病理生理学实验设计方案
课题：补肺活血胶囊对大鼠抗疲劳作用研究
实验目的：研究补肺活血胶囊的抗缺氧，抗疲劳的作用及作用机制
实验原理：临床研究表明：补肺活血胶囊具有降低全血粘度，降低血气中二氧化碳分压，提高氧分压，氧饱和度，改善肺通气功能，使机体获得更多的氧气，促进体内血糖的有氧氧化生成更多的ATP供体利用，增加肝糖原与肌糖原的储备（糖原的生成需要消耗ATP），同时减少由供氧不足而引起的乳酸等代谢产物的堆积，从而减达到抗疲劳的作用。
实验内容：
一、材料、试剂、仪器和实验动物
1.1 药品补肺活血胶囊（广东远大药业有限公司提供）、肾上腺素
1.2 试剂血乳酸测定试剂盒、丙二醛测定试剂盒、血尿素氮测定试剂盒、谷
胱甘肽测定试剂盒、血乳酸脱氢酶测定试剂盒、和超氧化物歧化酶测定试剂盒
1.3 器械、仪器灌胃针、小鼠玻璃游泳缸（自制,规格70cm×70cm×60cm）、
电子分析天平、721型分光光度测定仪、匀浆机、离心机、离心管、秒表等。
1.4 实验动物清洁级单一雄性昆明种小鼠8只及基础饲料
二、实验方法
2.1 分组与给药
实验动物分组:选用单一雄性昆明种小鼠80只,游泳实验和常压耐缺氧实验中各设空白对照组、补肺活血胶囊低，高组和肾上腺素组，共八组，每组10只小鼠（见表1）。
补肺活血胶囊低、高剂量组每天按0.86g/kg，3.44g/kg的浓度给予给予灌胃（灌胃前药液摇匀且灌胃体积小于1.5ml），肾上腺素组按0.2mg/kg的浓度给予肾上腺素腹腔注射（给药期间应根据全部小鼠平均体重的增加对灌胃量做适当调整）,空白对照组给与同体积的生理盐水灌胃。小鼠每次灌胃前断食2h,每天灌胃
1次，连续7天;基础饲料自由摄食;2d换水1次。
表1. 实验动物分组（共8组，每组1只）
空白对照组低剂量组高剂量组肾上腺素组游泳实验
常压耐缺氧实验
2.2指标测定方法
2.2.1 游泳实验：小鼠连续给药7d后，每组小鼠于末次灌胃前禁食12h，在末次给药1h后将小鼠放入游泳箱内做力竭游泳实验。小鼠尾部负重为体重5%的铁丝,放入自制玻璃游泳缸游泳, 水深约为35cm，水温25摄氏度,计取游泳开始到小鼠游泳疲劳而沉入水中8s不能浮起为止的时间为游泳时间。并立即取出肝脏,制作肝脏匀浆，离心机分离取上清备用。
2.2.2 常压耐缺氧实验：小鼠连续给药7d后, 每组小鼠于末次灌胃前禁食12h，在末次给药1h后将小鼠放进250ml的密封性好的磨口玻璃瓶内,将用纱布包好的15g钠石灰装入瓶内,将小鼠放入瓶内后立即用凡士林密封盖紧,当小鼠开始出现全身性痉挛症状时,立即开启瓶盖,将动物取出。记录从密封至小鼠发生全身性痉挛的时间。并立即取出肝脏,制作肝脏匀浆，离心机分离取上清备用。
2.2.3生化指标检测：采用肝脏匀浆上清,按照试剂盒的方法分别测定以下血生化指标：1.血乳酸(BLA)含量, 2.丙二醛(MDA)含量,
3.血尿素氮(BUN)含量,
4.谷胱甘肽(GSH)含量
5.乳酸脱氢酶(LDH)活性,
6.超氧化物歧化酶(SOD)活性。
2.2.4 统计学分析：所有实验数据均在SPSS软件包上进行处理,实验测定结果以平均数±标准差(Mean±SD)表示,显著性检验为t检验,与正常对照组比较显著性水平为P<0.05以*表示。
三、结果与讨论
表2补肺活血胶囊对小鼠游泳能力和常压耐缺氧能力的影响
预期结果：表2的结果应显示,与对照组比较, 补肺活血胶囊组小鼠的游泳能力增强了,常压耐缺氧时间应延长。并且随着灌喂剂量的增加，小鼠的游泳能力相应增强，常压耐缺氧时间也相应延长
表3补肺活血胶囊对运动后小鼠血液中疲劳代谢物指标的影响
预期结果：表3结果应显示,与对照组比较,实验组小鼠运动后的血乳酸含量、血尿素氮含量、血清丙二醛、血清谷胱甘肽显著降低,并且随着灌喂剂量的增加，降低得越显著。表明补肺活血胶囊降低了小鼠剧烈运动后乳酸的积累或产生,从而延缓了机体疲劳发生和降低了机体疲劳程度。
表4 配方奶粉摄入对小鼠乳酸脱氢酶和超氧化物歧化酶活性的影响
预期结果：表4的结果应显示,与对照组比较,灌喂了配方奶粉小鼠的肝糖原的含量提高了,并且随着灌喂剂量的增加，小鼠的肝糖原的含量相应提高，从而有利于增强机体对运动负荷的适应能力。
四、可行性分析
4.1肺活血胶补囊广东远大药业有限公司提供。
4.2实验室能提供实验所用仪器、器械及小白鼠。指导教师有丰富的实验经验，
学生具有一定的实验基础。
五、可能遇到的问题
5.1、实验过程中可能因小鼠本身的差异，而造成实验结果有误差。
5.2、操作者灌胃技术不够熟练，造成小鼠呕吐，不能充分吸收相应分量的药
物，导致实验结果不明显。或者进针不准确损伤小鼠的消化道，甚至造成小鼠死亡，影响实验结果。
