实验八 血球计数板的使用

每毫升菌液的菌数=每小格平均菌数×4000×1000×稀释倍数
中格
25X16规格
一个中格的小格
在进行观察计数
时，由于菌体在血球 计数板上处于不同的 空间位置，要在不同 的焦距下才能看到。 所以观察时必须不断 调节微调螺旋方能数 到全部菌体，防止遗 漏。如菌体位于小格 的线上，计数时则数 上线不数下线，数左 线不数右线，这样做， 即可减少误差。酵母 菌的芽体细胞达到母 细胞大小一半时，即 可作为两个菌体计算， 每个样品应重复计数23次(每次数值差数不应 过大，否则应重测)再 取其平均值。
4. 测定菌数：静置几分钟后，先置低倍镜下观察，找到中央平台上 的小方格网后，转换高倍镜进行计数。计数时，如用16×25规格 的计数板，则取左上，右上，左下，右下四种格(共100个小格)的 酵母菌数；如用25×16规格的计数板，则除了取左上，右上，左 下，右下四个中格外，还需加数中央的一个中格(共80个小格)的 酵母菌。在分别求出100个小格或80个小格的酵母菌平均菌数后， 按下式计算：
5 .清洗：计数完毕后，血球计数 板直接用水冲洗，然后吸干或晾 干，最后用擦镜纸包好收藏，注 意不得用粗糙物品擦抹中央平板，
以免损坏小格刻度。
(二) 配制下次用培养基
1.明胶液化培养基（试管柱体） : 28支/班 2.糖发酵培养基: 每种糖28支/班 ,乳糖/葡
萄糖发酵液, 9mL/支 3.淀粉培养基(三角瓶装): 500mL /班
三、需用的仪器或试剂
器材：血球计数板(含特制的盖玻片)、显微镜、 玻棒、吸水纸、擦镜纸、1mL无菌吸管。
菌种：稀释10倍的酵母菌培养液，果酒发酵 醪液。
四、实验内容与操作步骤
(一)血球计数板的使用 1. 计数样品制备：按无菌操作要求，用1mL无菌吸管自稀释10倍的酵母菌
培养液试管中吸取菌液1mL移人9mL无菌水中，充分混匀，即得稀释 100倍的计数样品。原则以每个小格菌数为5-10个为宜来记数进行稀释。 2. 清洗计数板：将血球计数板及专用的厚盖玻片用药棉沾取95％酒精轻轻 擦洗，然后用自来水冲洗，再让其自然晾干或吸水纸吸干。源自文库3. 滴加菌液：将盖玻片盖在计数板的方格网上，用无菌吸管(或无菌玻棒) 吸取少许稀释100倍的酵母菌液，从盖玻片的一端注入，使菌液沿二玻 片间渗入，勿使菌液流到盖玻片或两边平台上，多余的菌液则用吸水纸 吸去。
实验八 血球计数板的使用及运用
一、目的与要求
了解血球计数板的构造，学习使用血球 计数板进行微生物计数的方法。
二、实验原理
放大后方格网计数室
正面图 正切面图
平台 XB-k-25 XB-k-16
面积1mm2，400个小方格， 放大后的图形为
中格
小格
16X25规格， XB-k-16
25X16规格， XB-k-25
五、思考题
1．计算每毫升(每克)所测样品的含菌数? 2．用血球计数板测定微生物细胞数量有何
优缺点?