血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验常见的问题及对策

“醋酸纤维素薄膜电泳”是医学研究及临床检验的常规技术，也是生物类与医学类专业学生必须掌握的一项技术。我校在生化及生化检验教学中开设血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验，由于本实验主要由手工操作，并且影响因素较多，实验时间也长，往往花费了很长时间，但最终结果却并不理想，这在一定程度上挫伤了学生学习的积极性。笔者结合多年的实践教学经验，对学生实验中常见的问题进行了分析、归纳，并提出了相应的解决办法，从而大大提高了实验课的教学效果，现报告如下。

1常见问题

1.1血清紧缺

本实验由于是盖玻片蘸取点样，血清用量相对较多，尤其近年来随着学校的发展，招生规模不断扩大，学生人数不断增多，以致实验成本较高，但教学经费投入十分有限，故实验用血清较紧缺。

1.2点样技术不熟练

学生对点样技术掌握不好，结果或因点样量太大而使组分谱峰重叠[1]；或因蘸取血清量少、点样时间短，血清没有渗入薄膜；或因蘸取血清量过少而出现电泳图谱染色浅，导致各组分显示不清，甚至只能观察到白蛋白区带，其余区带显示不清；或因蘸取血清不均匀导致区带不整齐，或者有拖尾现象。

1.3实验条件选择不当

由于不同电泳仪、不同薄膜条数所需电压、电流不同，时间也不固定，要灵活掌握（一般用电压10~15V/cm膜长，或90～160Ⅴ/cm膜长，若用电流则按照0.4~0.6mA/cm膜宽进行换算。夏季通电40～50分钟，冬季通电60分钟左右[2-4]），故学生在实验中可能因选择的电压低、电流小、时间短而出现图谱距点样线近、区带集中，各组分分离不佳（常见α2与β区带），尤其是在点样量过多时，只能观察到四条区带现象；也可能因为选择的电压高、电流大、时间长而使蛋白迁移速度过快，常出现白蛋白迁移至靠近薄膜一端而被盐桥吸附的现象，且图谱位置也不居薄膜中段。

1.4薄膜的透明过程掌握不好

由于本实验费时较长，学生实验一般只进行到染色之后，观察到结果即可。但部分学生的结果较理想时，他们往往要求保存图谱，这就需要透明处理。教科书及文献基本都是选择冰乙酸25ml、无水乙醇75ml混匀而成的透明液[1，5]，这种透明液透明效果虽好，保持时间长，但会使膜变薄、软化，从而使得薄膜容易皱褶、碎裂，不易取出，必须贴附于载玻片上才能取出并干燥，手工操作难度较大、费时，学生获得的透明薄膜往往不平展，欠完整。

2解决措施

2.1制备兔血清用于实验

家兔是基础研究和基础学科常用的实验动物，我校在药理、生理、外科等学科实验教学中常用家兔做动物实验。因此，在保证和提高生物化学实验教学质量的前提下，为适应招生规模扩大与实验室建设资金紧张的现状，从降低实验成本、减少对环境的污染角度出发，我室近年来抽取兔血制备血清以代替人血清。其方法取材方便、简单，实验结果稳定，重复性好。和人血清一样，兔血清蛋白也可以分离出五条区带，从正极到负极依次为白蛋白、α1球蛋白、α2球蛋白、β球蛋白和γ球蛋白（见图1A）。

2.2指导学生掌握点样技术

盖玻片截面有粗糙和光滑两面，为使图谱尽量整齐、平直，要选择光滑的截面。小心用镊子夹住一个角，使盖玻片截面宽度稍小于薄膜宽度，以保证血清不会点到薄膜边缘。采用普通滴管取两滴血清滴在普通平板玻璃上，用盖玻片光滑的一个截面均匀蘸取血清（一定注意均匀蘸取，不均就弃掉重新蘸取），再将其平直印于薄膜点样线上。注意是一次蘸取、一次点样，要做到直、准、匀，一定要停留2~3秒钟，待血清渗入膜内。

2.3选择最佳电泳条件

考虑到实验课课时紧、学生点样技术不熟练等情况，故电泳时间不宜过长。在指导学生掌握点样技术和点样量的基础上，根据学生实验的实际情况(一般20人的实验班，两人一条薄膜，则双槽中每个槽有十条左右薄膜），对影响分离效果的电压和时间两个因素、3个水平通过随机组合在9种条件下进行了

血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验

常见的问题及对策

靳彩虹，柴连明，武洋

（平凉医学高等专科学校，甘肃平凉744000）

摘要：通过分析、总结学生在血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验中常出现的问题，提出相应的解决措施，以进一步提高

实验课的教学效果。

关键词：血清蛋白质；醋酸纤维素；薄膜电泳

中图分类号：G424.31文献标识码：B文章编号：1671-1246（2013）02-0107-02

107

--

对照研究，即电压分别为90V 、120V 和150V ，时间分别为40min 、50min 和60min 。最终选择的电泳最佳实验条件为电压120V 或150V ，时间50min ，夏季可以是40min 。这样，样品就可得到最佳分离，即图谱位置基本在薄膜中段，各组分分离清晰，结果的稳定性和重复性好（见图1A ）。

2.4应用液体石蜡透明薄膜

由于电泳结果无需长期保存或扫描做进一步研究，因此我们在学生实验中推广应用液体石蜡做电泳的透明液，其薄膜透明度虽然不及冰乙酸和无水乙醇混合液，但区带仍很清晰，而且薄膜硬度保持好，不会变薄、变软，可以直接取出、干燥并保存（见图1B ），操作方法简单、方便、快捷。由于液体石蜡透明液不会软化薄膜，因此在干燥处理的过程中要始终保持薄膜平展，透明之后保存薄膜时也不能折，因其脆性大，容易碎裂。另外，必须使其完全干燥后再透明，这样才能使透明均匀，薄膜保持时间也较长，否则，放置一段时间后，薄膜容易出现白斑。

参考文献：

[1]王友基，

王钦利.血清蛋白电泳测定的标准化问题初探[J].江西医学检验，2002，20（6）：399-400.

[2]韩昌洪.生物化学[M].北京:人民卫生出版社，2005.[3]薛莉珠.生物化学实验[M].北京:中国医药科技出版社，1998.

[4]北京大学生物系生物化学教研室.生物化学实验指导[M].北京：高等教育出版社，1986.

[5]蔡杰，

刘芸.醋酸纤维素薄膜电泳法分离测定鸡血清蛋白质[J].贵州大学学报，2006（1）:94-95.蒉

图1兔血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳图谱

A.150V 、50min 电泳图谱

B.

液体石蜡透明薄膜

蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉

《教育部关于加强高职高专人才培养工作的意见》中明确指出，高职高专教育人才培养模式的基本特征是：以培养毕业生技术应用能力为主线。学生应在具有必备的基础理论知识和专业知识的基础上，重点培养从事本专业领域实际工作的基本能力和基本素质，要具有良好的职业道德和敬业精神。实践教学的主要目的是培养学生的技术应用能力，并在教学计划中占有较大比重。要改革实验教学内容，不断更新教学仪器设备，提高仪器设备的现代科技含量[1]。病理学是联系基础医学和临床医学的桥梁学科，而病理学实验课是学生对理论课所讲疾病的具体实践，是医学生学好病理学的重要环节，是病理学建立理论与实际、宏观与微观、基础与临床、抽象与形象桥梁中不可或缺的重要途径。通过实验不仅能够使学生深刻掌握疾病的本质，真正体会和全面理解疾病的重要过程，更能培养学生的思考判断能力、动手创新能力以及严谨求实的工作作风。1我校实验教学中存在的问题

长期以来，我校护理专业病理学实验教学中存在许多不足，主要表现为以下几个方面。

1.1传统的病理学实验教学设备陈旧，

资源匮乏我校因过于注重临床课程的实践环境及实验设备的改善，而忽略了医学基础课在这些方面的改进，从而造成病理学实践教学效率低下，学生面对陈旧老化的实验设备时，往往无法达到满意的学习效果。1.2教学方法及模式单一

传统的实验教学属于单纯的“填鸭式”教学，教师只是引导学生直接观察复杂的病变标本及切片，学生缺乏学习的主动性及自觉性，课堂气氛沉闷，缺乏生气，因而教学效果差。1.3高职护理专业病理学实验教学大纲不符合高职院校的实际

病理学实践课时偏少，其在整个课时里所占的比例不到20%，

实验课的内容与今后临床工作的联系不紧密，不利于培养学生动手操作、理论联系实践的能力。1.4病理学实践教学资源库建设缺乏

高职护理专业病理学实验教学改革体会

庞乐，潘霞，杨青青

（汉中职业技术学院，陕西汉中723000）

摘要：以高职人才培养工作的实施意见为依据，笔者对病理学实验教学方法进行探索，并提出相应的改进措施，从而为今后临床课程的开展奠定坚实的理论基础。关键词：高职病理学；实验教学；教学改革中图分类号：G420

文献标识码：A

文章编号：1671-1246（2013）02-0108-02

108--