一株拮抗烟草青枯病菌的真菌的筛选与鉴定

一
株 拮 抗 烟 草 青 枯 病 菌 的 真 菌 的 筛 选 与 鉴 定
周 晓见Ｌ，陈毓道 ，缪莉 ，董 昆明１，董夏伟 ， ２ ，靳翠丽Ｌ
１ ．扬州 大学 环境 科学 与工 程学 院 ，江苏 扬 州 ２ ５２ ；２ ２ １７ ．扬州 大学 海 洋科 学与 技术 研究 所 ，江苏 扬州 ２ ５２ ２ １７
摘 要 ：为寻找烟 草青枯病 的生 防微生物 ，研究采用平板涂 布法从重庆烟 田健康土壤 中分离 根际微生 物 ，纯化后得 到了 ５ ９株 真菌 。用滤纸 片法从 中筛选 出 １ 株对青枯雷尔 氏菌 （ ａｓｏ ｉ ｓｌｎ ｃａｕ 有稳定拈抗 效果的真菌 ，其抑菌圈为 １． ｍｉ。 Ｒ ｌ ｎａ ｏ ａ ｅｒｍ） ｔ ａ ００ ｌ ｌ 其 抑制 活性优 于或接 近于近期 发现 的其他生 防微生物 。测定 该株 活性 真菌 的全 细胞脂肪 酸组成 ， 进行 菌落和分生孢子 形态 学 观察 ，以及 ｒ ＮＡ Ｉ Ｓ区测序 ，结果表 明 ：该菌株全细胞脂肪 酸属性未 被收 录于 Ｔ Ｂ 脂肪 酸数 据库 ，而根据形 态学观察 Ｄ Ｔ Ｓ Ａ６ 结 果 ，以及对所获 ｒ ＮＡＩＳ区序列 的分析 ，鉴定该株 真菌 为烟 曲霉 （ ｓｅｇｌ ｓｕ ｇ ｔ Ｄ Ｔ Ａｐ ｒｉｕ ｆ ｍｉ ｕ ｌ ａ ｓ）。 关键词 ：抗 菌活性 ；真菌 ；青 枯雷 尔氏菌 ；鉴定
原来是指生存在植物根圈范围中， 对植物生长有促 进 或对 病原 菌有 拮抗 作用 的有 益 的细菌 统 称 。而深 入 的研 究 发现 ，不 仅原 核微 生物 的某 些放 线菌 或者 细菌都可以起促生作用 ， 而且作为真核微生物的许 多真菌也 同样具有具有促生功 能。但研究者仍 用 ＰＰ Ｇ Ｒ来泛指包括细菌、放线菌和真菌在 内的植物 根际促生微生物。根际促生微生物能够在根际土壤 中快 速增殖 ，并能 抑制 有 害微生 物 和位 于根部 表 面 的 土壤 中的致 病菌 ，一 些根 际促 生微 生 物还有 刺 激 植物生长的作用ｌＪ １。但是 ，总体而言 ， ４ 促生真菌的 研 究 相对较 少 Ｌ 。 １ 引 本文的研究是从重庆烟区健康土壤 中， 从健康 烟草根际分离 、 筛选和纯化 出能抑制青枯雷尔氏菌 的 真菌 ，并对 菌株 进行 分类 鉴定 。
菌 （ ａ ｔｎａＳｌ ａｅｒｍ）。一 旦发 病 即可造 成 Ｒ ｌｏｉ Ｏａ ｃａｕ ｓ ｎ 全株死亡 ， 对烟草的产量和质量影响极大 ，是烟草
上 一大 毁灭 性病 害 。 Ｊ
截至 目前 ， 仍然没有针对青枯病的特效方法【。 ３ Ｊ 目前主要采用的防治方法包括农业防治 、 化学防治 和生物防治等。农业防治如轮作 、培育和推广抗病 品种等 ，但 是烟株 的抗 性有 一定 的局 限性 ，品种 的 抗性强弱受多方面因素制约 ，随着种植年限延长 ， 抗性将逐年丧失 ；化学 防治是利用药剂抑制青枯 病 ，虽然 能起 到一 定 的作用 ，但是 长期 大量 施用 化 学 药 剂 容 易使 细 菌 产 生 抗 药 性 ，引 起 土 壤 质 地 变 化 ，造成 环境 污染 和 烟草 的药 剂残 留 ，严重 影 响人 体健康【。生物 防治选择性强 ，无污染 ，不易产生 ４ Ｊ 抗性 ， 对人体无害，是一种具有广阔前景的绿色防 治方法 ，因此 ， 近年来青枯病 的生物防治越来越 引 起 国内外 的重视 ｐ Ｊ 曲。 目前 ， 运用于青枯病生物防治的因子主要集 中 于青枯假单孢杆菌 、链霉菌 、 假单胞杆菌、菌根真 菌和芽孢杆菌等 。其 中，寻找既可 以不妨碍植 物生长，又能防治青枯病等植物病害的植物根际促 生 细菌 （ Ｇ Ｒ）已经 成为 生 防热点 之一 【 Ｐ Ｐ １ ＧＰ 。Ｐ Ｒ
ｐＨ７ ０—７． ． ２。
Ｐ Ａ培养基 ：马铃薯 ２０ ，葡萄糖 ２ ．ｇ Ｄ ０ ．ｇ ０ ０ ， ０ 琼脂 １．ｇ ５０ ，蒸 馏水 ｌ ０ ．ｍＬ， 自然 ｐ ００ ０ Ｈ。
生态环境学报 ２ １ ，０ １）１ １—４ ３ ０ ２ （０： ４ ８１２ １
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中图分类号 ：￥ ３ ຫໍສະໝຸດ ４ ５７ ２ 文献标志码 ：Ａ 文章编 号 ：１ ７—９ ６（ ０ ）１ －４ ８０ ６ ４５ ０ ２ １ １ ０１ １—６
烟草青枯病是热带 、亚热带地区烟草的重要病 害 ，１８ ８０年该病首先在美 国的北卡罗来纳州被发 现 ，此后 ，在许多产烟国家逐渐演变为烟草上的重 要病害 ，如 日本 、澳大利亚 、韩国等。在中国，长 江流域及其以南烟区该病普遍发生 ， 中发病 面积 其 较大、为害较重的有广西 、广东 、福建 、湖南 、浙 江等省（ 自治 区） 及安徽省的皖南烟 区、四川省 的宜 宾和泸州烟 区等【。烟草青枯病病原为青枯雷尔 氏 １ 】
１ 材 料与方法
１１ 供试 病原 菌 ． 本 试 验 采 用 青 枯 雷 尔 氏 菌 （Ｒ ｌｏ ｉ ａｓ ｎａ ｔ
ｓｌ ａｅｒｍ） ｏ ｎ ｃａｕ 作为指示病原菌进行拮抗实验 ，该 ａ 菌种 由江苏省固体有机废 弃物资源化利用 高技术 重点实验室提供。 １２ 试验 所 用培 养基 ． Ｔ Ｃ培养基 ：蛋 白胨 １． ｇ Ｔ ０ ，葡萄糖 １． ｇ ０ ０ ， ０ 牛肉膏 ３ ，酵母膏 １ ，Ｔ Ｃ２ ， 氯化三苯基 ．ｇ ０ ．ｇ Ｔ （，５ ５ ３一 四氮唑）． ，琼脂 １． ｇ Ｏ ５ｇ ０ ５ ，蒸馏水 １ ０ ． ｍ ， ０ ０ Ｌ ０ ０