蛋白质的修饰和表达

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第四讲 蛋白质的化学修饰

pH：多数情况下，在蛋白质等电点附近的pH范围内，增加 ：多数情况下，在蛋白质等电点附近的 范围内， 范围内 pH可以提高反应速率，降低 可以减小反应速率。 可以提高反应速率， 可

影响蛋白质化学修饰反应进程的因素： 1.蛋白质功能基的反应性；2.修饰剂的反应性。主要内容化学修饰的原理 蛋白质侧链的修饰 蛋白质肽链的交联 蛋白质化学修饰的应用 蛋白质化学修饰的

a3意义确定分子大小 从氨基酸组成分析的结果求得准确的氨基酸组成 验证已测定的一级结构是否正确a4常用测定分子量的方法SDS-PAGE 凝胶过滤层析 质谱 核磁共振a5一、SDS－

9蛋白质的化学修饰全解

蛋白质化学修饰技术是现代生物技术发展的一个重要方向，以聚乙二醇(PEG)为修饰剂和以蛋白质为修饰剂是该技术的两个主要类型。PEG修饰技术发展成熟，已经有几种PEG-蛋白质药物经过FDA认证。为了有效地检测和分离修饰产物，本论文首先用十二烷基

2007-9-8~ 2007-9-18 2007-10-9~生产周期10天32007100012007-10-21PEG化重组人生长激素，批产量1-10g；PEG化降纤酶，批产量6

缺点：产生的二醛几乎全部与赖氨酸侧链反应，不能与 更多类型侧链反应。嘌呤核苷酸的烷基卤化衍生物也可看作是亲和试剂，各种亲和侧链如Cys、His、Lys、Met等能与试剂上的卤原子反

蛋白质侧链的修饰2.1 特定的AA残基侧链基团的反应试剂 （4种方法） 2.2 巯基的化学修饰 2.3 氨基的化学修饰（3种方法） 2.4 羧基的化学修饰 2.5 咪唑基的化学修饰

O C HOCH3 -H2O NHO ENZ— N C HCH2 OPO3H-+H2ONaBH4PLPO ENZ—NH CH2 CH3 NH CH2 OPO3H-二、精氨酸

具有受体功能的酪氨酸 蛋白激酶 (receptor protein tyrosine kinase, RPTK)。包括三个结构域：胞外的配体 结合区，细胞内部具有酪氨酸蛋白激酶活

（一）试剂的选择选择试剂在很大程度上要依据修饰目的。对氨基 的修饰修饰所有氨基，而不修饰其它基团; 仅修饰α-氨基；修饰暴露的或反应性高的氨基，以及 修饰有催化活性的氨基等。修饰的

1.烷基化试剂特别是碘乙酸和碘乙酰胺是 很重要的-SH修饰剂。修饰产物相当稳定， 易于分析。此类试剂还能与Met\Lys\His 反应。2.有机汞试剂是最早使用的-SH修饰剂之一，

.PEG是由乙二醇单体聚合而成的线性高分子材料,分子组成为 HO-CH2-CH2-(O-CH2-CH2-O)n-CH2-CH2-OH; PEG链还可以与 马来酸酐进一步共聚形成梳状

形成了重叠链，从而在随后的扩增反应中 通过重叠链的延伸，将不同来源的扩增片 段重叠拼接起来。实用文档实用文档为提高葡萄糖异构酶的热稳定性，用双引 物法对葡萄糖异构酶基因进行了体外定

修饰机制：选择性的试剂或者亲和标记试剂与 侧链上的特定功能团发生化学反应 修饰类型：巯基、氨基、羧基、二硫键3（一）巯基的修饰特点：亲核 最容易发生反应的侧链基团 修饰试剂 烷基化

TNF-α是一种颇有价值的肿瘤治疗药物,它具有协同的 抗肿瘤效能:一方面直接表现为对肿瘤细胞的细胞毒作用;另 一方面可激活宿主的抗肿瘤应答并选择性地引起肿瘤组织 内部的微循环障碍。

▪ 许多蛋白质要分别经过甲基化、羟基化、糖基化、羧基化、 磷酸化、乙酰化、脂酰化和异戊烯基化等共价修饰。▪ 本章将重点介绍蛋白质可逆磷酸化作用。新合成多肽链加工▪ 原核生物和真核生