were designed to amplify genomic DNA fragment of wild-type ApoE gene and the same region on ApoE targeting veceor respectively.A gradient PCR strategy was used to test the best annealing temperature. Results A 155bp band was found in wild-type ApoE mice,a 245 bp band in homozygous mutated ApoE mice and both bands in hetemzygous mice.The genotyping results were completely coincided with those from typical Southern blot. Conclusion PCR is a simple,fast and practical method for the genotyping of ApoE gene knockout mice.Key words Poiymerase Chain Reaction genotype gene targeting ApoE载脂蛋白(apolipoprotein，ApoE)是清除乳糜微粒和极低密度脂蛋白的受体的配体，因此，缺乏ApoE则会导致血液循环中富含胆同醇的物质积累而更加容易引起动脉粥样硬化(atl-rosclerosis，AS)病灶形成。

《壳寡糖对载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化影响及其机制的研究》一、引言动脉粥样硬化（AS）是一种慢性血管疾病，其发病机制复杂，涉及多种因素。

载脂蛋白E（ApoE）基因敲除小鼠是研究动脉粥样硬化的常用模型。

近年来，壳寡糖作为一种生物活性物质，其抗动脉粥样硬化的潜力逐渐受到关注。

本文旨在研究壳寡糖对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化的影响及其作用机制。

二、材料与方法1. 实验动物与分组选用ApoE基因敲除小鼠作为实验对象，将其随机分为四组：正常对照组、模型组（仅喂养高脂饲料）、壳寡糖低剂量组、壳寡糖高剂量组。

2. 实验方法（1）饲养与处理：各组小鼠分别进行相应饮食处理，壳寡糖组在喂养高脂饲料的同时添加不同剂量的壳寡糖。

（2）检测指标：定期检测小鼠血脂水平、动脉组织病理学变化等。

（3）机制研究：通过分子生物学技术，研究壳寡糖对相关基因表达、信号通路的影响。

三、实验结果1. 壳寡糖对ApoE基因敲除小鼠血脂水平的影响实验结果显示，壳寡糖能够显著降低ApoE基因敲除小鼠的血脂水平，包括总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）等。

2. 壳寡糖对ApoE基因敲除小鼠动脉组织病理学变化的影响与模型组相比，壳寡糖组小鼠动脉粥样硬化程度明显减轻，斑块面积减小，血管壁厚度降低。

3. 壳寡糖的作用机制研究（1）基因表达：壳寡糖能够上调相关抗氧化酶基因的表达，降低氧化应激反应。

（2）信号通路：壳寡糖能够抑制炎症因子表达，调节NF-κB等信号通路，从而减轻炎症反应。

四、讨论本研究表明，壳寡糖能够显著降低ApoE基因敲除小鼠的血脂水平，减轻动脉粥样硬化程度。

其作用机制可能与上调抗氧化酶基因表达、抑制炎症反应等有关。

这些发现为壳寡糖在动脉粥样硬化防治中的应用提供了理论依据。

然而，仍需进一步研究壳寡糖的具体作用机制及最佳剂量，以更好地应用于临床实践。

五、结论本研究通过实验证实了壳寡糖对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化的积极影响及其作用机制。

基因敲除小鼠pc鉴一、技术介绍与研究进展敲除动物技术已经/ 基因、基因敲入转该技术从上世成为现代生命科学基础研究和药物研发领域不可或缺的重要技术，原核显史，经典技术如DNA纪七八十年代诞生以来，至今已有近四十年的历在小鼠模型构建方面日趋微注射、胚胎干细胞显微注射技术一直以来经久不衰，制备技术一样，逐渐从完善，并且如同剪切酶和抗体等常规分子生物学试剂的催生了数以百基础研究实验室转向商业模式，成为一项高度标准化的新兴产业，然存在一些难以计的创新药物和数以千计的优秀文章。

尽管如此，传统技术仍TALEN和费用高昂等，而ZFN克服的缺陷，如步骤繁琐、周期漫长、成功率低、等新技术的出现，或有可能将这一局面彻底改变。

二、同源重组技术原理同源重组的原理发展起来的，年代中后期基于DNA基因敲除鼠技术是上世纪80）homologous recombination1987年根据同源重组（在Capecchi和Smithies），这的外源基因的定点整合（EStargeted integration的原理，首次实现了），gene knockout（基因敲除）或gene targeting（基因打靶一技术称为利用这种ES的显微注射就可以制作出基因敲出小鼠（KO Mice: knockout mice）;由于这一工作，Capecchi和Smithies于2007年与Evans分享了诺贝尔医学奖。

同源重组（homologous recombination）定义：是指发生在姐妹染色单体（sister chromatin) 之间或同一染色体上含有同源序列的DNA分子之间或分子之内的重新组合。

在基因敲除小鼠制作过程中，需要针对目的基因两端特异性片段设计带有相同片段的重组载体，将重组载体导入到胚胎干细胞后外源的重组载体与胚胎干细胞中相同的片段会发生同源重组，如图1所示：1.基因敲除鼠制作同源重组原理示意图图制作流程三、．基因敲除鼠制作过程示意图图2. 载体设计与构建1. Knockout根据研究项目具体情况和要求把目的基因和与细胞内靶基因特异片段同源的的载体上，成为重基因等TK )基因，如片段都重组到带有标记基因DNA (neoKnockout组的载体。

DOI：10.3969/j.issn.l007-5062.2021.03.015•基础研究•重组腺病毒载体敲减ApoE-/-小鼠血管平滑肌细胞Orai1基因模型的构建费舒扬葛长江［摘要］目的：为探讨Orai1基因在动脉粥样硬化进展中的作用，通过重组腺病毒载体建立ApoE"小鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)Orai1基因的敲低模型,为深入相关研究奠定基础。

方法：构建针对小鼠Orai1基因的重组腺病毒载体。

高脂饲养ApoE，小鼠至16周龄后处死。

取胸主动脉原代VSMCs改为体外培养，细胞分为三组,分别为shOrai1组、shNC组和对照组。

转染后通过实时定量聚合酶链式反应(qPCR),Western blot检测Orai1表达水平，同时对转染模型进行验证。

结果：qPCR示，重组腺病毒在ApoE"小鼠VSMCs中Orai1基因的干扰效率达57%,Western blot结果示,Ad-GFP-Orial-shRNA转染组Orai1蛋白表达水平显著降低。

结论：通过成功建立ApoE"-小鼠VSMCs中Orai1基因敲低模型，从而为阐明钙库操纵性钙通道在动脉粥样硬化进程中的作用，尤其关于斑块延展和不稳定的相关性研究奠定了基础。

［关键词］Orai1基因；动脉粥样硬化;核糖核酸干扰;血管平滑肌细胞［中图分类号］R54［文献标志码］A［文章编号］1007-5062(2021)03-281-06Establishment of Orail gene knock down model in ApoE""mouse vascular smooth mucsle cells with ad­enovirus interference vector FEI Shuyang,GE Changjiang Department of Cardiology,Beijing Anzhen Hos­pital,Capital Medical University,Beijing Institute of Heart,Lung and Blood Vessel Diseases,Beijing100029,China［Abstract］Objective:To further investigate the role of calcium release-activated calcium channelmodulator1(Orai1)in the process of Atherosclerosis,the recombinant adenovirus vector was used to establishthe ApoE--mouse vascular smooth mucsle cells(VSMCs)Orai1gene knock down model for further relatedstudies.Methods:A recombinant adenovirus vector(Ad-GFP-Orial-shRNA)targeting the Orai1gene in micewas constructed.ApoE--mouse fed with high-fat diet were sacrificed at16weeks of age.VSMCs extracted fromthe thoracic aorta were cultured in vitro.The cells were randomly divided into3groups for Ad-GFP-Orial-shRNA infection,Ad-GFP-NC-shRNA infection and control group.Orai1expression was tested by qPCR(quantitative real-time polymerase chain reaction)and Western blot to validated the model.Results：qPCRshowed that the Orai1mRNA in VSMCs decreased by57%,Western blot showed that Orai1protein expressionlevel was significantly reduced.Conclusions:The ApoE--mouse VSMCs Orai1gene knock down model wassuccessfully established,building a foundation to further study the mechanism of SOCC participate in theprocess of atherosclerosis and its impact on plaques'extension and instability.［Keywords］Orai1；RNA intereference；Atherosclerosis；Vascular smooth mucsle cells钙库操纵性钙通道(stored operated calcium内流的重要离子通道，参与调节血管平滑肌细胞channel,SOCC)是非兴奋细胞所介导胞质外钙离子(vascular smooth muscle cells,VSMCs)的增殖、迁移基金项目：2020年北京自然科学基金（7202039）作者单位：100029首都医科大学2018级临床心血管专业硕士研究生（费舒扬）；首都医科大学附属北京安贞医院-北京市心肺血管疾病研究所心内科（葛长江）通信作者：葛长江,教授,研究生导师，博士，研究方向：冠心病的药物和介入治疗。

ApoE 基因敲除对小鼠 B、T 淋巴细胞的影响石桂英;张海涛;张连峰;白琳【摘要】目的：了解Apo E基因敲除对淋巴细胞的影响。

方法用不同抗体标记Apo E基因敲除及同窝野生对照小鼠的外周血、脾脏、骨髓等细胞，应用流式细胞仪进行分析，比较两组之间的差异。

结果对检测结果进行统计分析发现，与野生型小鼠相比，Apo E基因敲除小鼠的外周血、脾脏淋巴细胞、短期造血干细胞均有改变，骨髓前体B淋巴细胞、胸腺T淋巴细胞、长期造血干细胞等没有显著变化。

结论 Apo E基因敲除后，小鼠外周血及脾脏B淋巴细胞减少，骨髓短期造血干细胞增加，但B及T淋巴细胞发育，以及骨髓长期造血干细胞、淋系共同祖细胞都没有显著变化。

%Objective To study the influence of Apo E gene knockout on the lymphocytes . Methods Cells from the peripheral blood, spleen and bone marrow of Apo E knockout and wildtype mice were stained with kinds of antibodies , and analyzed by flow cytometry .Results Compared with wildtype mice , significant differences were found in B and T lymphoctes in the peripheral blood and spleen , but there was no significant difference in pre B cells , T lymphocytes in the thymus and long term hematopoietic stem cell in the Apo E knockout mice .Conclusion Numbers of B lymphocytes decreased in the peripheral blood and spleen , but there was no significant difference in B , T lymphocytes development , and numbers of long term hematopoietic stem cell in Apo E gene knockout mice .【期刊名称】《中国比较医学杂志》【年(卷),期】2014(000)005【总页数】5页(P5-9)【关键词】Apo E基因敲除小鼠;流式细胞术;骨髓造血干细胞【作者】石桂英;张海涛;张连峰;白琳【作者单位】中国医学科学院北京协和医学院实验动物研究所，卫生部人类疾病比较医学重点实验室，北京 100021;中国医学科学院北京协和医学院实验动物研究所，卫生部人类疾病比较医学重点实验室，北京 100021;中国医学科学院北京协和医学院实验动物研究所，卫生部人类疾病比较医学重点实验室，北京 100021;中国医学科学院北京协和医学院实验动物研究所，卫生部人类疾病比较医学重点实验室，北京 100021【正文语种】中文【中图分类】R332载脂蛋白E(apolipoprotein E，Apo E)是一种多态性蛋白，参与脂蛋白的转化与代谢过程，其基因可以调节多种生物学功能[1]。

Apoe敲除⼩⿏研究应⽤
1. 在接触⾹烟烟雾和减少危害的背景下研究⼼⾎管和呼吸系统疾病
动脉粥样硬化是⼀种慢性疾病，其中全⾝性炎症是动脉内膜斑块堆积的基础。

Apoe敲除⼩⿏的全⾝促炎状态也使它们成为研究慢性阻塞性肺疾病的良好候选对象，其特征是肺部炎症、⽓道阻塞和肺⽓肿，并与包括吸烟在内的⼼⾎管疾病有共同的危险因素。

图脂质失衡、内⽪功能障碍和全⾝性炎症⼀起决定了Apoe敲除⼩⿏（和⼈类）的动脉粥样硬化以及肺部炎症的发展。

2. 研究对⼼⾎管功能的影响
动脉粥样硬化⼩⿏模型和在⼩⿏体内进⾏⾎流动⼒学测量的技术的结合，可以⽤来研究⾼胆固醇⾎症和/或动脉粥样硬化对⼼⾎管功能的影响。

可⽤于研究⼀氧化氮、活性氧、衰⽼和饮⾷在⼼⾎管功能损害⼩⿏模型中的相互作⽤。

3. 动脉粥样硬化过程的⼲预疗法
●营养⼲预研究：使⽤不同饮⾷（营养程度的不同程度缺失或增加）可导致斑块形态的改变或者引起斑块不稳定性。

●药理研究：已知的降低⾎脂的药物都会影响Apoe敲除⼩⿏的动脉粥样硬化病变⾯积，对动脉粥样硬化作为炎症性疾病的兴趣也引起了Apoe敲除⼩⿏模型对抗炎药物的动脉粥样硬化研究。

2021年第56卷第2期生物学通报39利用P0E策略进行基于真实科研情境的P C R实验教学(北京市十一学校北京100039)摘要基于真实的科研情境进行设计，引入基因敲除技术和遗传学分析，通过P O E教学 策略带领学生确定实验核心问题，根据实验原理对实验结果进行预测，对实验结果进行观察、分析和解释，转变错误概念。

像科学家一样研究工作，培养学生的科学思维和科学探究能力，落 实核心素养。

关键词科研情境P O E策略P C R概念转变中国图书分类号：G633.91 文献标识码：AP O E教学模式是20世纪90年代初由White R. T■与Gunstone R.F■基于概念转变理论和人本建构主义理论提出的课程组织形式。

该教学模式将课程分为预测（predict )、观察（observe)和解 释（explain”个阶段，往往借助实验为教学内容背景，引导学生根据前科学概念预测实验结果、观 察真实实验现象、利用学科知识解释实验现象，实 现错误概念的转化，建立科学的生物学概念m。

通 过对课程内容进行合理的P0E教学设计，同时渗 透生物学科学研究的思想方法，培养学生的实验探究能力，充分尊重了学生的认识发展规律[2]。

在分子水平的生物学研究中，P C R(聚合酶链 式反应）是最常用的技术之一。

新课标的“教学提 示”明确提出了“利用聚合酶链式反应（P C R)扩增 D N A片段并完成电泳鉴定”的要求。

在基因工程等 微观领域的生物学研究与实践中，P C R实现了扩增 目的基因及更为广泛的应用。

选取载脂蛋白E (A P〇E)和软骨寡聚基质蛋白（C0M P)2个代谢相关 蛋白基因的功能研究为背景，融入基因敲除技术，带领学生通过预测、观察和解释等环节，通过P C R 实验对敲除小鼠的基因型进行检测，实现遗传学、基因工程等高中生物学概念的综合运用。

在实验 中，学生有机会像科学家一样明确研究问题、设计 实验方案、分析实验结果，实现2017年修订版生物 学课程标准提出的“教学过程重实践”的课程理念。

基因敲除技术在小鼠模型制造中的应用在现代医学领域中，基因敲除技术是一种非常重要的技术手段。

它可以在生物体中去除某个特定基因的功能，以研究该基因对该生物体的影响。

这种技术被广泛应用于小鼠模型的制造中，以研究人类疾病，寻找药物，以及了解生物学机制。

本文将重点介绍基因敲除技术在小鼠模型制造中的应用。

一、基因敲除技术的原理基因敲除技术是通过基因重组技术，利用DNA重组酶将需要敲除的基因替代或切除，从而使其不能正确表达，无法正常发挥作用。

这种基因敲除在小鼠中通过转基因技术实现，将目标基因的DNA序列替换为荧光蛋白等DNA序列，用于研究疾病机制和药物筛选。

二、基因敲除技术在小鼠模型制造中的应用基因敲除技术在小鼠模型制造中的应用非常广泛。

由于小鼠与人类的基因组具有很高的相似性，这种技术可以很好地模拟人类疾病的发展过程，为新药发现提供重要的依据。

1. 基因敲除技术在疾病研究中的应用基因敲除技术可以用于研究特定基因在疾病发展中的作用。

例如，最近的一项研究发现，敲除小鼠中的RPAP3基因可以导致血管炎的发生，这为研究人类的自身免疫疾病提供了新的方向。

此外，基因敲除技术还可以用于研究基因调控机制以及新型抗生素药物的开发和筛选。

2. 基因敲除技术在药物研发中的应用基因敲除技术在药物研发中也起到了非常重要的作用。

由于小鼠模型能够较好地模拟人类疾病的特点，因此敲除小鼠中的基因可以用于药物的初步筛选。

例如，现在已经有许多药物被证明可以通过敲除特定基因来预防或治疗人类疾病，比如可以通过敲除PPARG基因来改善非酒精性脂肪性肝病。

3. 基因敲除技术在基因组编辑中的应用基因敲除技术在基因组编辑中也是一个应用非常广泛的技术。

例如，利用基因敲除技术可以制作出缺乏某个基因的小鼠模型，用于研究该基因的生物学特性，从而探究人类基因组结构和功能的各种调控机制。

三、基因敲除技术在小鼠模型制造中的局限性和未来展望在基因敲除技术的应用中，仍然存在一些局限性。

矿产资源开发利用方案编写内容要求及审查大纲
矿产资源开发利用方案编写内容要求及《矿产资源开发利用方案》审查大纲一、概述
㈠矿区位置、隶属关系和企业性质。

如为改扩建矿山, 应说明矿山现状、
特点及存在的主要问题。

㈡编制依据
(1简述项目前期工作进展情况及与有关方面对项目的意向性协议情况。

(2 列出开发利用方案编制所依据的主要基础性资料的名称。

如经储量管理部门认定的矿区地质勘探报告、选矿试验报告、加工利用试验报告、工程地质初评资料、矿区水文资料和供水资料等。

对改、扩建矿山应有生产实际资料, 如矿山总平面现状图、矿床开拓系统图、采场现状图和主要采选设备清单等。

二、矿产品需求现状和预测
㈠该矿产在国内需求情况和市场供应情况
1、矿产品现状及加工利用趋向。

2、国内近、远期的需求量及主要销向预测。

㈡产品价格分析
1、国内矿产品价格现状。

2、矿产品价格稳定性及变化趋势。

三、矿产资源概况
㈠矿区总体概况
1、矿区总体规划情况。

2、矿区矿产资源概况。

3、该设计与矿区总体开发的关系。

㈡该设计项目的资源概况
1、矿床地质及构造特征。

2、矿床开采技术条件及水文地质条件。

矿产资源开发利用方案编写内容要求及审查大纲
矿产资源开发利用方案编写内容要求及《矿产资源开发利用方案》审查大纲一、概述
㈠矿区位置、隶属关系和企业性质。

如为改扩建矿山, 应说明矿山现状、
特点及存在的主要问题。

㈡编制依据
(1简述项目前期工作进展情况及与有关方面对项目的意向性协议情况。

(2 列出开发利用方案编制所依据的主要基础性资料的名称。

如经储量管理部门认定的矿区地质勘探报告、选矿试验报告、加工利用试验报告、工程地质初评资料、矿区水文资料和供水资料等。

对改、扩建矿山应有生产实际资料, 如矿山总平面现状图、矿床开拓系统图、采场现状图和主要采选设备清单等。

二、矿产品需求现状和预测
㈠该矿产在国内需求情况和市场供应情况
1、矿产品现状及加工利用趋向。

2、国内近、远期的需求量及主要销向预测。

㈡产品价格分析
1、国内矿产品价格现状。

2、矿产品价格稳定性及变化趋势。

三、矿产资源概况
㈠矿区总体概况
1、矿区总体规划情况。

2、矿区矿产资源概况。

3、该设计与矿区总体开发的关系。

㈡该设计项目的资源概况
1、矿床地质及构造特征。

2、矿床开采技术条件及水文地质条件。