季花药培养经典

离体器官、 组织或细胞
脱分化 愈伤组织
再分化 根、芽
植物体
季花药培养经典
愈伤组织
季花药培养经典
三、影响植物组织培养的因素：
1、外植体的选取
未开花植物的茎上
不同植物的组织培养难度不同 部新萌生的侧枝
源自文库
同一种植物的不同组织培养难度不同
2、培养基的配制(MS培养基)
大量元素：C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S
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基本原理: 细胞的全能性
菊 基本过程: 脱分化 愈伤组织 再分化
花
的 影响因素： 材料性质、营养物质、
组
调节物质、环境条件
织 操作流程： 配制MS固体培 外植体的消毒
培
养基
养
栽培 移栽 培养 接种
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季花药培养经典
植物的花药培养在育种上有什
么意义？
缩短了
花粉粒（1N）
育种周期， 为新品种的
单倍体植株 （1N）
培育开辟了
新途径。
二倍体纯合子 植株（2N） 季花药培养经典
花的结构
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（一）被子植物的花粉发育
雄蕊
花丝 花药：囊状结构，内有很多花粉
花粉是由花粉母细胞（即小孢子母细胞）经 过减数分裂而形成的，因此，花粉是单倍体的 生殖细胞。
花粉的发育要经历：四分体时期、单核 期、双核期等阶段。
1、培养基的灭菌（高压蒸汽灭菌） 2、外植体的消毒（酒精、氯化汞） 3、接种的无菌操作（酒精、酒精灯——灼烧） 4、无菌箱中的培养； 5、移栽到消过毒的环境中生存一段时间。
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结果分析与评价
（一）对接种操作中污染情况的分析 （二）是否完成了对植物组织的脱分化和再分化 （三）是否进行了统计、对照与记录 （四）生根苗的移栽是否合格
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课题延伸（略）
练习
1.答：植物组织培养所利用的植物材料体积小、 抗性差，对培养条件的要求较高。用于植物 组织培养的培养基同样适合于某些微生物的 生长，如一些细菌、真菌等的生长。而培养 物一旦受到微生物的污染，就会导致实验前 功尽弃，因此要进行严格的无菌操作。
2.答：外植体的生理状态是成功进行组织培养 的重要条件之一。生长旺盛的嫩枝生理状况 好，容易诱导脱分化和再分化。
pH=5.8 温度控制在18—22℃ 每日光照12h
6、消毒
在培养的整个过程中，都需要是一个无菌环境
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四、实验操作
制备MS固 体培养基
配制各种母液 配制培养基 灭毒
外植体消毒
冲洗—酒精—无菌水冲洗— 氯化汞—无菌水冲洗至少三
次之上
栽培
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接种 培养 移栽
在整个操作过程中，是如何来实现无菌环境的？
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菊花的组织培养
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知识要点 1.植物组织培养的概念、原理、过程； 2.激素扛杆及其作用 3.外植体及其消毒过程比较 4. MS培养基与微生物的培养基比较
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5.菊花的组织培养的特定条件 6.花粉发育要经历的阶段(四分体时期、单核期、 双核期等) 7.确定花粉是否处于适宜发育期的方法 8.比较植物组织培养技术与花药培养技术的异同点
4、不同植物激素使用量
生长素/细胞分裂素比值 比值高时
比值低时
比值适中
结果
促根分化， 抑芽形成 促芽分化， 抑根形成 促进愈伤组织生长
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思考：以下培养基出现的现象反应了什么问题？
生长素 / 细胞分裂素
高 利于根和愈伤组织的形成
适中 利于根芽的分化
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5、pH、温度、光照（菊花组培）
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一、植物组织培养的概念
指植物的离体部分（包括任何器官、 组织、细胞或原生质体），在人工控制的 培养基及环境条件（温度及光照）下，得 以生长和分化成完整植株的一种无菌培养 技术。
又称：植物离体培养
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植物组织培养原理：
植物细胞的全能性
概念：细胞的全能性是指已分化的细胞具有 发育成完整个体的潜能。
• ②三核花粉粒：有些植物的花粉，在成熟前， 生殖细胞进行一次有丝分裂，形成两个精子， 这样的花粉在成熟时，含有一个营养核和两个 精子。
• ③两个精子和一个营养核的基因型相同。
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（二）产生花粉植株的两种途形径成原因：主要 取决于培养基中 的激素的种类及 其浓度的配比
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体细胞胚（胚状体）： 在组织培养过程中，某些体细胞在
微量元素：B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co
有机物：甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等
植物激素：生长素、细胞分裂素、赤霉素等
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3、不同植物激素使用顺序
使用顺序
实验结果
先生长素， 后细胞分裂素
有利于细胞分裂但不分化
先细胞分裂素， 后生长素
细胞既分裂也分化
同时使用
分化频率提高
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（一）被子植物的花粉发育
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1花粉母细 减分 4个小孢子(小孢子
胞（2n）
四分体)（n）
单核居中期（n）
有分 单核靠边期（n）
1个花粉管细胞核（n）
1个生殖细胞核（n） 有分
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2个精子
注意：
• ①二核花粉粒：成熟的花粉粒中，只含花粉管 细胞核和生殖细胞核。（精子在花粉管中形成）
原因：是生物体的每一个细胞都含有该物种 所特有的全套遗传物质
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二、植物组织培养的基本过程
阅读32页解决下列问题：
基因的选择性表达
1. 什么叫分化？其实质是什么? 2. 什么叫脱（去）分化、再分化？ 3. 愈伤组织的细胞有什么特点？ 4. 如何控制细胞的脱分化与去分化？
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·
二、植物组织培养的基本过程
形态上转变为与合子发育成的胚非常相 似的结构，发育过程亦与合子胚类似， 被称为体细胞胚（胚状体）。
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（三）影响花药培养的因素
1、材料的选择 不同植物 同一植物的不同生理状况（花期早期－初花期） 合适的花粉发育期（单核居中期与靠边期之间） 此外，植株生长条件、材料低温预处理、接种
密度等 2、培养基的组成
某些植物的花粉细胞核不易着色， 采用焙花青-铬矾法，这种方法能将花粉细胞核染成 蓝黑色。
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实验操作
材料选取
材料和 消毒
接种和 培养
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（一）材料选取
月季的初花期。 选择合适的花粉发育时期也是提高诱导成功率的
重要因素。一般来说，在单核期，细胞核由中央移向 细胞一侧的时期，花药培养成功率最高。
通过镜检来确定其中的花粉是否处于适宜的发育期。 最常用的方法：醋酸洋红法。