标曲线血清丙氨酸氨基转移酶测定(赖氏法.

【操作】 1、试剂配制 1份4N 氢氧化钠和9份蒸馏水混合均匀，即可 使用 将酶标准液（3.0mmol/L）取出1ml加0.5ml 蒸馏水使酶标准备液浓度变为2.0mmol/L 2.ALT标准曲线的绘制 （1）按表1向各管加入相应试剂。


表一：
管号 0 1 225
25 50 28
2 200
50 50 57
3 175
75 50 97
4 150
100 50 150
基质液（ul） 250
2.0mmol/L 标准液（ul） 蒸馏水（ul） 50 活力单位 （U） 0
2.混合37℃水浴30分钟，然后各管加显色剂250 μL， 37℃水浴20分钟取出， 各管加稀释氢氧化钠2.5ml,室温放置3分钟上机波长510nm测定. 3.以吸光度值为纵坐标，卡门氏单位为横坐标，各标准管的吸光度值对活性单 位作图，即为标准曲线。
3. 标本的测定 按表2操作。

表二：
对照管 基质液（ul） 样品（ul） 显色剂 50 250 μ L 混合37℃水浴30分钟 250 μ L 样品管 250 50
基质液（ul） 37℃水浴20分钟
稀释氢氧化钠
250
2.5ml 2.5ml
室温放置3min，在波长510nm处，以蒸馏水调零，读取各 管吸光度。
血清丙氨酸氨基转移酶测定（赖氏法）
【实验要求】 掌握血清丙氨酸氨基转移酶测定（赖氏法）的 原理 操作方法及标准曲线的绘制； 了解试剂的配制和临床意义。

【实验原理】

L-丙氨酸与α -酮戊二酸在丙氨酸氨基转移酶 （alanine aminotransferase，ALT，EC 2.6.1.2）催化下生成丙酮酸和L-谷氨酸，加入 2，4-二硝基苯肼终止酶反应，并与丙酮酸生 成丙酮酸-2，4-二硝基苯腙，苯腙在碱性条件 下显红棕色，在波长510nm处读取吸光度， 即可计算出丙氨酸氨基转移酶的活性。
【计算】 以空白调零，测定管吸光度减去对照管吸光度 的差值为标本的吸光度，用该值在标准曲线上 查得ALT的卡门单位。 或者以对照管调零，直接读出测定管吸光度值， 用该值在标准曲线上查得ALT的卡门单位。



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【参考范围】 0～50卡门单位 【临床意义】 1.血清ALT活性增高可见于下述疾病：（1）肝胆疾病 传染性肝炎、肝癌、肝硬化活动期、中毒性肝炎、脂 肪肝、胆管炎和胆囊炎等；（2）心血管疾病 心肌梗 死、心肌炎、心力衰竭时的肝脏淤血、脑出血等；（3） 骨骼肌疾病 多发性肌炎、肌营养不良等。 2.一些药物和毒物可引起ALT活性升高 如氯丙嗪、异 烟肼、利福平、奎宁、地巴唑、水杨酸制剂、乙醇、 铅、汞、四氯化碳、有机磷等。停药后ALT活性就可下 降。