流式细胞术详解 一. 流式细胞术概述 流式细胞术(Flow Cytometry, FCM)是七十年代发展起来的高科学技术 ,它集计算机技术、激光技术、流体力学、细胞化学、细胞免疫学于一体, 同时具有分析和分选细胞功能。它不仅可测量细胞大小、

流式细胞术 流式细胞术是一种生物学技术，用于对悬浮于流体中的微小颗粒进行计数和分选。这种技术可以用来对流过光学或电子检测器的一个个细胞进行连续的多种参数分析。 流式细胞术（Flow CytoMetry，FCM）是对悬液中的单细胞或其他生物粒

—高流速：一般用于定性分析，如免疫分型。采 集速度快,但分辨率低.—低流速：一般用于对分辨率要求较高的分析， 如DNA分析。激光延迟（laser delay）Laser 1 Laser 2液滴延迟（drop delay）颜色补偿—采用合适的

FCM ApplicationsFCM Principles FCM ApplicationsT cells detection（Ficoll密度梯度离心法）T cells detection• Ficoll密度梯度离心法 外周血/脾脏细胞

分为三大类： 第一类－－台式机光路调节系统固定，自动化程度高，操作简便，易学易掌握,适合 用于临床第二类－－大型机科研型，分辨率高，可分选用于培养，可选配多种激光器，更灵活第三类－－新型流式细胞仪装配有2～4根激光管，同时检测15个参数，高

流式细胞术---原理、操作及应用生物化学与分子细胞生物学系 流式实验室 地址：西7楼107室 电话：63846590-776423教学参考书• 实用流式细胞术彩色图谱。王树奎、周振英主编。2004.4• 临床流式细胞分析。王建中主编。上海科

圈门去除细胞碎片 分析细胞凋亡圈门去除粘连体， 分析细胞周期细胞凋亡分析Annexin V-PE/7-AAD双染色法双阴：活细胞Annexin V-PE单阳：早期凋亡细胞双阳：晚期凋亡细胞 7-AADd单阳：坏死细胞人外周血淋巴细胞亚群检测

流式细胞术检测淋巴细胞表面标记 一、实验目的 1.了解流式细胞仪的组成、原理及应用：初步了解流式细胞仪的工作元件及基本应用原理；能够认识流式细胞术的应用，特别是常用的一些功能。 2. 熟悉用流式细胞术检测小鼠脾脏T细胞表面标志的基本流程 3

FCM的单细胞照明技术：这种椭圆形光斑的检测区保证样 11 本中的细胞是一个一个分别受到最大光照。（三）光收集系统• 滤光片的组成– 长通滤片(LP)：只允许特定波长以上的光束通过； – 短通滤片(SP)：只允许特定波长以下的光束通过； –

FITC最便宜，适用于强表达抗原• 间接标记 适用范围广, biotin-avidin不适合弱抗原的检测数据处理系统流式细胞分析的信息• • • • • • Forward scatter(FSC) Side scatter(SSC) FL

Flow cytometry of cell cycle G1 期细胞主要进行 RNA 和蛋白的合成, DNA 数 目为 n. S 期 DNA 开始复制，直到复制结束进入 M 期， DNA 数目从 n 变为 2n. G2 期主要是 RNA

①相同种属来源②相同免疫球蛋白及亚型③相同荧光素标记 ④相同剂量和浓度 ⑤但由未免疫动物血清纯化而来 •用此消除由于抗体非特异性结合到细胞表面Fc受体而产 生的背景染色C、阳性对照 Positive Control • 设置阳性对照是为了检

流式细胞术系列讲座之——概述流式细胞术应用概述主要内容 流式细胞术的一般介绍 流式细胞术在临床检测和科研中的应用免疫学检测和科研应用肿瘤学检测和科研应用 凋亡分析血液学检测和科研应

五、细胞固定 固定的目的是使细胞或组织硬化足以 承受包埋和切片的处理。固定也使得细胞 膜变得通透，使染料能够进入，获得最佳 染色效果、并通过抑制微生物作用和自溶 保护细胞样品。作为流式细胞术，细胞以 悬浮状态使用，常用的固定剂有乙醇、甲 醇

2、阳性染色对照 用现有试剂和方法检测已知表达某种特 异性抗原的细胞即为阳性细胞。如检测血小板CD62P时， 可用被ADP诱导活化血小板作为CD62P检测的阳性对照细 胞。3.阴性染色对照已知不表达某种抗原的细胞即为阴 性细胞群，如CD3/

看图技巧： 1.先看横、纵坐标，了解检测目的； 2.看图形分布，直方图峰形越往右移，代表其荧光强度越强；3.M1的确定是根据阴性对照细胞的基础荧光域值设定的，峰形右移，荧光信 号大

STUMC 2014.10.13光源与光学系统• 流式细胞仪的检测是基于对光信号（散射 光和荧光）的检测来实现的，光源与光学 系统由激发光源、一系列光通过和光反射 的镜片组成STUMC2014.10.13• （1）激发光源：弧光灯和激光器

原染色，细胞内标记需要固定、破膜等步骤 1.细胞表面抗原的标记法（外周血为例 ） 全血50ul（5×105）+10ul相应抗体→避光孵 育15-30min → 溶血素→ 室温10min → PBS洗1次 →上机分析（1% 多聚甲醛固定）。2

流式细胞术的临床应用一、在肿瘤学中的应用这是FCM在临床医学中应用最早的一个领域。首先需要把实体瘤组织解聚、分散制备成单细胞悬液，用荧光染料(碘化吡啶PI)染色后对细胞的DNA含量进行分析，PI可以与细胞内DNA和RNA结合，采用RNA抑制

双色直接染色设门：选择要分析的细胞群体设定阴性、阳性范围第 二 部 分流式细胞术在临床检测和科研中的应用一、免疫学检测和科研应用1、细胞表面分子标记（以淋巴细胞亚群检测为例）原理ห