高效液相色谱法

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1. 简介
高效液相色谱法 （HPLC）又称“高压液相色谱”、“高速 液相色谱”、“高分离度液相色谱”、“近代柱色谱”等。高 效液相色谱是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用 高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合 溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成 分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。 该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领 域中重要的分离分析技术。HPLC在国内和国外的药物分析领域 的应用范围很广，发展速度也很快，尤其在我国，近十几年来 HPLC方法越来越受到重视。尤其在药物分析应用方面，高效液 相色谱法有着不可替代的作用，它对于药物的鉴别、分离、定 量测定都有着较高的准确度，本文对高效液相色谱法在药物分 析的各方面进行了简单的综述。
兽药饲料.2016(502):169-171.
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3.2 临床治疗药物的监测
HPLC法不需要对样品进行高温汽化，一般不必进行
衍生化处理；并且其固定相种类较多，流动相通过改变
其组成成分及比例，可以对绝大多数有机化合物药物进
行分离测定。因此，HPLC法是一种比较成熟的，临床药
物监测方法。
效学。同时随着药物分析技术的不断进步和发展，可对人体和
动物体内（体液、组织和血中）药物及其代谢物的浓度进行定 量分析，它对药品的评价、指导临床合理用药和药代动力学研 究均具有重要的意义和现实需要。
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冯素香等建立芦荟大黄素在大鼠血浆中的固相萃取-高效液相 色谱分析方法,研究大鼠体内的药代动力学过程。SD大鼠,按50和 20mg.kg-1剂量灌胃给药,不同时间点尾静脉取血,以SPE处理血浆样 品,用HPLC内标法测定血药浓度,甲醇-0.1%磷酸水(70∶30)为流动 相,柱温为30℃,检测波长254 nm,以DAS2.0软件计算药代动力学参 数。结果:血浆中芦荟大黄素在0.016～19.53μ g.mL-1(r=0.998 1) 范围内线性关系良好,提取回收率为88.7%～94.6%,最低检测限为 0.008μ g.mL-1,定量限为0.016μ g.mL-1,日内和日间精密度RSD均 <6%.建立的测定大鼠体内芦荟大黄素含量的方法具有良好的准确 度、精密度以及专属性,适用于芦荟大黄素在大鼠体内的药代动力 学研究。
和左旋体，但往往只能获得右旋体和左旋体的混合物。手性药物
往往呈现一种对映体具有强的生物活性和药效，而另一种却无效， 有时甚至有毒害作用。目前，各种手性分析技术中，高效液相色 谱法对于定量分析和制备分离都是应用最为广泛的一种技术。
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翟明翚； 苏立强等建立了以羧甲基-β-环糊精（CM-β -CD）作 为手性流动相添加剂,高效液相色谱拆分美索巴莫对映体的方法。
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高效液相色谱法在药物分析中的 研究进展
汇报人：李巧荣 2016.12.19
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主要内容
1.简介
2.高效液相色谱法在药物分析中的应用
3.高效液相色谱法在药物监测中的应用
4.高效液相色谱法在药代动力学中的研究
5.高效液相色谱法未来的发展方向 6. 参考文献 7.本综述讨论提纲
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[9]吕丹,刘冠男,等.高效液相色谱法在药物分析中的研究进展[J].企业导 报.2014.3：145，167. [10] 卫莉玲,简艳婷,等.高效液相色谱法在药物分析中的应用[J].理论实 践.2016.04.222. [11] 洪得荣.超高效液相色谱法在药物分析中的应用[J].应用科 技.2016.25.291. [12] 翟明翚；苏立强等. HPLC手性流动相添加剂法拆分美索巴莫对映体 [J]. 新技术与应用.2016.28(3):416-419. [13]秦红英. 高效液相色谱法在中草药酚类化合物分析中的应用研究[J]. 西南大学硕士学位论文.2015.4. [14] 陈彩云等.高效液相色谱法同时测定复方中药制剂中的芍药苷、甘草 酸和丹参酮ⅡA的含量[J].食品分析与检测.2016.7(10):4203-4209. [15]印成霞.超高效液相色谱法在药物分析中的应用研究[J].卫生论 坛.2013.23(8):230-231. [16]郝乘仪等.RP-HPLC法同时测定小儿肺热咳喘颗粒中两种主要活性成分 的含量[M].2017.38(1):18-20. [17]王星等.超高效液相色谱-串联质谱法定性和高效液相色谱法定量分析 天南星中氨基酸成分[J].研究论文.2014.32(12):1326-1332.
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2.2 在复方制剂分析方面的应用
复方制剂、杂质或辅料干扰因素多的品种多采用高效液相 色谱法。重要复方制剂和化学复合制剂通常含有多种有效成分， 各有效成分的含量决定了药物的治疗效果。高效液相色谱法适 合分子量大、难气化、对热敏感等物质的分离分析，因此在中 药复方制剂和化学复合制剂的分析中得到了广泛的应用。 泻痢固肠片是由甘草、陈皮、肉豆蔻、白芍、党参、茯苓 等9味中药材制成的治疗腹胀腹泻的中药复方制剂，方中陈皮、 白芍具有理气燥湿、益气健脾之功效，并以甘草调和诸药，共 奏健脾温肾，涩肠止泻之功效。齐老师等建立固相萃取-高效 液相色谱法同时测定泻痢固肠片芍药苷、甘草苷、陈皮苷的含 量，该法快速、简便、准确性高，为泻痢固肠片的质量控制提 供重要科):105-111.
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4.高效液相色谱法在药代动力学中的研究
HPLC能同时进行分离和定量测定的优点在治疗药物检测和 药物代谢动力学中体现地尤为突出。为了达到药品应用的安全、 有效、可靠，这就需要了解和研究药物及其制剂在体内的过程 （吸收、分布、代谢、排泄），以便研究药物的作用机制及药
在C18色谱柱上,系统考察了手性添加剂的种类及浓度、有机修饰剂
的种类及含量、流动相pH值和流速等因素对拆分的影响,确定了最 佳色谱分离条件:流动相为甲醇-乙腈-水（体积比为25∶63∶12） ,CM-β -CD浓度为0.6 g·L-1,pH=4.16（用三乙胺-冰乙酸调节）, 流速为0.4m L·min-1,检测波长为220 nm。该方法拆分美索巴莫
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3.高效液相色谱法在药物监测中的应用
3.1 中药材指纹的建立
随着中药的普及，中药材急需国际化、标准化。而中药材的 指纹图谱研究是其标准化的必经之路。中药指纹图谱的建立，应 以系统的化学成分研究和药理学研究为依托，体现系统性、特征
性和稳定性三个基本原则。为此，才能保证指纹图谱的标准化、
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2. 高效液相色谱法在药物分析中的应用
2.1 在中药分析方面的应用
中药历史悠久，源远流长。它不仅是我国医药体系中独具 特色的重要组成部分，也是西方医药，特别是植物药、天然药 物的有机组成部分。
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陈静娴，张敏敏等建立分散固相萃取-高效液相色谱(DSPEHPLC)联用技术应用于金银花及其相关中成药连花清瘟胶囊(LQC) 中环烯醚萜苷类成分(马钱酸、莫诺苷、马钱苷、当药苷、断氧 化马钱子苷、开联番木鳖苷二甲基乙缩醛)的快速提取、净化和 测定的方法。方法是分别采用超声提取法对金银花及相关中成 药LQC进行提取,采用不同净化材料进行快速净化,采用HPLC法测 定环烯醚萜苷类成分。结果采用硅藻土作为净化剂,金银花提取 物净化效果较好;采用硅藻土-活性炭(80∶20)的复合净化剂 时,LQC提取物净化效果较好;且该提取方法操作简单、快速、样 品用量少、净化效率高,结合HPLC技术实现了金银花及相关中成 药LQC中环烯醚萜苷类成分的快速提取、净化和测定。结论是拓 展了DSPE技术在复杂基质中药材及中成药中活性成分提取、净 化中的应用,为复杂基质中药材及中成药中活性成分的提取净化 及分析研究提供了方法和数据支持。
中国新药杂志，2012.21(8):908-911.
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5.高效液相色谱法未来的发展方向
高效液相色谱法在现在分离中发挥着重要的作用，已广泛应用 于各个领域，在今后的研究中，高效液相色谱仍然会在药物分析中
扮演非常重要的角色，高效液相色谱法今后在以下三个方面着重发
展。 缩短分析时间,提高分离效率 进一步向自动化、智能化及联用技术上发展 高效液相色谱在中药分析中的发展
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6. 参考文献
[1]王静，魏娜，等.HPLC、UPLC测定芪参益气滴丸中5个丹参活性成分含量 的比较研究[J].药物分析杂志2011.31(9):1678-1682. [2]杨水艳,谢笑天,叶青松，等.铂类抗癌配合物的高效液相色谱法研究进 展. 贵金属，2011.32(3):90-95. [3]冯素香,徐会平,等.大鼠血浆中芦荟大黄素浓度的固相萃取-高效液相色 谱法测定及其药代动力学研究[J].中国新药杂志，2012.21(8):908-911. [4] 齐广才,吴江瑞,等.固相萃取-高效液相色谱法测定泻痢固肠片中芍药 苷、甘草苷、橙皮苷的含量[J].中南药学，2016.04：418-421. [5]齐广才,等.HPLC法同时测定复方消痔栓中3种成分的含[J].西北药学杂 志，2016.27(15):2138-2140. [6]肖凤艳等.乌腺金丝桃HPLC指纹图谱初步研究[J].兽药饲 料.2016(502):169-171. [7] 邵林，郭庆梅，等.山东不同栽培品种金银花HPLC指纹图谱的比较[J]. 中国实验方剂学杂志，2011.17(19):117-121. [8] 王转,尹东东,等.高效液相色谱法在手性药物分析中的研究进展[J].药 物分析杂志.2015.31(7):1127-1133.
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庄奕筠； 张吟等建立超高效液相色谱法测定人血清中卡马 西平(CBZ)、苯妥英钠(PHT)、苯巴比妥(PB)、奥卡西平(OXC)活 性代谢产物利卡西平(MHD)的浓度。方法于2014年1月2015年6月 收集血清样品经甲醇沉淀蛋白后直接进样测定,采用Shim-pack XR-ODSⅢ柱(1.6μ m,75 L×2.0)。流动相为甲醇-水,采用梯度 洗脱程序;扫描波长200～360 nm,检测波长为210 nm,流速:0.4 m L/min,柱温:35℃,进样体积:10μ L。结果 CBZ、PHT、PB、MHD均 能达到良好分离,与相邻峰的分离度(R)均>1.5;线性范围分别为 (1.00～ 32.00)μ g/mL(r=0.9997)、(2.55～81.60)μ g/mL(r=0.9997)、(2.35～75.20)μ g/mL(r=0.9999)、(2.50～ 80.00)μ g/m L(r=0.9998);方法回收率>97%;日内和日间精密度 的相对标准偏差(RSD)均<1.6%。结论超高效液相色谱法(UPLC) 快速、简便、准确,适用于临床治疗药物监测。
西北药学杂志，2016.27(15):2138-2140.
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2.3 在手性药物分析方面的应用
在生物体内，几乎所有具有重要生理意义的有机生物分子都
有手性，绝大多数都是旋光性物质。两种化学组成、分子式完全 相同的化合物，但因组成化合物的原子在空间取向不同，而成为 镜像的化合物，称为手性化合物。由于对映体的物理、化学性质 相同，实现它们的分离就比较困难，如大多数氨基酸都有右旋体
药剂与工艺.2016.47(16):2850-2856.
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但由于中药化学成分的复杂性，中药成分分析一直存在着 分离难度大、分析时间长等问题。近年来，（UPLC）超高效 液相色谱分离技术的发展与成熟有效地弥补了传统高效液相 色谱（HPLC）分析中存在的不足，使中药化学成分分析进入 了高效、高通量的阶段。
规范化、客观化，从而便于推广和应用。利用HPLC技术，建立药 材或中成药特征的色谱或光谱的图谱是一种有效的方法。
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如肖凤艳； 张克勤等建立乌腺金丝桃高效液相色谱(HPLC) 指纹图谱,试验采用HPLC法,将样品经甲醇超声提取,选用shimpack VP-ODS C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μ m);柱温40℃;流动 相为甲醇和6 mmol/L磷酸氢二钠(磷酸调至p H值为6.5),梯度洗 脱;分段用260 nm、324 nm、408 nm、588 nm检测;流速为0.6 mL/min的系统条件下进行研究。结果表明:此种检测方法的稳定 性和重复性均符合要求;通过随机对10批药材样品的监测分析,建 立了乌腺金丝桃中药材的HPLC指纹图谱,共标定了24个共有指纹 峰。说明所用方法稳定、可靠、重复性好,可为乌腺金丝桃中药 材的质量控制提供参考。
对映体,方法简便、经济、重现性好。
新技术与应用.2016.28(3):416-419.
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2.4 在药物鉴别方面的应用
在HPLC法中,保留时间与组分的结构和性质有关,是定性的参数,
可用于药物的鉴别.如中国药典收载的药物头孢羟氨苄的鉴别项 下规定:在含量测定项下记录的色谱图中,供试品主峰的保留时 间应与对照品主峰的保留时间一致.头抱拉定,头孢噻酚钠等头 孢类药物以及地西泮注射液,曲安奈德注射液等多种药物均采用 HPLC法进行鉴别。