核酸样品质量将直接关系到实验的成败。分离纯化核酸的原则1. 应保证核酸一级结构的完整性完整的一级结构是保证核酸结构与功能研究的最基本要求① 减少化学因素对核酸的降解：a. 温度不要过高；b. 控制pH值范围(pH值5-9);c. 保持一定离
2. 排除蛋白质、脂类、糖类 等其他分子的污染 3. 无其他核酸分子 的污染（如抽提 DNA分子时应 去除RNA 分子）。核酸的性质1. DNA、RNA 的理化性质特点：① 核酸分子中既含有酸性基团（磷酸基）也含有碱性基团 （氨基），因而核
➢ 提高盐(KAc或NH4Ac)浓度并降低温度（冰浴），使蛋白 质及多糖杂质沉淀，离心后除去沉淀；➢ 上清液中的DNA用酚/氯仿抽提，反复抽提后用乙醇沉淀 水相中的DNA。基因组DNA－其它方法根据细胞裂解方式的不同有：➢ 物理方式：玻璃珠
EXPERT IN NUCLEIC ACID EXTRACTION编辑ppt14植物材料植物CTAB法流程图裂解液酒精沉淀液氮研磨抽提离心洗涤DNA溶液细胞裂解上层溶液干燥溶解EXPERT IN NUCLEIC ACID EXTRACTIO
• 凝胶电泳：利用了支持介质形成的网状结构使不同大小的大分子物质得以分离并在保留于凝胶中，在不同位置形成条带。• 电泳迁移率的大小与物质的带电量与分子量的比值（荷质比）相关。• 在中性pH或碱性缓冲液中，核酸分子骨架上的磷酸基团在水中的解离
（4）精胺精胺不是有机溶剂，但可快速有效沉淀DNA。原理是： 精胺与DNA结合后，使DNA在溶液中结构凝 缩而发生沉淀，并可使单核苷酸和蛋白质 杂质与DNA分开，达到纯化DNA的目的。2.3.3 核酸沉淀的温度和时间低温长时间沉淀，易导致盐
➢ 酚的优点：1. 有效变性蛋白质；2. 抑制了DNase的降解作用 ➢ 酚的缺点： 能溶解10-15%的水。最后用氯仿抽提：克服酚的缺点；加速有机相与液相分层；去除核酸溶 液中的迹量酚。（酚易溶于氯仿中）用酚－氯仿抽提细胞基因组DNA时，
2020年9月28日5• 3.氯仿能加速有机相与水相分离，去除植物 色素和蔗糖。用氯仿抽提以去除迹量酚。• 4.用水饱和的乙醚抽提最后一次，彻底去除 迹量酚和氯仿。然后68℃水浴10分钟蒸发迹 量乙醚。• 5.异戊醇可减少蛋白质变性操作过程
多数生物体的RNA分子是单链线状。而且， 不同类型的RNA还有不同的结构特点。如 真核生物mRNA多数有PolyA尾巴。至于 病毒、类病毒所含的DNA和RNA分子则形 式多样，有双
166. DNA提取过程中ຫໍສະໝຸດ Baidu质去除(5) DNA 沉淀重悬于30 %乙醇,4 ℃过夜先沉淀多糖,离心取上清加乙醇至80 %重新沉淀DNA (6) 常温25o
7②纯度鉴定 a 紫外分光光度法： 测A260／A280的比值判断是否有蛋白质污染 （为什么） A260／A280比值为1.8，纯DNA A260／A280比值为2.0, 纯RNA
液氮：组织破碎、裂解细胞 EDTA，Tris/HCl: 缓冲体系使溶液pH不会变化太大，DNA在这一体系中呈稳定 态，EDTA螯合Mg 2+或Mn 2+离子，抑制D
2.2.2 加入SDSSDS除有破胞和抑制核酸酶的作用外，还具 有使核酸从蛋白质上游离出来的功能；精选课件ppt122. 2.3 酚/氯仿抽提酚／氯仿混合使用能增加去除蛋白的效果， 并对核酸酶有抑制作用。氯仿比重大，能加速有机相与水相分层，
Fra Baidu bibliotek 磁珠法核酸提取• 洛阳惠尔纳米科技有限公司• 植物基因组DNA提取试剂盒 • 动物组织基因组DNA提取试剂盒 • 动物病毒（DNA/RNA）
解决的办法： 1、用于分离RNA的耗材，如有可能必须采用高压灭菌； 2、用于分离RNA的试剂尽量采用DEPC水配制，（DEPC是RNase的强烈 抑制剂）3、操作人员务必佩戴一次性
需要量大，一般要求低温操作。返回（2）异丙醇优点： 需体积小，速度快，适于浓度低、体积大的DNA样品沉淀。一般不需低温长时间放置。 缺点：易使盐类、蔗糖与DNA共沉淀．异丙醇难以挥
EB与DNA的结合2. 纯度鉴定紫外分光光度法： 主要通过A260与A280的比值来判定有无蛋白质的污染。比值升高或降低 均提示制备的核酸纯度不佳。1.DNA或RNA的定量 OD2
• 乙醇挥发时间一定不要打折扣。 • 加热时要将样品封好口，以免过热时管子盖崩开进水。a23核酸提取的质量控制DNA或RNA链上碱基的苯环结构在紫光区具有较强吸收， 其吸收峰在26
• ②可分离双链DNA分子的两条互补链。• ③分离浮力密度不同的DNA分子或其他分子颗粒， 如图1。2020/10/1611图1 氯化铯梯度纯化λ噬菌体噬菌体在1.45g/ml与1.50g/ml氯化铯界面之间形成一肉眼可见的带。在1.45g
