05-细菌的芽孢和荚膜染色

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2、芽孢菌体的特点 不能繁殖的休眠体，含水少、 、芽孢菌体的特点：
含脂高、致密不透明，对不良环境有很强的抵抗能力。 有的芽孢在一定条件下可保持活力数年甚至数十年 之久。条件适宜时能重新萌发。 芽孢尤其能耐高温： • 枯草杆菌的芽孢，在沸水中可存 活1小时； • 破伤风芽孢杆菌可在沸水中存活 3小时； • 肉毒梭状芽孢杆菌的芽孢可在沸水 中存活6小时，即使在1800C干燥箱中仍可存活10 分钟。 芽孢可作为培养基灭菌彻底与否的检验依据。
微生物实验
细菌的芽孢和荚膜染色
一、实验目的
1、继续学习微生物制片方法； 2、掌握芽孢、荚膜染色的基本原理及
方法。
二、原理： 原理：
（一）芽孢染色 1、芽孢：某些细菌（多为革兰氏染色阳性 杆菌）在一定生长阶段或环境条件下，细 胞正常代谢、分裂停止，胞质浓缩，在细 胞内形成一个圆形、椭圆形或圆柱形，对 不良环境有较强抵抗能力的特殊结构。由 于在细胞内，也叫内生孢子 Endospore） 于在细胞内，也叫内生孢子（Endospore）。 内生孢子（
芽孢染色的原理： 4、芽孢染色的原理：
利用细菌的芽孢和菌体对染料的亲和力不同的原理， 用不同的染料进行着色，使芽孢和菌体呈不同的颜色 而便于区别。 细菌的芽孢壁比营养细胞的细胞壁厚，致密、通透 性低，着色和脱色都比营养细胞困难。
一般采用碱性染料 （孔雀绿）并在微 火上加热或延长染 色时间，使菌体和 芽孢同时都染上色 后，再用水冲洗脱 去菌体的染料，此 时仍保留芽孢的着 色，并用对照染料 来染菌体，这样就 将芽孢和菌体分别 染成两种不同的颜 色。
（二）荚膜染色法： 荚膜染色法：
有些细菌生活在一定营养条件下，可向细胞壁表面 分泌一层松散透明、疏松、柔软、粘度极大，粘液状或 胶质状的物质即为荚膜（Capsule）。 荚膜的化学成分主要是多糖、多肽、蛋白质、脂以 及由它们组成的复合物—脂多糖、脂蛋白等。 荚膜虽不是细胞的主要结构，但它是细胞外碳源和 能源性贮藏物质，并能保护细胞免受干燥的影响，同时 能增加某些病原菌的致病能力，抵御宿主吞噬细胞的吞 噬。
荚膜染色原理：荚膜化学成分为多糖类衍生物、 糖原或多肽，对染料结合力很弱，因此不易染色。 一般采用负染色 负染色的方法，使细菌和背景着色，背景 负染色 与菌体之间形成一透明区即荚膜。由于荚膜很薄， 容易变形，在制片时一般不用加热固定。
肺炎球菌荚膜染色
钾细菌荚膜染色
三、材料： 材料：
1、菌种：枯草芽孢杆菌、钾细菌； 菌种：枯草芽孢杆菌、 2、染色液：孔雀绿、蕃红溶液、甲醇、 染色液：孔雀绿、蕃红溶液、甲醇、 生理盐水等； 3、器材：试管夹、酒精灯、接种针、 载玻片、显微镜、香柏油、二甲苯、 擦镜纸等。
钾细菌(Bacillus mucilaginosus) 胶质芽孢杆菌 mucilaginosus)
四、操作步骤： 操作步骤：
（一）芽孢染色 ⑴取枯草杆菌制成涂片、干燥、固定； ⑵用试管夹夹住玻片一端，涂层上加孔雀绿3-4滴； ⑶加热5分钟使冒蒸汽，中途补加孔雀绿，勿煮干； ⑷冷却、水洗（细水）； ⑸蕃红溶液复染2 - 3分钟，水洗； ⑹干燥、镜检； ⑺结果：芽孢呈绿色，菌体呈红色。
3、芽孢的大小、位置具有分类鉴定上的意义： 芽孢的大小、位置具有分类鉴定上的意义：
肉毒 芽孢 杆菌
能形成芽孢的细菌种类
在杆菌中能形成芽孢的种类较多， 在杆菌中能形成芽孢的种类较多，在球菌 较多 和螺旋菌中只有少数菌种可形成芽孢 产生芽孢的几个属： 产生芽孢的几个属： 芽孢杆菌属(Bacillus) 芽孢杆菌属 梭状芽孢杆菌属(Clostridium) 梭状芽孢杆菌属 芽孢八叠球菌属(Sporosarcina) 芽孢八叠球菌属
（二）荚膜染色 ⑴取钾细菌一环，做成涂片，自然干燥（不能加热）， 可用吹风机冷风吹干； ⑵甲醇固定； ⑶水洗； ⑷蕃红溶液1—2分钟； ⑸水洗； ⑹自然干燥、镜检； 结果：背景红色、荚膜无色、菌体红色。
五、绘图： 绘出芽孢染色、荚 绘图： 绘出芽孢染色、 膜染色的结果
菌体
荚膜