·论著·
应用血管脱细胞基质膜片构建
组织工程血管的初步研究
付炜
薛继鑫
何晓敏
殷猛
郑景浩
王伟
徐志伟
DOI ：10.3877/cma．j．issn．1674-0785．2012．22．021
基金项目：国家自然科学基金（31200735）；上海市自然科学基金（12ZR1446500）；上海交通大学医工交叉项目（YG2012MS36）；上海市浦东新区科技发展基金（PKJ2012-Y48）作者单位：200127
上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心心
胸外科（付炜、何晓敏、殷猛、郑景浩、王伟、徐志伟），儿科转化医学研究所（付炜、郑景浩、王伟）；温州医学院附属第二医院手整形外科（薛继鑫）
通讯作者：付炜，Email ：fuweizhulu@163．com ；徐志伟，Email ：zwxumd @gmail．com
【摘要】目的探讨应用血管脱细胞基质膜片构建组织工程血管的可行性。方法
获取成年猪主动
脉弓及升主动脉，剔除内膜和外膜后，切成20μm 厚、1.5cm 长、1cm 宽的薄片，经脱细胞处理后，接种人脐动脉平滑肌细胞，利用“三明治”法构建成管道状的细胞材料复合物，体外培养1周后植入裸鼠背部皮下，并于8周后取出进行组织形态学及生物力学检测，
评价形成血管效果。结果动脉血管切成膜片后很容易将
细胞脱除干净，
细胞外基质成分如弹性蛋白和Ⅰ型胶原得到很好的保存。经“三明治”法构建的组织工程血管植入裸鼠皮下8周后可以形成良好的管道样结构，接种的平滑肌细胞深入到管道内部，同时具有良好的生物力学性能。结论
利用血管脱细胞膜片可以较好地解决脱细胞不完全和细胞接种不到血管壁内部的问
题，为构建组织工程血管提供了一种新的方法。
【关键词】血管；
组织工程；
脱细胞膜片
Engineering blood vessel with acellular blood vessel sheets and smooth muscle cells
FU Wei ，XUE Ji-xin ，HE
Xiao-min ，YIN Meng ，ZHENG Jing-hao ，WANG Wei ，XU Zhi-wei．Department of Pediatric Thoracic and Cardiovascular Surgery ，Institute of Pediatric Translational Medicine ，Shanghai Children's Medical Center ，Shanghai Jiaotong University School of Medicine ，Shanghai 200127，China
Corresponding author ：FU Wei ，Email ：fuweizhulu@163．com ；XU Zhi-wei ，Email ：zwxumd@gmail．com
【Abstract 】Objective
To explore the feasibility of engineering blood vessel with acellular blood vessel
sheets and smooth muscle cells．Methods
Adult pig aortic arch and ascending aorta ，excluding the intima and
adventitia ，was cut into 20microns thick ，1.5cm long ，1cm wide．The sheets were decellularized with 1%SDS and lyophilized．The acellular sheets and smooth muscle cells that isolated from healthy newborn umbilical cord were then stacked layer-by-layer around with the catheter ，in a “sandwich ”manner ，and cultured in centrifuge tube．After 1weeks of cultivation ，
the constructs were then implanted subcutaneously in nude mouse．Results DAPI and
histological analysis showed that cells were completely removed from blood vessel sheets after decellularization．Immunohistochemical staining of elastin and collagen Ⅰshowed that extracellular matrix were well preserved．Blood vessel tissue formed after 8weeks of mature in vivo and smooth muscle cells could be seen within the vessel wall．Those tissue engineering blood vessel showed good biomechanical properties．Conclusions
Our findings show that
acellular blood vessel sheets could be a promising method to prepare scaffold for blood vessel tissue engineering．
【Key words 】Blood vessels ；
Tissue engineering ；
Acellular sheets
血管移植是先天性心脏病或其他动脉疾病的一种
有效治疗方法［1］
，然而却受缺乏合适的自体血管供搭桥或其他血管重建手术所局限
［2］
。随着组织工程概念
的提出及1986年第1根组织工程血管的成功构建
［3］
，
体内外构建具有生长潜能生物相容性好的组织工程化血管用于血管移植成为再生医学领域的研究热点之
一。构建组织工程化血管的关键在于理想的支架材料为细胞黏附浸润提供类似天然血管的三维结构，并满
足天然血管的生物力学性质和免疫原性［4］
。目前血管支架材料主要有生物可降解高分子聚合物支架和天然
脱细胞血管基质两大类，
其中天然脱细胞血管基质由于具有天然的组织成分和结构，良好的生物相容性，能
够提供细胞所需的信号，可促进细胞黏附及保留分化功能的优势，因而最具临床应用前景
［5］
。然而，利用脱
细胞材料构建组织工程化血管依然面临两大挑战，
一·0907·中华临床医师杂志（电子版）2012年11月第6卷第22期Chin J Clinicians （Electronic Edition ），November 15，2012，Vol．6，No．22
细胞的成分、结构和功能 一、选择题 1.细胞核的主要功能是( ) A.进行能量转换 B.合成蛋白质 C.贮存和复制遗传物质 D.贮存能源物质 2.细胞质基质是细胞结构的重要组成部分，下列生物化学反应在细胞质基质中进行的是( ) A.葡萄糖的无氧分解 B.丙酮酸的氧化分解 C.RNA的合成 D.各种消化酶的合成 3.叶绿体和线粒体都是重要细胞器，下列叙述中错误的是( ) A.两者都具有能量转换的功能 B.两者都具有双层膜结构 C.两者的基质成分与功能不同 D.两者基粒所含酶的种类相同 4.(’01上海高考)右图是某动物组织的一个细胞，其细胞质内含有的糖类和核酸主要是 ( ) A.糖原和RNA B.糖原和DNA C.淀粉和RNA D.淀粉和DNA 6.澳洲大陆原来没有仙人掌类植物，当地人曾从美洲引种作篱笆，结果，仙人掌大量繁 殖，侵占农田和耕地，给人们生活带来危害，此事例说明生物( ) A.有遗传和变异性的特性 B.能生殖和发育 C.能改良环境 D.能适应一定环境和影响环境 7.丙氨酸、腺嘌呤、脱氧核苷酸、酵母丙氨酸转运核糖核酸、抗体所共有的化学元素是( ) A.C、H、0 B.C、H、0、N C.C、H、0、N、P D.C、H、O、P、N、S 8.研究表明，生物体的内环境必须保持稳定状态。人的红细胞必须生活在含0.9%的溶液中，医生常给脱水 病人注射0.9%的生理盐水，因为红细胞在蒸馏水中会吸水过多而胀破；在浓盐水中红细胞会失水过多而皱缩，因而失去输送氧气的功能。这说明( ) A.水分容易出入细胞 B.无机盐离子容易出入细胞 C.红细胞具有这些特征 D.无机盐对维持细胞的形态和功能有重要作用 9.生活细胞中含量最多的两种物质所共有的元素是( ) A.C、H、O B.C、H、0、N C.H、0 D.N、P 10.炎热的夏天，耕牛高强度劳作后出现抽搐现象，医生给耕牛救治药中还必须加入的是( ) A.K+ B.Na+ C.Cl- D.Ca2+ 11.(’01上海高考)叶绿体和线粒体都是重要细胞器，下列叙述中错误的是( ) A.两者都具有能量转换的功能 B.两者都具有双层膜结构 C.两者的基质成分与功能不同 D.两者基粒所含酶的种类相同 12.下列细胞结构中不具双层膜的一组是( ) A.细胞核和线粒体 B.叶绿体和细胞核 C.内质网和高尔基体 D.线粒体和叶绿体 13.蛋白质能够通过的细胞结构或部位是( ) ①线粒体膜②叶绿体膜③细胞膜④液泡膜⑤细胞壁⑥核膜⑦核孔 A.①③ B.②④ C.⑤⑦ D.⑥⑤ 14.在成人的心肌细胞中比腹肌细胞数量明显多的细胞器是( ) A.核糖体 B.线粒体 C.内质网 D.高尔基体 15.研究表明，小肠上皮细胞内有大量的线粒体，可能与此有关的生理过程是( ) A.渗透作用 B.主动转运 C.被动转运 D.吸收作用 17.玉米成熟区细胞里具有的一组细胞器是( ) A.线粒体和中心体 B.叶绿体和线粒体 C.液泡和核糖体 D.液泡和叶绿体 18.牛奶富有营养，含有丰富的蛋白质。在奶牛的乳腺细胞中与乳汁的合成及分泌密切相关的细胞器是 ( ) A.核糖体线粒体内质网高尔基体 B.线粒体内质网高尔基体中心体 C.核糖体白色体高尔基体内质网 D.线粒体叶绿体内质网高尔基体 19.人体内某些白细胞能够做变形运动，穿出毛细血管壁吞噬侵入体内的病菌，这一现象说明( ) A.构成细胞膜的蛋白质和磷脂分子具有运动性 B.构成细胞膜的基本骨架是磷脂双分子层 C.细胞膜的结构特点具有一定的流动性 D.细胞膜具有选择透过性 三种氨基酸构成的三肽最多有( ) A.6种 B.5种 C 27种 D.3种 21.谷氨酸的R基为-C3H5O2，在一个谷氨酸分子中含有碳和氧的原子数分别是( ) A.4、4 B.5、4 C.4、5 D.5、5
血管内皮细胞体外培养 1．概述血管内皮细胞（endothelial cell, EC）是衬于心，血管和淋巴管腔内表面的一种单层扁平上皮细胞。EC极薄，厚度约为0.1～1μm，长约25～50μm，宽约10～15μm，在体内呈梭形，相邻细胞之间借少量粘合质彼此嵌合，细胞长轴与血流方向平行。其超微结构特点是在胞质中含有的特殊颗粒，称Weibel-palade小体（内含有与凝血有关的第Ⅷ因子相关抗原）；细胞间有紧密连接的缝隙相连。EC除了能保持血管壁内表面的光滑和通透性外，还有多种生物学功能：维持正常的血液流动性，分泌多种生物活性物质，在调节细胞生长，改变脂质代谢，维持血管壁的完整性，调节血管张力和选择性通透性以及免疫调节方面起到重要作用。EC功能的异常，与血栓形成、动脉粥样硬化、高血压等心血管疾病及肿瘤扩散，免疫疾病都有密切关系。体外培养中的EC形态呈"鹅卵石样"镶嵌排列，细胞长满后呈接触抑制现象。 2．培养方法EC生长在血管内表面，由于其所处的独特位置不利于观察和研究，所以体外培养EC显得特别重要，目前已有多种种属（人、牛、猪、兔、大鼠等），多种组织（脐带动脉、静脉、肺动脉、主动脉、脑毛细血管、心脏毛细血管等）的EC能在体外培养成功。人们将培养器皿预先用明胶或纤连蛋白或胶原等粘附蛋白包被后，形成人工的EC下基质层，可促进EC的粘附与生长。 2.1 方法原理用酶消化法，酶消化＋机械刮脱法或单纯刮脱法将EC分离下来，在适宜的条件下可贴壁并长成致密单层。 2.2 介绍几种主要EC的分离 2.2.1 酶消化法大血管内皮细胞的分离 2.2.1.1 人脐带动、静脉（或其它大血管） a．在37℃水浴中，预热培养用的所有无菌溶液，备用。 b．在无菌条件下，取健康产妇分娩后新鲜的婴儿脐带（25cm左右，不超过6h），选择无夹痕、无扭曲、无凝血阻塞的部分，放入含有100 U/ml的青霉素和100 μg/ml链霉素的D-Hanks液中，在脐静脉或脐动脉的两端插入磨平的注射器针头用丝线扎紧，用注射器从一端注入D-Hanks液冲洗血管，直到流出的液体无血迹。 c．注入0.1%胶原酶（1型）溶液，待血管内残留的D-Hanks液流尽后，用注射器封注另一端针头，继续注入胶原酶溶液，致血管充盈，放入37℃无菌的D-Hanks液中，消化15min 后取出。 d．收集血管内酶溶液，并且注入含20%小牛血清的M199培养液（pH 7.2）冲洗血管收集合并于同一容器内，以1000r/min离心7～10min。 e．去上清液，加入20%小牛血清的M199培养液重新悬浮细胞备用。 f．其它大血管如牛主动脉，猪主动脉等，可在无菌下分离，然后用线结扎血管各分支，再依上述步骤分离EC。 2.2.2 酶消化法小血管内皮细胞的分离 2.2.2.1 兔主动脉，大鼠主动脉因血管较小，分支极细，不能采用上述方法消化。 a．将动物主动脉取出后放D-Hanks中，将血管外的脂肪细组织分离干净，用丝线结扎血管一端，然后用探针顶住该端，将整条血管翻转，使内膜翻在外面。将另一端折入腔内0.5cm，并用丝线结扎紧，以防外膜外露及避免酶液进入外膜腔内。 b．用D-Hanks液清洗干净外翻的内膜面，然后血管浸泡在含0.1%胶原酶溶液的小瓶内，盖上瓶盖在37℃水浴中轻轻摇荡消化，使EC离散下来，消化15～20min后，见酶液稍有混
血管形成测定 血管形成是从已经存有的血管床中通过内皮细胞增殖和迁移,以芽生或 非芽生的方式生成新生血管系统的过程，与正常的生理过程(如伤口愈合、胚胎发育等)和很多病理过程(如肿瘤的生长和转移、类风湿性关 节炎、脑和心血管等疾病)密切相关1,2。血管形成中的主要细胞是内 皮细胞，它存有于所有的血管上，通过内皮细胞的迁移、增殖、分化 和结构重建构成了新的毛细血管网。除内皮细胞在血管发生过程起重 要作用外，支持细胞(如肿瘤细胞、外周细胞、平滑肌细胞、成纤维细胞)、细胞外基质、血液细胞和体液成分也都与血管的发生相关。所以，血管发生的测定非常复杂。当今尚未有任何一种体外的实验方法能精 确地模拟这个复杂的过程，但结合体外、体内血管形成的测定方法， 能够有效地了解血管发生的作用机理。 本文介绍了当前体内外用来研究血管形成的一些基本方法和最新方法，并对这些方法的优缺点实行了深入探讨。 体外测定血管形成的方法主要侧重于外源性抑制剂或刺激因子对内皮 细胞的迁移、增殖和成管的作用。 对内皮细胞的测定，关键问题在于内皮细胞具有物种和器官的差异性。内皮细胞表型的差异已在大血管衍生的内皮细胞(如人脐静脉内皮细胞)和微血管器官的内皮细胞(如人类皮肤毛细血管内皮细胞)中被证实3,4。在培养中，内皮细胞的活化状态、染色体表型、细胞表面抗原的表达 和它们的生长特性都会发生改变，将失去体内生长的一些特性3。另外，在体外，内皮细胞在静止环境、动态环境、结合不同的基质的情况下，它们的特征也不同，所以它并不能完全代表体内复杂的生理过程。即 使用内皮细胞作为模型来研究体内血管发生具有很大的局限性，但体 外测定方法具有快速、易定量、可重复性高等特点。 1.1内皮细胞增殖测定法
血管平滑肌细胞表型转换的机制 基础医学院07级临床一班陈依然90701114 摘要 由血管平滑肌异常增殖导致的血管重构是PCI术后再狭窄的重要原因之一。血管平滑肌细胞增殖能力与其表型转换密切相关。本文讨论了血管平滑肌细胞表型转换的特点、机制和相关信号传导途径。 关键词 血管平滑肌细胞表型转换信号传导途径 正文 自1977年冠心病介入治疗技术问世以来，其术后再狭窄（RS）一直是一个影响其远期疗效的重要问题。虽然RS的具体机制尚不明确，但目前已经公认血管平滑肌细胞（Vascular Smooth Muscle Cell, VSMC）异常增殖、迁移及大量合成细胞外基质是其主要原因。而VSMC增殖的首要条件就是表型转换。 VSMC的表型可分为分化程度较高的收缩型（分化型）和分化程度较低的分泌型（未分化型或去分化型），我将就其特点和两者之间相互转换的相关信号传导途径进行探讨。 1. 表型转换的特点 VSMC来自胚胎发育时期的中胚层，逐渐分化为不同的细胞群并获得具有成年特征的分化表型，即收缩型。但与骨骼肌、心肌细胞不同的是，VSMC在分化成熟后仍可在某些因素的刺激下去分化成为分化程度较低的分泌型。有报告称，这两种表型可能代表了共存于血管壁内一系列不同表现型的两个极端类型，且表
达不同的基因和蛋白。正常成人动脉血管的VSMC以收缩型为主，其主要功能是维持血管的弹性和收缩血管。收缩型VSMC增殖、迁移能力差或无，胞体呈梭形或带状，含大量肌丝和结构蛋白含，合成细胞器如粗面内质网、高尔基复合体含量较少，合成基质的能力差或无，体积较小。分泌型VSMC主要存在于胚胎中期血管和病理血管中，其主要功能是增殖、迁移入内膜以及合成细胞外基质蛋白。形态上类似成纤维细胞，肌丝和结构蛋白含量较少，合成细胞器增多，合成和分泌基质蛋白的能力较强，体积较收缩型大。 根据VSMC两种表型表达蛋白的不同可以找到表型转换时相应的标志物。其中α平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin, α-SMA）在收缩型细胞中优势表达而在分泌型细胞中表达甚微，它是VSMC分化的早期特异性标志物，也是应用最多的收缩型标志蛋白。而骨桥蛋白（osteopontin, OPN）则作为应用较多的合成型标志物。有实验显示OPN mRNA在正常的动脉中并不存在，而在动脉粥样硬化中的表达程度则随粥样硬化程度的增加而增加。 下表列VSMC表型转换的主要标志物。
细胞外基质与心血管病 细胞外基质（Extracellular Matrix，ECM）是由成纤维细胞、间质细胞、上皮细胞等体内各种组织和细胞合成和分泌的一类大分子物质。主要分为胶元、非胶元糖蛋白、蛋白聚糖和弹性蛋白等四大类，主要分布和聚集在细胞表面和细胞间质，多成复杂网络结构，故称细胞外基质（间质）。它们是细胞和组织赖以生存、活动和调节的外环境：一方面为细胞和组织提供支持、联结、固定、保水、缓冲等物理性的保护作用，另一方面又是细胞与外环境进行物质交换、信息传递和汇集的中介。它可通过各种信号传递系统，调节细胞生长、增殖、迁移、分化、粘附、代谢、损伤修复、组织重构等各种生理功能。被称为是人体细胞和组织内稳态的主要调节者（The Central Regulator of Cell and Tissue Homeostasis）。 细胞外基质的成分十分复杂，除了各型胶元以外，还有各种粘连蛋白（FN）、层连蛋白（LN）、氨基聚糖（GAG）、蛋白聚糖（PG）、弹性蛋白（Elastin）、内动素（Cytotatin）、血栓结合素（Thrombospondin）、整合素（Integrin）、玻连蛋白（Vitronetin VN）、连结蛋白（Connexins）、钙粘素（Cadherins）、选择素（Selectin）、粘附素（细胞粘合素）、细胞粘合素（Cytotatin）等几十个类别。每一种类别又有几种至十几种亚型。细胞不同产生和分泌的基质成分亦不同；组织不同所含的细胞外基质的成分和比例亦不同；即使同一种细胞，同一种组织，在不同的生理、病理和反应条件下，细胞外基质的成分、结构和构型亦不同；结构和构型不同，细胞外基质的功能和作用亦不同；同一类型的细胞外基质，它还可分解成不同的降解片段，也有不同的生理功能。随着基因和蛋白质组生物学的研究进展，新的细胞外基质分子还在不断诞生，其类型、构型、构像还有更多发现，其功能亦在不断的扩展，构成了一个十分复杂的细胞外基质的网络家族和体系。 细胞外基质虽然来源、成分、分型和功能不同，各司其责，但在结构和功能上，它们又排列有序、疏密相间、相互联结、彼此协同，在细胞间质、组织间隙和器官内，形成各种复杂的相对固定的形式和分层网状结构，形成许多不同的功能结构区域，如在血管，可以形成内膜表面的粘附保护层、内膜下层、基底膜层、内弹力层、外弹力层、血管中层和外层系膜结缔组织等等。每一个结构区域都具有其复杂的成分、结构和各自的功能，形成多重通道、支架、隔栅、巢穴或屏障，保护和调节着血管的完整的功能。细胞外基质来源于器官和组织内的不同细胞。细胞不同，产生和分泌的基质亦不同，如在心脏，肌肉细胞可以产生胶元IV、
小鼠血管平滑肌细胞原代培养方法的改良 [ 08-10-30 13:48:00 ] 作者：吴建芳编辑：studa20 【摘要】目的建立一种简单方便但高效的血管平滑肌细胞原代培养方法。方法改良酶消化法。结果用该法培养细胞传代生长快，细胞纯度达98% 以上，足以满足各种细胞试验需求。结论与传统方法相比该法简单经济，试验成功率高，节省材料和时间，而且可获得更多纯度较高的细胞。吴建芳（1972～），女，汉族，青海籍，副教授，硕士 【关键词】小鼠动脉血管平滑肌细胞原代培养 Abstract Objective To create a simple and effective primary culture methods for mouse vascular smooth muscle cells (VSMC). Methods Reformed enzymatic digestion. Results VSMC was grown well and fast, the purity is more than 98% which can meet various cell tests. Conclusion Comparing with traditional methods , this approaches can save much time and more materials, also have better cell quantities and purity. Key words Mouse Aorta VSMC Primary cult 在心血管疾病的基础研究中，对血管平滑肌细胞生物特性的研究是极其重要的一部分，其对揭示血管病变机理至为关键。体外培养平滑肌细胞是常用试验模型，近年来随着细胞培养技术的发展，原代培养的成功率有所提高，但仍然存在许多问题，经验不足者往往要花费大量时间、精力去摸索，不但影响试验进程而且浪费材料，而有些组织材料是极为昂贵且很难获得的，所以为了提高平滑肌细胞原代培养的成功率，并在有限的材料下获得好的结果，我们大胆采用了酶消化法（常规采用组织块培养法），从取材方法及消化步骤等方面进行了改良，试验结果证实该法简单经济，成功率高，细胞生长快，纯度高，现介绍如下。 1 材料与试剂 1．1 组织来源：C57BL/6J小鼠(鼠龄8周以后)主动脉。 1．2 试剂：鼠抗SMC-α -actin ,Cy2 conjugated affinity purified anti-mouse IgG［H/L］，戊巴比妥钠注射液。 1．3 培养基：在DMEM 培养基中添加１５％胎牛血清、１％青霉素、链霉素、１％谷氨酰胺，过滤除菌备用（不要超过四4周）。 1．4 酶消化液：Collagenase TypeⅡ 7 mg 溶于5 ml DMEM 培养基中(无血清)，过滤除菌即用。
生物医学工程学杂志 J B i om ed Eng 2006;23(4)∶911～914 血管组织工程相关生长因子的控制释放研究进展3 邬丽丽 袁晓燕?综述 姚康德审校 (天津大学材料学院材料系,天津300072) 摘要 生长因子在细胞的黏附、增殖和组织的再生过程中发挥着重要的作用。将生长因子负载于高分子材料支架上,可以实现对生长因子的控制释放。其释放机制随负载方法的不同而存在着差异。本文总结了共混、凝胶、微球包埋以及化学键合法在血管组织工程中相关生长因子控制释放方面的研究进展,并指出了超细纤维包埋法的应用前景。 关键词 生长因子 血管组织工程 静电纺丝 Research Advances i n the Con trolled Relea se of Growth Factor Rela ted to Blood Vessel T issue Eng i neer i ng W u L il i Y uan X i aoyan Yao Kangde (S chool of M a teria l S cience and E ng ineering,T ianj in U n iversity,T ianj in 300072,Ch ina) Abstract Grow th facto rs p lay an i m po rtant ro le in cell adhesi on and p ro liferati on as w ell as in tissue regener2 ati on.By inco rpo rating grow th facto rs into po lym er scaffo lds,contro lled release of them can be perfo r m ed.T he release m echanis m is varied w ith the inco rpo rati on m ethods.In th is paper,the latest advances in the contro lled re2 lease of grow th facto rs by blending,hydrogel,m icro sphere em bedding and chem ical bonding are review ed.T he po tential app licati on of ultrafine fibric em bedding in grow th facto r delivery is described as w ell. Key words Grow th facto r B lood vessel tissue engineering E lectro sp inning 1 引 言 生长因子是细胞分泌的、具有诱导和刺激细胞增殖、维持细胞存活等生物效应的水溶性蛋白质,对细胞增殖、组织或器官的修复和再生都具有重要的促进作用,是组织工程的重要影响因素之一[1]。一般来讲,生长因子在水中及室温环境下很容易失去活性,因此直接使用生长因子会因为环境因素而失活,达不到预期的生物效应。将药物控释技术引入组织工程,即由适宜的基质材料负载各种生长因子,在准确的时间和部位按一定剂量向种子细胞持续释放,从而促进细胞的生长和分化,能有效地引导组织再生。 在血管组织化过程中,不同的生长因子发挥着不同的作用。血管内皮细胞生长因子(V ascu lar en2 3国家自然科学基金资助项目(50573055) △通讯作者。E2m ail:yuanxy@https://www.doczj.com/doc/d5336616.html, do thelial grow th facto r,V EGF)能促进内皮细胞(Endo thelial cell,EC)的分化、生长、迁移,提高其生存能力和渗透性,诱导血管生成并增加其通透性;血小板衍化生长因子(P latelet2derived grow th facto r, PD GF)能同时促进成纤维细胞(F ib rob last,FB)、平滑肌细胞(Sm oo th m u scle cell,S M C)和EC的分裂和生长。成纤维细胞生长因子(F ib rob last grow th facto r,FGF)不但能促进多种细胞的增殖和分化,还能调节细胞代谢,促进血管生成,从而提高血管的稳定性。生长因子的使用剂量必须适宜,如在体外做细胞培养时,V EGF的最佳使用剂量为1～1.2ng m l;用量低于标准值会使血管过脆,易损坏;高于标准值时会使血管破裂,甚至引起不规则血管的生成[2]。因此在生长因子的控释研究中,解决突释是关键的问题。另外,生长因子在与细胞作用的过程中,亦易因降解而失去活性,因此需要高分子载体的包埋。 生长因子负载于高分子材料支架上的方法有很
血管内皮细胞（endothelial cell, EC）体外培养 1．概述血管内皮细胞（endothelial cell, EC）是衬于心，血管和淋巴管腔内表面的一种单层扁平上皮细胞。EC极薄，厚度约为0.1～1μm，长约25～50μm，宽约10～15μm，在体内呈梭形，相邻细胞之间借少量粘合质彼此嵌合，细胞长轴与血流方向平行。其超微结构特点是在胞质中含有的特殊颗粒，称Weibel-palade小体（内含有与凝血有关的第Ⅷ因子相关抗原）；细胞间有紧密连接的缝隙相连。EC除了能保持血管壁内表面的光滑和通透性外，还有多种生物学功能：维持正常的血液流动性，分泌多种生物活性物质，在调节细胞生长，改变脂质代谢，维持血管壁的完整性，调节血管张力和选择性通透性以及免疫调节方面起到重要作用。EC功能的异常，与血栓形成、动脉粥样硬化、高血压等心血管疾病及肿瘤扩散，免疫疾病都有密切关系。体外培养中的EC形态呈“鹅卵石样”镶嵌排列，细胞长满后呈接触抑制现象。 2．培养方法EC生长在血管内表面，由于其所处的独特位置不利于观察和研究，所以体外培养EC显得特别重要，目前已有多种种属（人、牛、猪、兔、大鼠等），多种组织（脐带动脉、静脉、肺动脉、主动脉、脑毛细血管、心脏毛细血管等）的EC能在体外培养成功。人们将培养器皿预先用明胶或纤连蛋白或胶原等粘附蛋白包被后，形成人工的EC下基质层，可促进EC的粘附与生长。 2.1 方法原理用酶消化法，酶消化＋机械刮脱法或单纯刮脱法将EC分离下来，在适宜的条件下可贴壁并长成致密单层。 2.2 介绍几种主要EC的分离 2.2.1 酶消化法大血管内皮细胞的分离 2.2.1.1 人脐带动、静脉（或其它大血管） a．在37℃水浴中，预热培养用的所有无菌溶液，备用。 b．在无菌条件下，取健康产妇分娩后新鲜的婴儿脐带（25cm左右，不超过6h），选择无夹痕、无扭曲、无凝血阻塞的部分，放入含有100 U/ml的青霉素和100 μg/ml链霉素的D-Hanks液中，在脐静脉或脐动脉的两端插入磨平的注射器针头用丝线扎紧，用注射器从一端注入D-Hanks液冲洗血管，直到流出的液体无血迹。
软骨及软骨细胞 软骨（cartilage）由软骨组织及其周围的软骨膜构成。软骨组织由软骨细胞、纤维和基质构成。在胚胎发生时期，软骨作为临时性骨骼，成为身体的支架。随着胎儿发育，软骨逐渐被骨所代替。在成人体内仍保留一些软骨，具有支持和保护功能。 成人软骨，根据软骨组织内所含纤维的成分不同，可分为三种类型，即透明软骨、弹性软骨和纤维软骨。 （－）透明软骨 A．透明软骨的结构:透明软骨（hyaline cartilage）分布最广，如鼻、喉、气管和支气管的软骨、肋软骨及关节软骨等。其结构特点是：新鲜时为淡蓝色半透明，基质内的胶原原纤维交织排列，并与基质的折光率一致，HE染色标本上不易分辨。透明软骨质脆而弹性差、易折。 （1）软骨细胞（chonrocyte）：软骨细胞因在软骨组织中的存在部位不同，其形态亦异。近软骨表面是一些幼稚的细胞，体小呈扁椭圆形，细胞长袖与软骨表面平行，多为单个存在。越向深层，软骨细胞逐渐长大，变成圆形或椭圆形，在软骨的中央，软骨细胞成群分布，每群为2～8个细胞，它们都是由一个软骨细胞分裂而来，故称同源细胞群（isogenous group）。电镜下，软骨细胞表面有许多小突起，胞质内有较多的粗面内质网和发达的高尔基复合体，还有一些糖原和脂滴。软骨细胞具有合成和分泌基质与纤维的功能。软骨细胞埋藏在软骨间质内，它所存在的部位为一小腔，称为软骨陷窝（cartilage lacuna）。在HE染色标本上，陷窝周围的软骨基质呈强嗜碱性，染色很深，称软骨囊（cartilage lacuna）。同源细胞群中的每个软骨细胞分别围以软骨囊。 （2）基质：透明软骨基质为半固态。其主要化学成分是蛋白多糖，还有一定量的蛋白质（如连接蛋白、软骨粘连蛋白等），故称为软骨粘蛋白。也是由透明质酸分子为主干，结合着许多较短的蛋白多糖侧链，其轴心蛋白质上结合较多的硫酸软骨素侧链和短小的硫酸角质素侧链。这种形如瓶刷状的大分子复合物亦立相结合构成分子筛，并结合着大量的水分子（约占软骨基质的75％）。虽然软骨组织内没有血管，由于基质富含水分，易于物质渗透，使深层的软骨细胞也能获得营养物质。软骨基质的硫酸软骨素含量很高而使其呈嗜碱性并具有异染性。基质内的软骨粘连蛋白将软骨细胞和基质连接起来。 （3）纤维：透明软骨中的纤维成分是由Ⅱ型胶原蛋白构成的胶原原纤维，并且没有明显的64nm的周期性横纹，也不形成胶原纤维。胶原原纤维直径细小（l0～20nm）呈交织状分布。蛋白多糖分子的侧链以短突与胶原原纤维相接触，构成较大间隙的网架，以承受压力并结合着大量的水分子，使基质呈半透明固态。 B．软骨膜（perichondrium）：软骨组织外面包有一层致密结缔组织（关节软骨表面没有），称为软骨膜。在软骨发育时期，它可明显地分为内、外两层。外层致密，含胶原纤维多，细胞和血管均少，主要起保护作用；内层疏松，纤维较少，血管和细胞成分多，其中含有一种干细胞称骨原细胞，可分化为成软骨细胞进而形成软骨细胞。软骨膜内层的血管供给营养，软骨细胞通过基质与血管进行物质交换并运走代谢产物。 C．软骨的生长：软骨的发育和生长有同时并存的两种方式。 （1）附加生长（appositional growth）：又称软骨膜下生长。软骨膜内层的骨原细胞不断增殖分化为成软骨细胞，附加在软骨组织表面，并分泌基质和纤维，将自身埋于其中，以后
血管内皮细胞功能与心血管疾病关系的研究进展 摘要：血管内皮细胞（VEC）功能与心血管疾病的发生和发展密切相关, 本文综述了血管内皮细胞合成与释放的一氧化氮、内皮素、血管紧张素Ⅱ等多种生物活性物质及VEC功能紊乱与心血管疾病的关系，研究VEC功能与心血管疾病形成之间的相互关系将为心血管疾病的治疗提供新思路、新策略。 关键词：血管内皮细胞；一氧化氮；内皮素；血管紧张素Ⅱ；心血管疾病 现已证明VEC除了完成血液和组织液的代谢交换以外，还是机体最大的内分泌腺【1】，可以产生和分泌十余种生物活性物质，具有维持正常的血管张力、血液的正常状态和动态平衡等作用，并通过其屏障和分泌功能，影响着炎症反应的发生、发展，参与调节机体的免疫应答。VEC功能紊乱在高血压、心力衰竭、动脉粥样硬化（AS）等心血管疾病的发病过程中具有重要意义。 1血管内皮细胞功能【2】 VEC的功能极其重要和复杂。1维持血管内膜的光滑，防止血小板及白细胞粘附，防止有害物质侵入血管壁。2具有半透膜的作用，维持血液、组织液中物质的交换。3合成并释放多种生物活性物质，如一氧化氮（NO），PGI2,，内皮素（ET）等，调节血管张力，维持正常血压。4合成致栓及抗栓物质，维持其动态平衡，如肝素，组织型纤溶酶原激活物（t-PA）及血管性假血友病因子（vWF）等。5 合成胶
原基底膜及血管平滑肌保护层。6合成血管生长因子及血管紧张素转化酶（AEC）。7影响血管壁对脂蛋白等物质的代谢。 2血管内皮细胞功能的标志物质【3~5】 2.1 一氧化氮(NO)。NO由血管EC释放，EC以L一精氨酸和分子氧作为底物，在NO合酶作用下生成NO 继之进入邻近的平滑肌细胞，激活鸟苷酸环化酶分解GTP使c—GMP增加，导致血管平滑肌舒张。NO还有抑制血管平滑肌增殖、抗血小板聚集和抗血栓形成作用【 3.5】。基础状态下，EC作为血藏感受器，转化血液切变力的机械信号为化学剌激，促使NO释放，维持血管张力和血流量相对恒定。乙酰胆碱、5_羟色胺、P物质，缓激肽、凝血酶、腺苷、TXA2、组胺{细胞因子如白介素-1、肿瘤坏死因子以及内毒素，都能促使NO释放。 2．2 PGI2。EC通过环氧化酶及前列环素合成酶途径代谢花生四烯酸产生PGI2，再通过第二信使cAMP发挥生物学效应。凝血酶、缓激肽、组胺，腺苷、高密度脂蛋白、TXA2、白三烯、血小板生长因子、组织缺氧和血流动力学应激等，促使EC释放PGI2。PGI2和NO 协同扩张血管，防止血小板聚集和抗血栓形成【5】。 2．3ET1988年Yanagisawa【6】从猪主动脉EC中分离提纯出21 个氨基酸组成的多肽,称内皮素。ET 受体中B型主要分布在EC,激活后可使EC释放NO、PGI2,但其舒血管效应常被A型受体兴奋所致平滑肌细胞强烈而持久的收缩所掩盖。有实验表明,给大鼠持续滴注ET1 后血液浓缩,微动脉和微静脉收缩,微循环血流量减少,血栓形成;
细胞基质与功能 细胞外基质 细胞是生物体的基本结构单位，然而在多细胞生物体中，细胞大都以组织的形式存在，组织中除了细胞成分外，尚存在有非细胞性的细胞间物质。 在动物组织中，这种细胞间物质是由一些蛋白质和多糖大分子构成结构网络，这些存在于细胞间的大分子结构称为细胞外基质。 实际上细胞外基质是细胞的分泌物在细胞附近构成的精密结构，它通过与细胞质膜中的细胞外几种受体结合，同细胞建立相互关系。它对细胞的分化、增殖、形状、迁移和功能活动都由重要的影响。 细胞外基质主要由凝胶基质和纤维网架构成 凝胶基质为多糖，包括氨基聚糖和蛋白聚糖 纤维网架为纤维蛋白。纤维蛋白非两种，一是起结构作用的，如胶原蛋白、弹性蛋白 一是起黏合作用的，如纤连蛋白和层连蛋白。 基质中的多糖凝胶使细胞外基质具有抵抗压力的作用，细胞外基质凝胶中的纤维呈网状结构，因而各种养料、代谢产物和激素等物质可穿越网孔迅速扩散，便与在血液和组织之间进行交换。 细胞外基质是指分布于细胞外空间，由细胞分泌的蛋白质和多糖所构成的网络结构，细胞外机制不仅为组织的构建提供了框架，还对其接触的细胞命运及其它功能产生重要的调控作用。细胞外机制具有以下功能： 1.细胞外基质将细胞粘连在一起构成组织；动物组织的构建既是多细胞相互作用的结果，也是细胞与细胞外基质相互作用的结果 2.提供细胞外网架，在组织中或组织之间起支持作用 3.细胞外基质的三维结构即成分是动态变化的没通过细胞微环境的改变对细胞形态、生长、分裂、分化和凋亡起到控制作用。 糖胺聚糖（GAG） 糖胺聚糖是重复二糖单位构成的长链多糖，不分支。二糖单位为氨基糖（N-乙酰葡糖胺或N-乙酰版乳酸）和糖醛酸（即葡萄糖醛酸）。氨基糖大多硫酸化。过去糖胺聚糖也称为粘多糖。 根据糖残基性质、连接方式和硫酸基的数量和存在部位。可将糖胺聚糖分为4类：1.透明质酸 2.硫酸软骨素和硫酸皮肤素 3.硫酸类肝素和肝素 4.硫酸角质素糖胺聚糖的特性与功能意义：糖胺聚糖多糖连不能曲折，形不成球状构象，呈充分展开构象，且糖胺聚糖呈高度亲水性。糖链带有大量负电荷，可吸引许多阳离子，从而对渗透压具有很大影响，可将大量水分吸收吸收到基质中，使其具有高膨胀压，可耐受很强的压力。在细胞外形成多空的糖胺聚糖凝胶，占据了细胞质的大部分空间，提供机械支持作用。由于糖胺聚糖凝胶中的许多空洞，因此水溶性分子可在凝胶状红迅速扩散，同时也游离于细胞在机制中的迁移。 透明质酸 4类糖胺聚糖当中，分子结构最为简单，是唯一一种不含硫酸的成员，存在于动物所有组织和体液中，在早期胚胎组织中特别丰富。 细胞外基质中的透明质酸不是由细胞分泌产生的，而是由质膜中的酶复合物直接从细胞表面聚合出的分子链。透明质酸不与蛋白质形成共价结合的蛋白聚糖 透明质酸的功能是多方面的：1.在成体组织和关节肿抵御压力 2.在胚胎发育中起空袭
血管平滑肌细胞表型转换的机制 基础医学院 07级临床一班陈依然 90701114 摘要 由血管平滑肌异常增殖导致的血管重构是PCI术后再狭窄的重要原因之一。血管平滑肌细胞增殖能力与其表型转换密切相关。本文讨论了血管平滑肌细胞表型转换的特点、机制和相关信号传导途径。 关键词 血管平滑肌细胞表型转换信号传导途径 正文 自1977年冠心病介入治疗技术问世以来，其术后再狭窄（RS）一直是一个影响其远期疗效的重要问题。虽然RS的具体机制尚不明确，但目前已经公认血管平滑肌细胞（Vascular Smooth Muscle Cell, VSMC）异常增殖、迁移及大量合成细胞外基质是其主要原因。而VSMC增殖的首要条件就是表型转换。 VSMC的表型可分为分化程度较高的收缩型（分化型）和分化程度较低的分泌型（未分化型或去分化型），我将就其特点和两者之间相互转换的相关信号传导途径进行探讨。 1. 表型转换的特点 VSMC来自胚胎发育时期的中胚层，逐渐分化为不同的细胞群并获得具有成年特征的分化表型，即收缩型。但与骨骼肌、心肌细胞不同的是，VSMC在分化成熟后仍可在某些因素的刺激下去分化成为分化程度较低的分泌型。有报告称，这两种表型可能代表了共存于血管壁内一系列不同表现型的两个极端类型，且表达不同的基因和蛋白。正常成人动脉血管的VSMC以收缩型为主，其主要功能是维持血管的弹性和收缩血管。收缩型VSMC增殖、迁移能力差或无，胞体呈梭形或带状，含大量肌丝和结构蛋白含，合成细胞器如粗面内质网、高尔基复合体含量较少，合成基质的能力差或无，体积较小。分泌型VSMC主要存在于胚胎中期血管和病理血管中，其主要功能是增殖、迁移入内膜以及合成细胞外基质蛋白。形态上类似成纤维细胞，肌丝和结构蛋白含量较少，合成细胞器增多，合成和分泌基质蛋白的能力较强，体积较收缩型大。
第37卷第11期2009年11月化 工 新 型 材 料N EW CH EM ICAL M A T ERIA L S Vo l 137No 111 #1# 综述与专论 基金项目:国家重点基础研究发展计划(973计划)(2005C B623904) 作者简介:孙庆兰(1985-),女,硕士研究生,从事组织工程化血管构建等方面的研究。 血管组织工程支架材料的研究进展 孙庆兰1,2 张 华1* 张西正2 李瑞欣2 郭 勇2 (11天津工业大学理学院,天津300160;21军事医学科学院卫生装备研究所,天津300161) 摘 要 血管支架材料在组织工程血管构建过程中起着非常重要的作用。近年来已合成与制备了许多新型血管支架材料,并对材料进行了相关方面处理。本文对天然生物材料、合成高分子可降解材料和复合材料等血管组织工程支架材料进行了综述。 关键词 血管组织工程,天然生物材料,高分子可降解材料 Advances of vascular tissue engineering scaffold materials Sun Qinglan 1,2 Zhang H ua 1 Zhang Xizheng 2 Li Ruix in 2 Guo Yong 2 (11Schoo l o f Science,Tianjin Poly technic U niv er sity,T ianjin 300160; 21Institute of M edical Equipment,Academ y o f Military M edical Sciences,T ianjin 300161)Abstract V ascular scaffo ld mater ials take a v ery im po rtant par t in the co nstr uction o f tissue eng ineering blood ves -sel.Recent ly ,many novel scaffold materials,Which ar e tr eated in r elated aspects,have been synthesized and prepared,with the dev elo pment of science and the ex per imental techno lo gy o f co nt inuous pr og ress.A lo t o f vascular scaffold mater-i als wer e review ed,such as natur al biomat erials,synthetic and degr adable polymer co mpo sites. Key words vascular t issue eng ineering ,natural biomater ial,deg radable poly mer mater ial 随着生物学技术的不断进步,组织工程得到了迅速的发展,而血管组织工程也得到了相应的发展。血管支架材料在血管组织工程构建中起到非常重要的作用,是活细胞在体外生长所需支撑物,可以为组织化血管提供一定的机械强度和力学特性,种子细胞生长的三维空间结构,含有生物信息促进细胞的粘附与生长,增殖。近年来,生物医用材料研究取得了相当大的进步,这也加快了血管支架的发展,越来越多的新型材料应用于血管组织工程方面的研究。但是血管组织工程的最终目的是为了应用于临床,所以一个理想的支架应具备以下性质:1可控制的生物降解速度;o低免疫原性,不引起炎症反应;?良好的生物相容性;?良好的力学和生理学性能; ?合适的多孔结构;?易于加工性;?可消毒性[1-2] 。 根据来源和性能,目前研究应用的血管支架材料一般分为三类:天然生物材料,合成高分子可降解材料和复合材料。 1 天然生物材料 111 胶 原 胶原是机体内最丰富且普遍存在的结构蛋白,含有细胞粘附序列(RG D)及细胞特定粘附信号[3-4]。胶原具有良好的生物相容性,低免疫原性,含有丰富的生物信息促进细胞的粘 附,生长与增殖,缓解血管周围的压力,防止血管拉伸与膨胀等,是一种良好的血管支架材料[4-7]。Weinberg 等[7]通过培养牛内皮细胞、平滑肌细胞和成纤维细胞构建了第一根组织工程血管。成纤维细胞种植于内皮细胞与平滑肌细胞中间形成一个多层的类似于血管的组织,作为一种有效的渗透性屏障。血管强度依赖于与Dacr on 网片结合的胶原层数,但是却无法满足回植要求。但是单独由胶原制成的血管支架的机械强度并不能满足体内血流的压力和剪切力的要求。Zieg ler 等[8]设计了一种由血管平滑肌细胞、?型胶原和内皮细胞组成的血管共培养模型。结果表明,即使在没有平滑肌细胞和流动切应力的情况下,胶原也可维持内皮细胞的生长,表明细胞外基质对于体内细胞的分化起到了重要作用。 112 脱细胞基质 目前,脱细胞基质已成为研究的热点[9-13]。脱细胞基质可分为血管组织脱细胞基质与非血管组织脱细胞基质。11211 血管组织脱细胞基质 天然血管组织经过处理脱除细胞后,保留其天然的物理结构及性能,非常符合体内血管生物学结构要求,并且富含生长因子及细胞粘附序列,生物相容性良好。另外,取材比较容易,血管支架可以采用同种动物自体或者异体脱细胞血管基
·论著· 应用血管脱细胞基质膜片构建 组织工程血管的初步研究 付炜 薛继鑫 何晓敏 殷猛 郑景浩 王伟 徐志伟 DOI ：10.3877/cma．j．issn．1674-0785．2012．22．021 基金项目：国家自然科学基金（31200735）；上海市自然科学基金（12ZR1446500）；上海交通大学医工交叉项目（YG2012MS36）；上海市浦东新区科技发展基金（PKJ2012-Y48）作者单位：200127 上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心心 胸外科（付炜、何晓敏、殷猛、郑景浩、王伟、徐志伟），儿科转化医学研究所（付炜、郑景浩、王伟）；温州医学院附属第二医院手整形外科（薛继鑫） 通讯作者：付炜，Email ：fuweizhulu@163．com ；徐志伟，Email ：zwxumd @gmail．com 【摘要】目的探讨应用血管脱细胞基质膜片构建组织工程血管的可行性。方法 获取成年猪主动 脉弓及升主动脉，剔除内膜和外膜后，切成20μm 厚、1.5cm 长、1cm 宽的薄片，经脱细胞处理后，接种人脐动脉平滑肌细胞，利用“三明治”法构建成管道状的细胞材料复合物，体外培养1周后植入裸鼠背部皮下，并于8周后取出进行组织形态学及生物力学检测， 评价形成血管效果。结果动脉血管切成膜片后很容易将 细胞脱除干净， 细胞外基质成分如弹性蛋白和Ⅰ型胶原得到很好的保存。经“三明治”法构建的组织工程血管植入裸鼠皮下8周后可以形成良好的管道样结构，接种的平滑肌细胞深入到管道内部，同时具有良好的生物力学性能。结论 利用血管脱细胞膜片可以较好地解决脱细胞不完全和细胞接种不到血管壁内部的问 题，为构建组织工程血管提供了一种新的方法。 【关键词】血管； 组织工程； 脱细胞膜片 Engineering blood vessel with acellular blood vessel sheets and smooth muscle cells FU Wei ，XUE Ji-xin ，HE Xiao-min ，YIN Meng ，ZHENG Jing-hao ，WANG Wei ，XU Zhi-wei．Department of Pediatric Thoracic and Cardiovascular Surgery ，Institute of Pediatric Translational Medicine ，Shanghai Children's Medical Center ，Shanghai Jiaotong University School of Medicine ，Shanghai 200127，China Corresponding author ：FU Wei ，Email ：fuweizhulu@163．com ；XU Zhi-wei ，Email ：zwxumd@gmail．com 【Abstract 】Objective To explore the feasibility of engineering blood vessel with acellular blood vessel sheets and smooth muscle cells．Methods Adult pig aortic arch and ascending aorta ，excluding the intima and adventitia ，was cut into 20microns thick ，1.5cm long ，1cm wide．The sheets were decellularized with 1%SDS and lyophilized．The acellular sheets and smooth muscle cells that isolated from healthy newborn umbilical cord were then stacked layer-by-layer around with the catheter ，in a “sandwich ”manner ，and cultured in centrifuge tube．After 1weeks of cultivation ， the constructs were then implanted subcutaneously in nude mouse．Results DAPI and histological analysis showed that cells were completely removed from blood vessel sheets after decellularization．Immunohistochemical staining of elastin and collagen Ⅰshowed that extracellular matrix were well preserved．Blood vessel tissue formed after 8weeks of mature in vivo and smooth muscle cells could be seen within the vessel wall．Those tissue engineering blood vessel showed good biomechanical properties．Conclusions Our findings show that acellular blood vessel sheets could be a promising method to prepare scaffold for blood vessel tissue engineering． 【Key words 】Blood vessels ； Tissue engineering ； Acellular sheets 血管移植是先天性心脏病或其他动脉疾病的一种 有效治疗方法［1］ ，然而却受缺乏合适的自体血管供搭桥或其他血管重建手术所局限 ［2］ 。随着组织工程概念 的提出及1986年第1根组织工程血管的成功构建 ［3］ ， 体内外构建具有生长潜能生物相容性好的组织工程化血管用于血管移植成为再生医学领域的研究热点之 一。构建组织工程化血管的关键在于理想的支架材料为细胞黏附浸润提供类似天然血管的三维结构，并满 足天然血管的生物力学性质和免疫原性［4］ 。目前血管支架材料主要有生物可降解高分子聚合物支架和天然 脱细胞血管基质两大类， 其中天然脱细胞血管基质由于具有天然的组织成分和结构，良好的生物相容性，能 够提供细胞所需的信号，可促进细胞黏附及保留分化功能的优势，因而最具临床应用前景 ［5］ 。然而，利用脱 细胞材料构建组织工程化血管依然面临两大挑战， 一·0907·中华临床医师杂志（电子版）2012年11月第6卷第22期Chin J Clinicians （Electronic Edition ），November 15，2012，Vol．6，No．22