电转法
设计方案一：
感受态制备：
1.挑一环酵母菌接种于5mL YEPD培养基中，30℃、250-300rpm培养过夜；
2.取1mL一级种子分别接种于两瓶50mL YEPD培养基中，30℃、250-300rpm培
养约16-18h(OD:；
3.于4℃离心收集菌体，用25mL冰无菌水洗涤一次后，细胞用10ml冰无菌水
重悬，可换成较小的离心管；
4.加入1ml，，10×TE缓冲液，摇晃均匀，再加入1ml 10×LiAc，旋转摇匀，
于30度轻轻摇动45min；
5.再加入 1 mol/L DTT，并同时旋转摇动，于30度轻轻摇动15min；
6.于4℃离心，弃上清（用枪吸），再用25mL冰无菌水洗涤；
7.冰冷的1mol/L山梨醇洗涤，离心收集菌体，弃上清（用枪吸）；
8.每管用100ul山梨醇溶解，分装于EP管中（80ul/管），于-70℃冰箱保存。电转化：
1．向感受态细胞中加入约5～10ug（体积小于10 ul）的DNA，用枪吹吸均匀，转移至预冷的电转杯中，静置5min；
2．擦干电转杯，电击，电击参数：，25uF，200欧姆；
3．立即加入1ml 预冷的山梨醇，转移至EP管中，于30℃静置1h；
4．离心，弃上清，加入1mL YEPD后，于30℃、200rpm培养2h；
5．离心得菌体后，吸除550 ul上清液，然后按150 ul/板进行涂板。
说明：该方法可直接采用50或100mL体系的一步法，即直接挑单菌落于YEPD 中培养至预定菌浓，也可采用试管摇菌收集菌体制备感受态。
设计方案二：
感受态制备：
1.挑一环酵母菌接种于5mL YEPD培养基中，30℃、250-300rpm培养过夜；
2.取1mL一级种子分别接种于两瓶50mL YEPD培养基中，30℃、250-300rpm培
养约16-18h(OD:；
3.于4℃，5000rpm，5min离心收集菌体，用25mL冰无菌水洗涤后，细胞重悬
于8ml处理液中（处理液配方：100 mM LiAc， 10 mM DTT， M山梨醇，10 mM Tris-HCl，pH ），室温静置30min；
4.4℃，5000rpm，5min离心收集菌体，用 1mol/L预冷的山梨醇洗涤三次，离
心条件一样；
5.每管用100ul山梨醇溶解（以黄枪头能吸取为宜，菌浓低时可适量少加入山
梨醇），最后以80 ul的终体积转移至EP管中（菌体太多可适当放弃部分），置于-70℃冰箱保存。
电转化：
1.向感受态细胞中加入约3ug（体积小于10ul）的DNA，用枪吹吸均匀，转移
至预冷的电转杯中，静置5min；
2.擦干电转杯，电击，电击参数：，25uF，200欧姆；
3.立即加入1ml 预冷的山梨醇，转移至EP管中，于30℃静置1h；
4.离心，弃上清，加入1mL YEPD后，于30℃、200rpm培养2h；
5.离心得菌体后，吸除550 ul上清液，然后按150 ul/板进行涂板。
说明：处理液中的DTT是在使用前加入，其它配好后于4度保存，DTT单独于-20度保存，可配成100倍的贮备液。制备体系可按比例放大。
设计方案二特别适合于采用一步法制备感受态细胞
具体如下：
1.挑一环酵母菌接种于5mL YEPD培养基中或转接于50mL YEPD中，在30℃、
250-300rpm 条件下培养至OD=6-10（为防止菌体老化，可将50mL培养体系提早收获细胞，取菌体时，以1mL/次，取菌两次或三次不等，使用菌浓达到预定的OD:6-10）；
2.取1mL菌液分装于EP管中，于4℃，12000rpm离心30s，弃上清；
3.收集菌体，用预冰的无菌水洗涤两次，离心条件一样；
4.所得菌体用1mL处理液（配方同上）于室温下处理30min；
5.离心，弃上清，加入1ml 1M 预冷山梨醇，离心，弃上清，重复两次；
6.最终用1M 预冷山梨醇溶解菌体至终体积为80 ul，于-70℃冰箱保存；
7.电转方法同上。
8.每一步的离心均30s即可，在较短的时间内制备出的感受态转化效率特别高。
备注：OD检测均为600nm，空白参比为：YEPD，高浓测定时应稀释测定。所有无菌水与山梨醇均在冰上预冷处理；在制备感受态阶段，所有离心均在4℃条件下。
醋酸锂转化法
方案一：
1.挑一环酵母菌接种于5mL YEPD培养基中，30℃、200rpm培养过夜；
2.取1mL一级种子分别接种于两瓶50mL YEPD培养基中，30℃、250-300rpm培
养约5h(OD:；
3.于4℃，5000rpm，5min离心收集菌体；
4.25mL冰无菌水洗涤两次，离心条件一样；
5.用1mL LiAc悬浮，离心收集菌体；
6.再用 LiAc悬浮，以50 ul/管分装于EP管中，置于冰上备用；
7.依次向上述50 ul感受态细胞中加入50% PEG3350 ：240ul、1M LiCl：36ul、
2mg/ml 单链DNA：50ul、转化DNA（5-10ug）：50ul；
8.剧烈旋涡混匀直至沉淀菌体完全分布均匀（约1min）；
9.30℃水浴孵育30min；
10.42℃水浴热休克20～25min；
11.13000rpm离心30s收集酵母菌体，重悬酵母于1ml YEPD培养基，30℃摇床
孵育4h；
12.离心收集沉淀菌体，取除约800 ul上清液，然后按每100 ul/板进行涨涂板。方案二：
1、接种液体YEPD培养基，过夜培养至1-2×107cells/ml；
2、取1mL一级种子分别接种于两瓶50mL YEPD培养基中，30℃、250-300rpm培
养约5h(OD:；
3、收集细胞，并用无菌水清洗，之后用1ml无菌水重悬，并转移到离心管；
4、1ml TE/LiAC（10×TE[ M Tris-HCI, M EDTA,pH ]；lO×LiAc[1 M LiAc pH ）
清洗细胞，然后用1×TE/LiAC重悬至2×109 cells/ml；
5、离心管中取50u悬浮液，用1ug转化片段和50ug单链鲑鱼精DNA混合；
6、加入300ul灭菌的40%PEG溶液，剧烈混匀；
7、30度振荡培养30min；
8、42度水浴热击15min；
9、离心5s，用1ml 1×TE重悬，适当稀释后涂布于选择培养基。
附：
电转法方案二中的处量液配制方法：
1.A液成份：100 mM LiAc， M山梨醇，10 mM Tris-HCl，pH ；配制量：500mL。
称取山梨醇，用适量dd无菌水溶解于500 mL容量瓶中；
事先配制1 M LiAc母液，再从LiAc母液中取50mL至所述容量瓶中；
事先配好1M Tris-HCl（pH ），再取5mL至所述容量瓶中；
用dd无菌水定量至500mL，转移至试剂瓶中，于4℃保存。
2.B液成份（母液）：1 M DTT 配制量：20mL。
2.1称取 DTT，加入到50mL小烧杯内；
2.2加入20 mL的 NaOAc，溶解后使用滤器过滤除菌；
2.3适量分成小份后，-20℃保存。
