酶联免疫分析法

antigenicity）,指能与相应抗体或致敏淋巴细胞发生 特异性结合，引起免疫反应的性能。 • 具备上述两种特性的物质为完全抗原，仅具有免疫反 应性的物质被称为半抗原（hapten）。
第一节 酶联免疫分析概述
• 抗体是能与抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。 • 所有的抗体都是免疫球蛋白,但并非所有的免疫球蛋白
酶联免疫分析常用酶
酶
来源
辣根过氧化物酶
辣根
酸性磷酸酶
动植物
碱性磷酸酶
牛肠
β-D-半乳糖苷酶 葡萄糖氧化酶
大肠杆菌 曲霉菌
脲酶 青霉素酶 过氧化氢酶
Jack豆
— 肝
葡萄糖淀粉酶
根霉菌
碳酸苷酶
牛红细胞
乙酰胆碱酶 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶
溶菌酶
— 肠系膜明串细菌
鸡卵白
苹果酸脱氢酶
猪心线粒体
无机焦磷酸酶
大肠杆菌
都是抗体。 • 例如无免疫活性的免疫球蛋白（如骨髓瘤蛋白）就不
是抗体，尽管其结构与抗体相似。 • 抗体主要存在于血清内，但在其他体液及外分泌液中
也有存在。 • 抗原抗体分子之间存在着结构互补性和亲和性，使得
抗原与相应抗体之间极易发生结合反应，这种反应具 有高特异性（即专一性）和可逆性。
第一节 酶联免疫分析概述
• 抗原、抗体发生如下免疫反应: • Ag+Ab Ag-Ab • 该免疫反应遵循可逆生物大分子相互作用的热动力学
基本原理,其反应式为
[Ab-Ag] k1 K [Ab][Ag]k2
• 式中：[Ab]为游离的抗体结合位点的浓度；[Ag]为游 离的抗原结合位点的浓度；[Ab-Ag]为抗原-抗体复
合物的浓度；k1为正反应速率常数；k2为负反应速率
常数；K为反应平衡常数（亲和常数）。
第一节 酶联免疫分析概述
• 这种抗原-抗体反应既可发生于体内（in vivo）,也可 发生于体外（in vitro）。
• 抗体主要存在于血清中，在抗原、抗体的检测中多采 用血清做试验，所以体外抗原-抗体反应也称为血清 学反应（serologic reaction）。
• RZ表示酶蛋白中活性部分ຫໍສະໝຸດ Baidu非活性部分最大吸光度的 比值。
• 酶的比活力指在特定条件下,每1mg酶或每1ml酶液 所具有的酶活性单位数。
（3）酶联免疫分析中的常用酶 下表列出了酶联免疫分 析中的常用酶。其中EC编号是根据国际酶学委员会的 规定采用四码编号法确定的每个酶的系统编号。
第一节 酶联免疫分析概述
第一节 酶联免疫分析概述
⑥待测溶液中应该无底物、反应抑制剂和其他与酶发生 反应的干扰物质；
⑦酶的来源、纯化和供应较方便,价格较低廉； ⑧均相酶免疫测定法中使用的酶，还要求当抗体与半抗
原-酶结合物结合后，酶活性表现出抑制或激活。
第一节 酶联免疫分析概述
（2）酶的评价指标 通常用RZ和酶的比活力评价标记 酶的质量。
第七章 酶联免疫分析法
第一节 酶联免疫分析概述 第二节 光度酶联免疫分析 第三节 发光酶联免疫分析
第一节 酶联免疫分析概述
一、免疫分析 1、免疫分析发展史 • 免疫分析（Immunoassay,IA）是利用待测物质（抗
原或抗体）与其相对应物质（抗体或抗原）之间专一 特异性反应而建立起来的一种高选择性分析方法。 • 免疫分析主要基于用抗体（或抗原）作为选择性化学 试剂以分析测定抗原（或抗体）及半抗原。 • 宋代 人工痘苗预防烈性传染病天花 • 1971年 第一届国际免疫学会议 将免疫学与微生物学 分开发展成一门独立的学科。
第一节 酶联免疫分析概述
2、抗原、抗体与免疫反应 • 抗原是能够引起免疫反应的分子。 • 免疫原性（immunogenicity）指诱导刺激免疫系统
产生抗体或致敏淋巴细胞的能力。 • 具有免疫原性的物质称为免疫原（immunogen）。 • 免 疫 反 应 原 性 （ immunoreactivity ） 或 抗 原 性 （
第一节 酶联免疫分析概述
• “免疫（immunity）”一词源于 “immunitas”,
原意是免除税赋和差役。 • 研究早期免疫学多集中在抗体抗感染能力研究。 • 20世纪中期以后，人们逐渐开始对各种抗原、微生物
的作用进行研究，发展出基础免疫学、临床免疫学、 免疫学检测、医学免疫学等多个分支。 • 现代免疫学将“免疫”定义为:机体对“自己”和“异 己”识别、应答过程中所产生的生物学效应的总和， 正常情况下是维持内环境稳定的一种生理性功能。
荧光素酶
发光生物
丙酮酸激酶
哺乳动物组织
EC编号 1.11.1.7 3.1.3.2 3.1.3.1 3.2.1.23 1.1.3.4 3.5.1.5 3.5.2.6 1.11.1.6 3.2.1.3 4.2.1.1 3.1.1.7 1.1.1.49 3.2.1.17 1.1.1.49 3.6.1.1 1.3.12.7 2.7.1.40
2、酶标记免疫分析法中使用的酶 （1）酶联免疫分析中使用的酶应符合下列条件: ①纯度高、催化反应的转化速率高、专一性强； ②具有足够的偶联用标记基团,与抗原、抗体蛋白分子偶
联后仍保持较高的催化活性； ③使用稳定性和保存稳定性好； ④测定酶活性的方法简便、灵敏、快速； ⑤待测体液中不存在与标记酶相同的酶；
第七章 酶联免疫分析法
• 基本要求:
• 了解免疫分析发展史,掌握抗原、抗体和免疫反应的原 理，了解免疫分析法的分类，熟悉酶标记免疫分析法 中使用的酶，熟悉ELISA的原理，掌握ELISA的固相 载体、包被与封闭、稀释液、洗涤液、酶反应终止液 及ELISA法常用酶的底物系统，掌握ELISA的酶联方 法 和 试 验 方 法 ， 熟 悉 ELISA 反 应 条 件 的 选 择 ， 掌 握 ELISA的定量计算，了解ELISA的灵敏度提高途径， 熟悉ELISA放大系统。了解化学发光分析的原理，熟 悉化学发光剂的种类，熟悉化学发光酶联免疫分析常 用的标记酶和发光增强剂，熟悉生物发光酶联免疫分 析常用的生物发光反应体系。
• 基于抗原-抗体反应的检测技术主要应用于以下几个 方面:①用已知抗原检测未知抗体；
②用已知抗体检测未知抗原； ③定性或定量检测体内各种大分子物质； ④用已知抗体检测某些药物、激素等各种半抗原物质。
第一节 酶联免疫分析概述
二、酶标记免疫分析法及常用标记酶 1、免疫分析法分类
第一节 酶联免疫分析概述