绿色荧光蛋白

GFP性质
荧光极其稳定。在激发光照射下，GFP抗光漂白 (Photobleaching)能力比荧光素(fluorescein)强，特别在 450～490nm蓝光波长下更稳定。
需要在氧化状态下产生荧光。强还原剂能使GFP转变为 非荧光形式，但一旦重新暴露在空气或氧气中，GFP荧光 便立即得到恢复。
GFP融合蛋白的荧光灵敏度远比荧光素标记的荧光抗体高， 抗光漂白能力强,适用于定量测定与分析 。
荧光的产生不需要任何外源反应底物。 故 GFP作为一种 广泛应用的活体报告蛋白，其作用是任何其它酶类报告蛋 白无法比拟的。
Hale Waihona Puke Baidu
GFP在生物技术中的应用
分子标记
利用绿色荧光蛋白独特 的发光机制，可将GFP作 为蛋白质标签(protein tagging)，即利用DNA重 组技术，将目的基因与 GFP基因构成融合基因， 转染合适的细胞进行表达， 然后借助荧光显微镜便可 对标记的蛋白质进行细胞 内活体观察。
融合抗体
近二十年来，抗体生成技术有了飞速发展，已 经从细胞工程抗体发展到了基因工程抗体 。单链 抗体是研究得较多的一种小分子抗体 。绿色荧光 蛋白融合单链抗体后，因融合抗体具有与抗原结 合及发射荧光两种特性，故这一人工分子可用做 免疫染色的检测试剂，直接应用于流式细胞仪和 免疫荧光的标记及肿瘤的检测等 。
药物筛选
基于细胞的荧光分析可分为三类：即根据荧光的密度 变化、能量转移或荧光探针的分布来研究目标蛋白如受体、 离子通道或酶的状态的变化。
荧光探针分布是利用信号传导
中信号分子的迁移功能，将一 荧光蛋白与信号分子相偶联， 根据荧光蛋白的分布情况即可 推断信号分子的迁移状况，并 推断该分子在迁移中的功能。 由于GFP分子量小，在活细胞 内可溶且对细胞毒性较小，因 而常用作荧光探针。
基本介绍
绿色萤光蛋白(green fluorescent protein)，简 称GFP，这种蛋白质最早 是由下村修等人在1962年 在一种学名Aequorea victoria的水母中发现。 其基因所产生的蛋白质， 在蓝色波长范围的光线激 发下，会发出绿色萤光。 这个发光的过程中还需要 冷光蛋白质Aequorin的帮 助，且这个冷光蛋白质与 钙离子(Ca2+)可产生交互 作用。
生物传感器
绿色荧光蛋白由于其独特的光信号传导机制，以及在表 达后易被周围化学环境和蛋白之间的相互作用所影响的特 性，因而极适于用做活细胞体内的光学感受器 。
应用前景
➢转染细胞的确定 ➢体内基因表达的测定 ➢蛋白质分子的定位和细胞间分子交流的动
态监测 ➢免疫分析 ➢核酸碱基探针分析 ➢分子间第二信使钙离子和 cAMP 水平的指
示
亟待解决的问题
荧光信号强度的非线性性质使得定量非常 困难 多数生物具有微弱的自发荧光现象
实验中发现很难建成 GFP 稳定细胞株 , 可能与 GFP 参与细胞凋亡过程有关